RTN4-C基因在肝癌组织中的表达及其对SMMC7721细胞生长和凋亡的影响(英文)

RTN4-C属于编码内质网蛋白的基因家族(RTNs)。为研究RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达情况及其对SMMC7721肝癌细胞株的影响,利用RT-PCR检测RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达。构建RTN4-C-pcDNA3.1真核表达重组质粒,用脂质体介导转染SMMC7721肝癌细胞,通过G418稳定筛选,建立转染RTN4-C/SMMC7721稳定细胞株。MTT法测定转染前后细胞生长改变、吖啶橙染色检测细胞凋亡改变、免疫细胞化学检测肿瘤相关蛋白p53、Hsp70和c-Fos表达改变。结果表明,RTN4-C/SMMC7721细胞生长减慢,与对照组相比,第2、3、4d细胞生长抑制率分别为33·8%±0·026、56·2%±0·094、34·8%±0·077;凋亡明显增多。突变型p53蛋白从核内转移到细胞质且表达减弱,c-Fos、Hsp70蛋白表达量明显减弱。提示RTN4-C基因在肝癌组织中存在表达差异,促进突变型p53的核转移并减少其表达量、抑制癌基因c-Fos和Hsp70的表达,从而抑制SMMC7721细胞的生长,促进其凋亡。

Rtn4-A/B基因敲除小鼠模型的制备

目的通过制备Rtn4-A/B基因敲除小鼠,探索Rtn4-B基因的生物学功能。方法用细菌人工染色体(BAC)载体构建Rtn4-A/B基因打靶载体并使其线性化,通过电转化法将其转入129SvEv品系雄性小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)。将正确同源重组的ES细胞注射入C57BL/6J小鼠囊胚腔,繁育出嵌合体小鼠后,进一步繁殖以获得杂合子小鼠。抽提小鼠尾尖组织DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型。结果基因打靶后,得到14个发生双臂正确同源重组ES细胞克隆。利用阳性ES细胞克隆进行囊胚内显微注射,得到5只嵌合率大于50%的雄鼠,最终繁育得到4只Rtn4-A+/-B+/-杂合子小鼠。结论利用ES细胞基因打靶、同源重组等方法,成功获得Rtn4-A/B基因敲除杂合子小鼠。

精神分裂症患者外周血中RTN4基因的mRNA表达研究

目的检测精神分裂症患者外周血中髓鞘相关抑制因子（RTN4）基因的信使核糖核酸（mRNA）表达量,研究其与临床症状间的关系。方法对44例精神分裂症患者（患者组）和37例社区正常人群（对照组）的外周肘静脉采血2～3 ml,提取总RNA,制备c DNA,比较两组RTN4基因的mRNA表达水平。对患者组采用阳性和阴性综合征量表（PANSS）进行评分,两两比较阳性症状为主组、阴性症状为主组和混合症状为主组三组RTNA基因的mRNA表达水平。结果患者组与对照组外周血中的RTN4基因表达水平存在统计学差异（P〈0.05）,患者组中阳性症状为主组、阴性症状为主组、混合症状为主组,两两之间RTN4表达水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 RTN4基因的mRNA表达量与精神分裂症之间存在着相关性,可为今后进一步了解精神分裂症的发病机制及诊断治疗等方面提供依据。

广西壮族人群RTN4基因多态性及其单倍型与鼻咽癌易感性的关系

目的研究广西壮族人群RTN4基因多态性及其单倍型与鼻咽癌易感性之间的关系。方法运用DNA测序法和单碱基延伸PCR技术,检测广西壮族人群200例确诊为鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和200例健康查体者(对照组)的RTN4基因rs2588510和rs1348528位点基因型,并分析RTN4基因的等位基因和单倍型频率。结果 RTN4基因多态性rs2588510和rs1348528位点在对照组和鼻咽癌组中的基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义。而两个位点在对照组和鼻咽癌组中单倍型CG频率分别为27.5%和34.8%,单倍型TA频率分别为0.7%和3.0%,鼻咽癌组单倍型CG和TA频率的分布差异显著高于对照组(P=0.007,OR=2.05,95%CI:1.21~3.46;P=0.001,OR=6.48,95%CI:1.69~24.9)。结论 RTN4基因多态性rs2588510和rs1348528位点的单倍型CG和TA可增加广西壮族人群个体鼻咽癌易感性。

中国广西人群中RTN4基因遗传多态性的研究

目的:研究RTN4基因rs2920891A/C和rs17046647A/G位点多态性在广西人群中的分布特征,比较不同人群的分布差异。方法:本实验采用多重单碱基延伸PCR(SNa Pshot)和DNA测序方法,对323例广西健康体检者RTN4基因的rs2920891A/C和rs17046647A/G位点基因型进行检测,并与国际人类基因组单体型图计划(Hap Map)公布的不同人群(北京、日本、欧洲及非洲人群)RTN4基因多态性数据进行比较。结果:在广西人群中,RTN4基因rs2920891A/C位点存在AA、AC、CC基因型及A、C等位基因,其等位基因频率在男女间的分布差异有统计学意义(P<0.05),基因型及等位基因频率与日本、欧洲及非洲人群比较差异均有统计学意义(P<0.05);rs17046647A/G位点存在AA、AG、GG基因型和A、G等位基因,基因型及等位基因频率在男女间比较差异无统计学意义(P>0.05),而与日本、欧洲及非洲人群比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:中国广西人群中RTN4基因的rs2920891A/C和rs17046647A/G位点多态性与其他种族间存在差异性。

RTN4基因外显子区拷贝数变异与鼻咽癌的相关性研究

目的探讨RTN4基因(54972187-55137831)外显子区9个目的片段拷贝数变异(copy number variant,CNV)与鼻咽癌的相关性研究。方法采用多重基因拷贝数检测技术(Accu Copy TM)对179例鼻咽癌样本和200例健康体检者样本进行RTN4基因外显子区9个目的片段拷贝数检测,观察两组样本基因拷贝数变异情况,运用数理统计比较两组拷贝数分布的差异性。结果鼻咽癌患者和健康体检者的RTN4基因外显子区的拷贝数主要以2个拷贝为主,经分析发现这两组的拷贝数比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 RTN4基因(54972187-55137831)外显子区拷贝数变异可能与鼻咽癌发生发展无相关性。

RTN4基因rs2864052和rs6545468与广西壮族人群鼻咽癌易感性相关研究

目的:研究RTN4多态性rs2864052和rs6545468位点及其单倍型与广西壮族人群鼻咽癌易感性相关关系。方法:运用单碱基延伸PCR技术和DNA测序法对广西壮族282例鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和199例健康体检者(对照组)的RTN4基因rs2864052和rs6545468位点进行基因分型,并分析RTN4基因的单倍型频率。结果:RTN4基因rs2864052存在AA、GA、GG三种基因型和A、G等位基因,其在鼻咽癌组与对照组中的基因型、等位基因频率的分布差异无统计学意义;rs6545468位点存在CC、GC、GG三种基因型和C、G等位基因,其在鼻咽癌组与对照组中的基因型、等位基因频率的分布差异亦无统计学意义。但单倍型分析发现鼻咽癌组单倍型AG频率显著低于对照组(P=0.004,OR=0.14,95%CI为0.31-0.68)。结论:RTN4基因多态性rs2864052和rs6545468位点的单倍型AG可降低广西壮族人群个体鼻咽癌易感性。

Cloning and expression analysis of human reticulon 4c cDNA

RTNs (reticulons) is a gene family related to the growth and differentiation of neuroendocrine cell. This family is composed of several members such as RTN1, RTN2ar\d RTN3. RTN1 and RTN2 have been proved to have 3 transcripts with different length. Because the RTN1c cDNA was involved in the sologenesis of small cell lung carcinoma (SCLC), it was selected as a bioinformatic probe to clone novel members of RTN family with the electric hybridization assistant new-gene cloning method (EHAC). A 1677-bp cDNA was identified from human brain cDNA library. The cDNA contains an intact open reading frame (ORF) which encodes a protein of 199 amino acids. This deduced protein is highly homologous to RTN1c, RTN2c and RTN3 with identities of 64.4%, 45.8% and 50.0% respectively. This new gene was named RTN4c (GenBank accession number: AF087901). Northern hybridization showed that the full length of RTN4c transcript is about 1.8 kb. It is hardly expressed in heart, placenta, lung, spleen, thymus, testis, ovary, small