杨树叶绿体3′rps12基因,rps7基因和ndhB基因片段的克隆及序列分析

通过烟草叶绿体相关序列设计引物 ,从杨树的叶绿体基因组中克隆出 2个相邻的DNA片段 .经分析发现 ,这 2个DNA片段包含核糖体蛋白 3′rps12、rps7基因和NADH脱氢酶第二亚基ndhB基因片段 .利用DNAMAN等软件 ,将扩增到的杨树叶绿体DNA片段与烟草、拟南芥、玉米和黑松的相关序列进行比较 ,证实所扩增的片段具有较高的保守性 ,尤其是在这 3个基因的编码区 ,同源性均在 90 %以上 .插入或缺失常发生在基因间隔区 ,同源性在 80 %左右 ;对其编码区所推导的氨基酸序列进行了比较 ,同源性均在 92 %以上 .首次克隆了杨树叶绿体的部分DNA序列 ,详细报道并分析了杨树 3′rps12、rps7基因和ndhB基因片段及其边界序列信息 .所报告的基因序列均已登录GenBank .

RPS12基因表达与胃癌进展及淋巴结转移的研究

目的探讨核糖体蛋白S12(RPS12)基因表达与胃癌进展及淋巴结转移的关系。方法采用原位杂交方法检测39例进展期胃癌组织、17例正常胃黏膜中RPS12mRNA表达。结果胃癌中RPS12mRNA表达阳性表达率(87.2%)显著高于正常胃黏膜(17.6%),P<0.01;淋巴结转移阳性的胃癌中RPS12mRNA表达阳性率(96.2%)显著高于淋巴结转移阴性者(69.2%),P<0.05。结论RPS12基因高表达与胃癌进展及淋巴结转移有关。

结核分枝杆菌rps12基因的克隆及核酸序列的分析

目的扩增结核分枝杆菌rps12基因,并将其克隆至质粒pGEMT中进行核苷酸序列特性分析。方法以结核菌标准菌株H37Rv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌rps12抗原基因,将其重组到pGEM-T载体后进行酶切鉴定及序列测定和生物信息学分析。结果成功扩增出结核分枝杆菌rps12抗原基因,测序表明该片段开放阅读框由375bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为99%。结论成功克隆rps12基因,经DNA测序证实,该片段阅读框完整,该基因的获得为其原核表达及相关研究奠定了基础。

蕨类植物叶绿体rps12基因的分子进化研究

以68种蕨类植物和2种石松类植物的rps12基因为对象,在系统发育背景下,结合最大似然法,使用HyPhy和PAML软件对该基因进行进化速率和适应性进化研究。结果显示:位于IR区的外显子2~3,其替换率明显降低,rps12基因编码序列的替换率也随之降低,且rps12基因密码子第3位的GC含量明显升高;在蕨类植物的进化过程中,3′-rps12更倾向定位于IR区,以保持较低的替换率;rps12基因编码的123个氨基酸位点中,共检测到4个正选择位点和116个负选择位点。研究结果表明基因序列进入到IR区后,显示出降低的替换率;强烈的负选择压力表明RPS12蛋白的高度保守性以及rps12基因的功能和结构已经趋于稳定。

RNA干扰抑制RPS12基因表达对胃癌细胞凋亡的影响及分子机制探讨

目的:探讨RPS12基因特异的RNA干扰对胃癌BGC823细胞凋亡的影响及机制。方法:设计并构建RPS12特异性shRNA表达载体(RPS12-shRNA),以Lipofectamine2000介导将RPS12特异性shRNA及Scram-ble-shRNA表达载体分别转染胃癌细胞。RT-PCR方法检测BGC823细胞中RPS12基因及凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA的表达,流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析RNA干扰对细胞凋亡的影响。结果:RT-PCR结果显示,RPS12-shRNA表达载体转染第3、5、7天后,RPS12基因表达低于对照组,其中第5天下调最明显。RPS12特异性RNA干扰第5天、第7天后,Bcl-2 mRNA表达明显下调,BaxmRNA表达无明显改变。流式细胞术分析结果显示,RNA干扰RPS12基因第7天后,胃癌细胞凋亡率(17.84%)明显高于对照组(1.89%)。结论:RNA干扰RPS12基因促进胃癌细胞凋亡作用可能是其作为上游基因通过下调Bcl-2基因表达而实现的。

RPS12基因表达下调对胃癌细胞生物学特性影响的研究

[目的]初步探讨RPS12基因对于胃癌细胞生长、增殖,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等影响。[方法]RPS12基因特异的RNA抗体(RNAi)载体通过脂质体介导法转染RPS12基因高表达MKN45细胞,后经G418压力筛选法获得稳定转染的细胞系,经过RT-PCR法及Western-blot法证实。而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验法等方法分析稳定转染株相关生物学特性的变化,每种检测实验均设立RNAi载体转染细胞实验组、点突变对照组、MKN45细胞空白对照组。[结果]稳定转染的RPS12基因RNAi细胞系经过免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western-blot法证实,表达抑制率可达68%左右。与对照组细胞相比,实验组细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P<0.05);各对照组之间无显著差异,流式细胞仪检测细胞周期显示实验组G2-M期比例显著低于对照组,S期比例显著高于对照组(P<0.05),实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。平板克隆形成实验结果显示RPS12RNA干扰组克隆形成率显著低于对照组(P<0.05);细胞迁徙实验结果提示实验组穿膜率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]RPS12基因可能具有促进细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,降低RPS12基因表达可能抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。