拟南芥RRP41L蛋白的原核表达与纯化

采用PCR技术克隆得到拟南芥类核糖体RNA加工蛋白41(Ribosomal RNA-processing protein 41-LIKE,RRP41L)基因,然后构建其原核表达载体,并对其进行诱导和纯化,以期获得较大量的重组蛋白.结果表明,试验获得了拟南芥RRP41L基因的全长编码序列(coding sequence,CDS)(771 bp),将其与原核表达载体PGEX4T-1连接构建了原核表达载体PGEX4T-RRP41L,将PGEX4T-RRP41L质粒导入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中,在37℃条件下,用1 mmol·L-1IPTG诱导8 h后体外纯化融合蛋白.SDS-PAGE电泳结果显示,在此诱导条件下,PGEX4T-RRP41L重组质粒可表达出较大量的重组蛋白,蛋白质相对分子质量大小为53.4 k D,除去PGEX4T-1自身表达相对分子质量大小为26.0 k D后,与RRP41L编码的蛋白质相对分子质量约为27.4 k D的大小一致.

拟南芥核酸外切体亚基RRP41L与RRP42及RRP45B的互作关系

在真核生物中,核酸外切体(exosome)是一个由9个核心蛋白亚基组成的在进化上十分保守的大分子复合物,具有加工和降解RNA的重要功能。为了了解影响拟南芥生长发育的核酸外切体亚基RRP41-LIKE(RRP41L)与其他外切体亚基之间的互作关系,本文利用酵母双杂交和荧光素酶互补技术从体外和体内两个方面验证了RRP41L与另外两个核酸外切体亚基RRP42及RRP45B的互作关系。结果显示RRP41L不能与RRP42互作,而能与RRP45B互作。