栀子苷对大鼠局灶性脑缺血模型缺血脑组织HIF-1α蛋白和RTP801的影响

目的观察栀子苷对脑缺血再灌住模型大鼠海马组织HIF-1α,HIF-1α依赖的凋亡相关基因RTP801 mRNA表达的影响。方法实验动物随机分为假手术组、模型组、栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组、尼莫地平组。制备大鼠局灶性脑缺血模型,以栀子苷、尼莫地平腹腔注射给药,免疫组化法观察海马组织HIF-1α的表达情况,RT-PCR检测RTP801 mRNA表达的情况。结果栀子苷治疗组和尼莫地平组大鼠海马组织HIF-1α的表达均降低,RTP801 mRNA的表达也均下降。结论栀子苷抑制局灶性脑缺血损伤引起的的HIF-1α和HIF-1依赖性凋亡相关基因RTP801 mRNA的表达,从而减少神经元凋亡。

RTP801缺氧反应性核心序列调控下血管生长因子165和成纤维细胞生长因子2的高效共表达

目的获取人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因,克隆基因损伤诱导转录物4基因启动子中的缺氧反应性核心序列,以含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体为骨架构建真核表达载体,转染人胚肾293细胞,观察在正常和缺氧下人血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。方法利用聚合酶链反应法从小鼠基因组中获取基因损伤诱导转录物4基因启动子的缺氧反应性核心序列337bp^511bp,替换含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体上的巨细胞病毒增强子(150bp^390bp)。通过聚合酶链反应法获取含有人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的片段,插入含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体中的多克隆位点中,构建重组质粒。利用生物性可降解的聚乙烯亚胺多分支树状聚合物将重组质粒体外转染人胚肾293细胞,在正常和缺氧条件下分别培养36h,Western印迹法检测细胞内血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养基中分泌性蛋白血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。结果真核表达载体经聚合酶链反应和酶切分析及测序证实构建成功,Western印迹法和酶联免疫吸附法检测证实重组质粒中血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因在基因损伤诱导转录物4基因缺氧反应性核心序列介导下在缺氧人胚肾293细胞有高效共表达。结论获取的基因损伤诱导转录物4基因的缺氧反应性核心序列在缺氧状态下有增强下游基因表达的功能,含有该增强子的真核质粒在缺氧下高效表达血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2。

大鼠全脑缺血模型海马细胞凋亡与RTP801mRNA的表达

目的:观察大鼠全脑缺血模型海马细胞凋亡情况与RTP801mRNA的表达,探讨RTP801对全脑缺血的作用及其机制。方法:36只大鼠随机分为实验组(30只)和对照组(6只),实验组采Pulsineli用4血管阻断法制做大鼠全脑缺血模型,并按照缺血后6h、12h、24h、48h、72h随机分为5个小组,每组6只大鼠。在各个时间点处死大鼠,应用TUNEL染色观察大脑海马神经元凋亡情况,采用RT-PCR技术检测大鼠海马部RTP801mRNA表达水平。结果:全脑缺血组后各个时间点神经元凋亡差异有统计学意义(P<0.05),其中缺血48h神经元凋亡最明显。RT-PCR结果显示,RTP801mRNA表达水平在缺血后6h开始明显增加,12h达高峰;除72h组外,RTP801mRNA表达水平与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:细胞凋亡在全脑缺血大鼠模型缺血损伤过程中起重要作用,全脑缺血时大鼠海马RTP801表达明显增高可能加重凋亡所致的神经损伤,其具体机制尚不完全清楚。

2-甲氧基雌二醇对全脑缺血大鼠HIF-1α及RTP801的作用研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对全脑缺血大鼠HIF-1α及凋亡相关基因RTP801的作用。方法将成年雄性SD大鼠104只随机分为对照组(n=8)、全脑缺血组(n=48)和全脑缺血2-甲氧基雌二醇干预组(n=48),后两组按再灌注时间不同各分为6个亚组。采用改良的Pulsineli 4-VO方法行全脑缺血大鼠模型制作。Nissl染色进行海马神经元计数,免疫组化及RT-PCR技术进行HIF-1α及RTP801 mRNA表达检测。结果全脑缺血2ME2干预组与全脑缺血组相应时间点亚组相比,神经细胞计数明显增加,HIF-1α表达减少,RTP801 mRNA表达减低(P<0.05)。结论在全脑缺血急性期,2ME2抑制HIF-1α及凋亡相关基因RTP801表达,具有一定的神经保护作用。

缺氧诱导因子-1α和RTP801 mRNA在口腔扁平苔藓组织中的表达及意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因RTP801在口腔扁平苔藓(OLP)分子病理机制中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR方法,检测24例OLP组织,12例正常口腔黏膜组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因RTP801的表达水平。结果:HIF-1α在OLP病变组织中的表达水平高于正常口腔黏膜组织(P<0.05),RTP801在OLP病变组织中的表达低于正常口腔黏膜的表达水平(P<0.05)。结论:缺氧诱导因子-1α及其靶基因RTP801的异常表达在OLP的发病机制中起到重要作用,HIF-1α可能成为治疗OLP的潜在的分子靶点。

斑蝥酸钠诱导RTP801表达促进结肠癌细胞HCT116凋亡

目的探讨斑蝥酸钠注射液对结肠癌细胞凋亡的影响作用及分子机制。方法通过异硫氰酸荧光素(FITC)-右旋糖酐渗透实验观察终浓度为0.1、0.25、0.5、1、2μg/m L斑蝥酸钠注射液处理24 h后对HCT116细胞凋亡的影响;分别用real-time PCR和Western blot方法检测终浓度为0.1、0.25、0.5、1、2μg/m L斑蝥酸钠注射液处理24 h后对促凋亡基因DNA损伤修复基因(RTP801)表达的影响;运用低氧诱导因子1α(HIF-1α)质粒和HIF-1α-si RNA转染检测HIF-1α信号通路对RTP801的影响。结果斑蝥酸钠注射液诱导单层细胞渗透性增加,FITC-右旋糖酐渗透率增高。细胞受斑蝥酸钠注射液刺激后,RTP801的m RNA和蛋白水平上调,且都呈浓度依赖性。HIF-1α质粒转染后,RTP801蛋白表达增加;加入HIF-1α-si RNA,斑蝥酸钠注射液对RTP801的上调作用降低,且FITC-右旋糖酐渗透率下降。结论斑蝥酸钠通过HIF-1α途径增加RTP801的表达,诱导结肠癌细胞HCT116凋亡。

银杏内酯B和低氧预适应对小鼠急性缺氧损伤的保护作用

目的:通过观察缺氧预适应和银杏内酯B预处理对小鼠急性缺氧的影响,了解银杏内酯B的脑保护作用。方法:采用小鼠常压缺氧模型,观察小鼠的行为学并记录各组小鼠的最后死亡时间,脑组织含水量,用RT-PCR、Western blot分别检测各组小鼠皮层组织中RTP801 mRNA表达和EPO蛋白表达。结果:银杏内酯B和低氧预适应均能明显延长常压缺氧小鼠的存活时间,降低脑水肿程度,并且银杏内酯组和低氧预适应组RTP801 mRNA表达和EPO的表达均明显增加。结论:银杏内酯B与低氧预适应具有相类似的对抗小鼠急性低氧的作用,其脑保护作用与上调RTP801 mRNA和EPO蛋白的表达有关。