不同剂量RT-A灌胃给药后其活性代谢产物RT-B在大鼠体内的药动学

目的研究大鼠分别以60、120、240 mg.kg-1剂量灌胃给予I类新药RT-A后,其活性代谢产物RT-B的药动学。方法采用RP-HPLC法测定RT-B在大鼠体内的血药浓度,用DASS2.0药物动力学程序求算其药动学参数。结果主要药动学参数为:tmax分别为(18.000±0.000)、(18.000±1.265)、(18.000±0.000)h,ρmax分别为(3.270±0.563)、(5.772±1.287)、(8.525±1.173)mg.L-1,AUC(0→t)分别为(69.881±11.561)、(107.913±16.591)、(165.181±21.411)mg.h.L-1,AUC(0→∞)分别为(71.843±12.454)、(109.894±15.278)、(173.847±24.602)mg.h.L-1,t1/2分别为(10.276±1.797)、(9.641±1.961)、(11.210±2.985)h。结论RT-B在大鼠体内呈二室模型分布,药时曲线呈现双峰,药时曲线下面积与给药剂量呈线性正相关。

载脂蛋白B联合颈动脉内膜中层厚度对冠心病的预测价值

目的探讨血清载脂蛋白B(apoB)联合颈动脉内膜中层厚度(CIMT)在冠心病中的预测价值。方法回顾性分析2020年1—6月在右江民族医学院附属医院就诊的胸痛疑似冠心病并行冠脉造影的患者210例,根据冠脉造影结果,分为冠心病组和非冠心病组。所有患者检测血清apoB、行颈动脉彩超检查。分析两组患者血清apoB、CIMT、斑块差异,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析apoB、CIMT以及二者联合对冠心病的预测价值。结果冠心病组血清apoB、CIMT、颈动脉斑块比例明显高于非冠心病组,差异有统计学意义(P<0.05);冠心病多支病变患者血清apoB、CIMT明显高于单支病变患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清apoB和CIMT预测冠心病的价值差异无统计学意义(P>0.05)。两者联合预测冠心病的ROC曲线下面积为0.865,诊断的敏感度和特异度分别为93.20%和63.30%,两者联合预测冠心病的价值优于单独使用血清apoB、CIMT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清apoB联合CIMT能提高对冠心病的预测价值。

早春猪舍三带喙库蚊自然感染乙脑病毒调查

目的 了解温带地区早春猪舍三带喙库蚊自然感染流行性乙型脑炎病毒情况。方法 于 2 0 0 1和 2 0 0 2年 3月 1日～ 5月 31日 ,每日 18:0 0至次日 6 :0 0 ,对上海奉贤地区陈河洪猪舍采用诱蚊灯诱获蚊虫 ,应用逆转录一聚合酶联反应技术 (RT -PCR)进行乙脑病毒鉴定。结果 2 0 0 1年共诱获成蚊 4 4 2 8只 ,2 0 0 2年 82 6 8只 ,2年蚊种鉴定结果一致 ,均分为 4属 8种。 2 0 0 1年和 2 0 0 2年的优势蚊种均为三带喙库蚊 ,构成比分别为 5 7 81%和 72 0 4 % ;吸血率比较有显著性差异 (χ2 =171 2 7,P <0 0 1)。 2 0 0 1年 5月 2 2日首先在三带喙库蚊检出乙脑病毒 ,检测 99批次标本 ,阳性率为 4 9 4 9% ;2 0 0 2年 5月 19日也是首先在三带喙库蚊检出乙脑病毒。结论 在温带地区蚊虫自然感染乙脑病毒于 5月中下旬开始 ,2年均以三带喙库蚊首先染毒 ,其带毒率明显高于其他蚊种 。

鸡传染性支气管炎病毒793/B RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank已发表的鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)793/BS1基因序列,设计1对引物,扩增891bp特异性核酸片段,建立了检测IBV793/B的RT-PCR方法。特异性试验结果表明,IBV793/B能扩增出891bp的核酸片段,而IBVM41、H120、H52毒株以及新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)均无特异性条带出现。敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为10pg的模板。上述结果表明,本试验所建立的RT-PCR方法敏感性高、特异性强。利用建立的RT-PCR方法对从山东省分离的8株疑似鸡IBV793/B进行检测,结果7株为阳性。该方法的建立为IBV793/B的诊断及流行病学调查提供了可靠的方法。

Cst B基因在90日龄大白猪不同组织中的表达研究

采用RT-PCR技术,对90日龄大白猪心肌、肝脏、胃、肾脏、肺、大肠、小肠、背肌和腿肌组织中表达情况进行研究,得到Cst B基因在肾脏、肺、大肠和小肠中有较高的表达,而在心肌、背肌和腿肌等肌肉组织中表达量相对较低。

乙型肝炎病毒DNA聚合酶逆转录酶蛋白反式调节基因1的克隆化研究

目的 应用抑制性消减杂交 (SSH)技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒 (HBV)DNA聚合酶(DNAPolymerase)逆转录酶 (RT)区蛋白的反式调节新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 以HBVDNA聚合酶RT基因的表达质粒pcDNA3 1( -) RT转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1( -)为平行对照 ,提取mRNA并进行SSH分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆RT反式调节作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被HBVDNA聚合酶逆转录酶RT反式激活 ,故命名为DNA多聚酶反式激活蛋白 1(DNAPTP1) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY45 0 3 89。DNAPTP1基因的编码序列全长为 43 5个核苷酸 (nt) ,编码产物由 14 4个氨基酸残基 (aa)组成。结论 HBVDNA聚合酶逆转录酶RT在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要的作用 ,最近的研究表明RT蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的免疫应答水平 ,引起病变。逆转录酶RT反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究RT蛋白的分子生物学机制和探索新型治疗?

1553B总线控制器和远程终端软件设计

15 5 3B总线最早是军用飞机上的专用总线 ,现在不仅在军用上 ,而且也在民用上得到了广泛应用。本文在简要介绍 15 5 3B协议的基础上 ,详细介绍了15 5 3B总线控制器和远程终端软件设计 。

人HMGB1 B Box的表达及其生物活性

经RTPCR从人新鲜扁桃体组织中扩增人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的Bbox(88～162残基)的cDNA,构建于载体pUC19,经测序后与GenBank中报道的已知序列完全一致,再构建于原核表达载体pQE80LDHFR中,表达并鉴定目的蛋白.经Ni2+亲和层析柱、多粘菌素B层析柱纯化获得高纯度的DHFRHMGB1Bbox蛋白,然后将此重组HMGB1Bbox加入到人外周血单核细胞(PBMCs)中,37℃,5%CO2下,刺激PBMCs6h,用ELISA检测PBMCs释放TNFα、IL6的量,经检测后证明纯化后的重组HMGB1Bbox能显著地刺激PBMCs释放致炎因子TNFα、IL6.HMGB1Bbox的表达及其生物活性的初步研究,为进一步研究HMGB1Bbox的作用机制以及新型抗炎制剂的研发奠定基础.

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒 (CVB)的外壳蛋白基因序列设计、合成引物 ,以感病组织和健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,结果从感病组织中扩增出与预期的 776bp大小一致的目标片段 ,而健康组织无此扩增产物 ;将PCR产物插入pGEM -T载体克隆并测序 ,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到 85 % ;将感病组织总RNA以 10x梯度稀释成不同浓度 ,测出RT -PCR检测CVB的灵敏度为 10 -4x ;PCR产物克隆作为RT -PCR反应的阳性对照 ,解决了毒源保存和传播的问题 ,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT

黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体的调节

目的:研究黄芩苷对人淋巴细胞Toll样受体(TLR)的调节,探讨其在免疫调节方面的作用。方法:1.尼龙毛分离法分离人外周血T和B细胞后使用UF-50流式分析寻找最佳黄芩苷作用浓度;2.采用实时定量荧光RT-PCR,分析在最佳黄芩苷作用浓度处理前后TLRs的表达情况;3.通过加入鼠抗人TLR4单抗进行受体抑制实验并应用实时定量荧光RT-PCR探讨黄芩苷对TLRs的调节位点。结果:1.1 mg/ml的黄芩苷在体外可以显著促进人T、B淋巴细胞增殖(P<0.05);2.使用1mg/ml黄芩苷相对于未用黄芩苷处理的T、B细胞,其TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达均有显著增加(P<0.05),T细胞增加倍数分别为21、15、57和66倍,B细胞增加的倍数分别为24、20、61和63倍,而TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNAs表达变化不显著(P>0.05);3.在1 mg/ml黄芩苷作用下人T、B细胞TLR3、7、8和9 mRNA在12小时时表达已开始增加,除T细胞的TLR7 mRNA表达在48小时时略有下降外,其余表达基本一直持续增加,至48小时到达峰值;4.人T、B细胞在被黄芩苷作用前使用鼠抗人TLR4单克隆抗体封闭,会显著降低黄芩苷对TLR3、7、8和9 mRNA表达的诱导作用(P<0.05),T细胞下降比率分别为47.6%、66.7%、50.9%和45.5%;B细胞下降比率分别为50.0%、45.0%、50.8%和50.8%。结论:1.黄芩苷在体外能显著促进T、B淋巴细胞增殖;2.人外周血T、B细胞组成性表达含量差异较大的TLR1-10 mRNA,黄芩苷在体外可以显著上调人T、B淋巴细胞TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNAs的表达,但对TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNAs未见明显影响;3.黄芩苷可能通过TLR4发挥对人天然免疫能力的调节。

乙型肝炎患者外周血B淋巴细胞CD5mRNA表达水平的研究

目的 建立CD5mRNA的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定法 ,探讨外周血B淋巴细胞CD5mRNA水平与乙型肝炎慢性化和严重化的关系。方法 运用RT PCR技术 ,建立了B淋巴细胞中CD5基因mRNA表达水平的半定量测定方法 ,对急、慢性乙型肝炎和肝炎后肝硬化患者进行了研究。结果 急性乙型肝炎患者组外周血B淋巴细胞中CD5mRNA的水平与正常对照组无显著性差别 ,其余各乙型肝炎患者组均显著高于对照组。且肝炎后肝硬化组 >慢性乙型肝炎组 >急性肝炎组(P <0 0 1)。结论 外周血B淋巴细胞CD5mRNA水平与乙型肝炎的发病和慢性化发展密切相关。

不同休眠特性小麦中TaGAMyb-B基因的等位变异及其表达特性

GAMyb基因编码蛋白作为GA信号途径的转录激活因子,对促进植物种子的萌发具有重要作用。为探讨GAMyb基因是否为导致小麦不同休眠特性的又一个原因,利用GAMyb基因在小麦3A、3B和3D染色体上的基因组序列设计了基因特异性引物,对不同休眠特性的白粒小麦中TaGAMyb-B基因的等位变异和转录本的表达特性进行了研究。结果表明,TaGAMyb-B基因在不同休眠特性的材料中存在SNPs和Indel的序列差异。根据不同休眠特性小麦材料TaGAMyb-B基因的序列差异,两个新的等位变异TaGAMyb-Ba和TaGAMyb-Bb被命名。进一步研究发现,两种不同等位变异的小麦材料在种子发育的不同时期TaGAMyb-B基因表达水平存在差异,说明TaGAMyb-B基因在不同休眠特性小麦材料中的等位变异影响了其表达。

胃癌中PDGF-B mRNA与蛋白的表达及其临床病理学意义

目的:研究PDGF-B基因与胃癌发生、发展的关系。方法:采用逆转录PCR与免疫组化方法(S-P法),对40例中晚期胃癌、20例早期胃癌和20例正常胃黏膜组织的PDGF-BmRNA与PDGF-B蛋白进行检测。结果:PDGF-BmRNA与PDGF-B蛋白在中晚期胃癌表达率分别为87.5%(35/40)、77.5%(31/40),在早期胃癌表达率分别为80.0%(16/20)、70.0%(14/20),明显高于正常胃黏膜组织表达率10.0%(2/20)、10.0%(2/20)(P<0.01);PDGF-BmRNA表达与肉眼类型、分化程度、淋巴结转移密切有关(P<0.05);PDGF-B蛋白表达与肉眼类型、分化程度密切有关(P<0.05)。结论:PDGF-BmRNA、PDGF-B蛋白在胃癌组织中高表达,并与胃癌的发生、发展,侵袭及淋巴结转移密切关系,可作为判断胃癌生物学行为和预后评估的重要指标。

用半定量RT-PCR法检测BⅢB4基因在绵羊皮肤组织中的mRNA表达

利用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,测定新吉细毛羊皮肤组织中BⅢB4基因mRNA表达水平,以18SrRNA为内标,分析相对表达量及其与羊毛细度的关系。通过探讨和优化PCR体系中退火温度、MgCl2浓度和循环次数等参数,建立了检测羊毛细度相关基因mRNA表达的半定量RT-PCR体系。用Independent Samples T Test分析BⅢB4 PCR产物与18SrRNA PCR产物电泳后的灰度比值,可知BⅢB4基因mRNA表达量对羊毛细度的影响。

HBV感染者红外敏感经穴贴敷对病毒载量影响的临床探索

目的:观察贴敷红外敏感穴位对慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中病毒复制的影响。方法:将27例CHB患者设为穴位贴敷治疗组,运用红外敏感穴位贴敷疗法治疗3周;另设空白对照组28例,不采取治疗措施;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法观察两组患者治疗周期前后HBV-DNA定量指标变化情况。结果:1贴敷治疗组患者治疗前后血清中HBV-DNA载量较空白对照组显著降低(P<0.05);2贴敷治疗组中初始HBV-DNA载量处于中低水平的患者疗效较好;3贴敷治疗组病毒载量呈次方下降的比例显著高于空白对照组。结论:红外敏感穴位中药贴敷能够有效降低患者乙肝病毒复制量,对提高慢性乙型肝炎患者临床疗效具有积极意义。

白介素8B型受体在大鼠脑垂体中的分布和表达

目的探讨白介素8B型受体interluekine8receptorBIL8RB在大鼠脑垂体中的分布和表达。方法用免疫组化法,观察该受体在垂体中的分布。提取组织和原代培养细胞的总RNA,用RTPCR检测该受体mRNA的表达。结果IL8RB+细胞主要分布于垂体前叶。测序结果证实,PCR产物为IL8RBmRNA。结论首次证实在大鼠脑垂体中有IL8B型受体的表达及其分布区。

老年大鼠耳蜗酪氨酸羟化酶及单胺氧化酶-B基因的表达

目的 检测老年大鼠耳蜗多巴胺(dopamine,DA)合成和降解过程中的关键酶——酪氨酸羟化酶(tyroxinehydroxylase,TH)及单胺氧化酶-B(monoamine oxidase-B,MAO-B)基因的mRNA水平变化,以便更好地理解听觉系统老化的机制。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RTPCR)的方法检测耳蜗组织TH及MAO-B基因mRNA的含量。结果 耳蜗组织TH及MAO-B基因mRNAR的水平,老年组均高于成年组,差异均有非常显著性意义(tTH=9.634,tMA0-B=8.108,P<0.01)。结论 在基因转录水平证明了老年大鼠耳蜗多巴胺系统合成和降解过程发生了紊乱,推测耳蜗多巴胺代谢的变化在老年性聋的发生机制中可能起一定的作用。

乙型流行性感冒病毒的基因快速检测

〔目的〕建立乙型流行性感冒病毒的核酸快速诊断技术。〔方法〕采用RT -PCR方法对乙型流感病毒的HA基因进行检测 ,我们对乙型流感病毒的HA基因保守区域设计相关引物 ,进行扩增 ,并作了特异性与灵敏度比较。〔结果〕该引物只能扩增乙型流感病毒的特异性片段 ,而对其它型别的流感病毒以及麻疹、风疹、腮腺炎病毒无交叉反应。检测的灵敏度一次PCR可达 1TCID50 ,二次PCR反应可达 0 .1TCID50 。〔结论〕采用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率 ,比采用MDCK细胞分离的阳性率更高 ,可达到迅速、正确地诊断乙型流感的实用目的。

猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法的建立与初步应用

[目的]建立1种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。[方法]根据JEV E基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,并对反应条件和反应体系进行了优化。[结果]该方法具有较高的灵敏度,其检测极限为0.5 pg;特异性试验表明其具有较高的特异性,对其他病毒性病原体均无扩增反应。与RT-Nested-PCR相比,2种方法检出率的符合率为90.9%。反应结束后可以通过添加化学发光剂进行可视化观察,大大缩短了检测时间。该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的猪JE的检测方法。[结论]成功建立了猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法,并在临床上进行了初步应用。

荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究

目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。