宿主蛋白Rab11a对牛病毒性腹泻病毒复制的影响

为了探索宿主蛋白Rab11a在感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)后,对细胞增殖的影响。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Rab11a基因稳定敲除的MDBK细胞株,设计靶向Rab11a基因的向导RNA表达载体,采用Western blot检测Rab11a基因敲除后的蛋白表达情况;使用实时荧光定量qPCR、免疫荧光染色试验、Reed-Muench法等技术检测BVDV感染Rab11a KO细胞后病毒RNA水平、双链RNA(dsRNA)积累水平、病毒滴度及致细胞病变(CPE)情况等。Western blot检测结果显示,成功构建出Rab11a基因敲除的细胞Rab11a KO;Rab11a基因敲除显著抑制BVDV 5'UTR mRNA和dsRNA水平的积累,感染36 h后,Scramble细胞明显有大量细胞病变,出现皱缩、碎裂、形成空泡后脱落等现象,Rab11a KO细胞的CPE现象明显低于Scramble细胞;在BVDV感染细胞12 h后,与Scramble细胞相比,Rab11a KO细胞的病毒滴度显著性降低,结果证明了敲除MDBK细胞的Rab11a基因对BVDV在胞内复制起到抑制作用。本研究结果为了解宿主蛋白Rab11a与BVDV的相互作用,以及Rab11a对病毒的复制增殖的作用提供了新的科学依据。

长链非编码RNA RAB11B-AS1在胶质瘤中的表达及预后价值研究

目的:检测长链非编码RNA(lncRNA)RAB11B-AS1(RAB11B-AS1)在脑胶质瘤中的表达特征,分析其在不同临床病理特征中的表达差别,探讨其预后价值。方法:应用生信分析数据库(GEPIA)对RAB11B-AS1的表达特征(163例胶质瘤、207例正常脑组织)进行预测。选择68例确诊为脑胶质瘤并行手术治疗的患者作为研究对象,留取术后肿瘤组织,选择68例因脑出血行手术治疗后留取的边缘正常脑组织作为对照。选择人脑胶质瘤细胞株U87和T98G,选择人脑正常胶质细胞株HEB。应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测RAB11B-AS1的表达,应用免疫组化EnVision检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:GEPIA预测到RAB11B-AS1在胶质瘤中的表达可能升高。脑胶质瘤术后组织中RAB11B-AS1的表达明显高于正常脑组织(P=0.0001)。胶质瘤中RAB11B-AS1表达在不同肿瘤最大径、WHO分级、有无坏死方面比较差异有统计学意义(均P<0.05)。胶质瘤中RAB11B-AS1与PCNA具有正相关性(r=0.62,P=0.0341)。生存分析显示RAB11B-AS1的表达与术后生存时间有关(P=0.041)。胶质瘤细胞株U87和T98G中RAB11B-AS1的表达均明显高于HEB(均P<0.05)。结论:脑胶质瘤组织中RAB11B-AS1的表达升高,与PCNA的表达具有正相关性,术后检测RAB11B-AS1的表达对判断预后可能有一定价值。

microRNA let-7a-3调节结直肠癌中RAB11FIP2的表达

目的探索microRNA let-7a-3在结直肠癌(CRC)中的表达状态、生物学功能及可能的机制。方法使用联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析法(COBRA)或亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析let-7a-3启动子内的DNA甲基化状态。使用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测CRC细胞系中let-7a-3和RAB11FIP2的表达。使用流式细胞仪和锚定-非依赖性生长试验检测let-7a-3表达上调时CRC细胞凋亡水平及集落形成能力。结果let-7a-3基因甲基化在CRC组织中很常见,let-7a-3的甲基化状态与组织来源有关(P<0.001)。去甲基化剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dC)可以诱导let-7a-3的表达。let-7a-3表达上调时促进细胞凋亡并抑制细胞集落形成能力(P<0.001)。let-7a-3通过靶向RAB11FIP2基因3’-UTR区域中的同源DNA区域抑制RAB11FIP2的表达。结论CRC中let-7a-3甲基化是一种常见现象,let-7a-3过表达可诱导细胞凋亡,抑制锚定非依赖性生长,提示let-7a-3可能是结直肠癌治疗的潜在生物标志物。

罗氏沼虾Rab11基因cDNA克隆及其组织表达分析

为了发掘罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)免疫相关基因,研究Rab蛋白(Ras-related proteins in brain)在罗氏沼虾免疫应答中发挥的作用,研究采用RACE-PCR技术克隆了罗氏沼虾Rab11基因全长c DNA序列,记为Mr Rab11。全长1381 bp,包括226 bp的5′UTR,511 bp的3′UTR和645 bp的开放阅读框,编码214个氨基酸,含有一个Rab结构域。氨基酸序列比对显示,罗氏沼虾与冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)、蚤状溞(Daphnia pulex)、叶蝉(Homalodisca vitripennis)Rab11一致性分别为82%、83%和82%。软件预测,Mr Rab11编码的蛋白分子量约为23.75 k D,等电点约为5.34。实时荧光定量表达分析表明,Mr Rab11基因在罗氏沼虾各组织中都有表达,肝胰腺中的表达量最高,其次是肌肉和肠道。在阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)感染12h后,罗氏沼虾肝胰腺中Mr Rab11的表达量上升,显著高于对照组(P<0.05),推测这是Mr Rab11对阴沟肠杆菌的应激表达,Mr Rab11在肝胰腺中参与了罗氏沼虾免疫应答过程。

Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨Rab11调控膀胱癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法:用Western blot方法检测膀胱癌BIU-87、T24、RT4、5637细胞系中Rab11的内源表达量。在BIU-87(Rab11低表达)和T24(Rab11高表达)细胞系中分别转染Rab11过表达质粒和Rab11 siRNA。用荧光素酶报告实验检测转染后细胞内的NF-κB信号通路的活性,通过Western blot技术分析与NF-κB信号通路相关蛋白p-IκB的变化情况。用NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系,通过Western blot检测细胞系中细胞周期相关因子cyclin D1和侵袭相关因子MMP9蛋白的变化。结果:转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系中NF-κB活性水平提高,p-IκB表达量显著提高;而敲除Rab11后NF-κB活性受到抑制,p-IκB的表达受到抑制,而p-IκB与NF-κB信号通路的活性呈正相关。NF-κB抑制剂Bay 11-7082阻遏了Rab11诱导cyclin D1和MMP9表达上调的过程。结论:Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭。

Rab11对膀胱癌细胞顺铂化疗耐药性的影响及机制

目的探讨小鸟苷三磷酸(GTP)酶Rab11对膀胱癌细胞顺铂化疗耐药性的影响及作用机制。方法培养人膀胱癌细胞,分为观察1组、对照1组、观察2组、对照2组,分别加入2μmol/L顺铂诱导凋亡。24 h后,观察1组细胞转染Rab11特异性siRNA,对照1组细胞转染Control siRNA,观察2组细胞转染Rab11过表达质粒,对照2组细胞转染p CMV6质粒。转染48 h后收集各组细胞,采用CCK-8法测算细胞存活率,采用流式细胞术测算细胞凋亡率,采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果观察1组细胞存活率低于对照1组,观察2组细胞存活率高于对照2组(P均<0.05)。观察1组细胞凋亡率高于对照1组,观察2组细胞凋亡率低于对照2组(P均<0.05)。观察1组细胞Bcl-2蛋白表达低于对照1组,观察2组细胞Bcl-2蛋白表达高于对照2组(P均<0.05)。结论 Rab11能增强膀胱癌细胞对化疗药物顺铂的耐药性,其机制可能为调控凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。

抑制Rab11表达对人膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨抑制Rab11表达对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响。方法将Rab11 si RNA转染于人膀胱癌T24细胞系,用免疫印迹法检测干扰效率。通过CCK8、细胞周期检测及基质胶侵袭实验,分析抑制Rab11表达对细胞增殖、细胞周期和侵袭的影响。通过免疫印迹法及实时PCR检测抑制Rab11表达对细胞周期相关因子cyclin D1、cyclin E及侵袭相关因子基质金属蛋白酶9(MMP9)表达量的影响。结果抑制Rab11蛋白表达能够抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭,并下调细胞周期相关因子cyclin D1、cyclin E及侵袭相关因子MMP9的蛋白和m RNA表达量。结论 Rab11可能作为肿瘤蛋白参与膀胱癌的疾病进展。

Rab11的结构特征、效应因子与功能

Rab11是Rab小分子GTP酶家族的成员。在细胞内膜泡再循环途径中,Rab11作为重要调节因子,介导膜泡从内体向质膜的运输。近年来随着对Rab11研究的深入,人们发现该蛋白质在多种细胞生命活动中发挥着关键作用。现对Rab11的结构、效应蛋白及功能等方面进行了综述。

阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶cDNA克隆和序列分析(英文)

目的近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是,对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶基因,以便进一步探讨其功能。方法使用SMARTcDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库,用生物信息学进行TvRab11同源分析,鉴定TvRab11基因,用PCR方法扩增基因组DNA,TA克隆TvRab11cDNA、测序及序列分析。结果在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp,读码框含636bp,推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因,其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性最高(一致性60%,相似性79%),与人类Rab11b次之(一致性58%,相似性78%)。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域(RabF1-5)。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因,其功能有待进一步研究。

乏氧条件下Rab11对人宫颈癌HeLa细胞侵袭迁移能力的影响

目的：通过调控Rab11在HeLa细胞中的表达，观察乏氧条件下Rab11对宫颈癌HeLa细胞侵袭、迁移能力的影响。方法将 HeLa 细胞分为4组：常氧对照组、常氧 Rab11siRNA 转染组、乏氧对照组、乏氧Rab11siRNA转染组。 Western blot检测各组HeLa细胞Rab11、基质金属蛋白酶（ MMP）－2、MMP－9蛋白表达， Transwell小室试验检测各组HeLa细胞侵袭、迁移能力的变化。结果乏氧条件下HeLa细胞Rab11表达量高于常氧组（P＜0．01），细胞侵袭、迁移能力增高（P＜0．01）；常氧和乏氧条件下，Rab11siRNA转染组与对照组相比，细胞侵袭能力、迁移能力下降（P＜0．01），乏氧条件下的Rab11 siRNA转染组下降更明显。结论乏氧促进HeLa细胞的侵袭、迁移，常氧及乏氧条件下下调Rab11表达均能够抑制HeLa细胞的侵袭、迁移， HeLa细胞的侵袭能力、迁移能力的变化依赖于Rab11的表达。

lncRNA RAB11B-AS1上调miR-628-3p抑制人胃癌细胞系增殖和迁移

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的影响及分子机制。方法建立顺铂耐药胃癌细胞系(HGC-27/DDP),将其分为对照组、si-NC组和si-RAB11B-AS1组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的表达;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的靶向关系。结果0.2、0.4 mg/L顺铂处理后HGC-27细胞存活率显著降低(P<0.05),而0~0.4 mg/L的顺铂处理后HGC-27/DDP细胞存活率无统计学意义。HGC-27和HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著升高(P<0.05),且HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著高于HGC-27细胞(P<0.05)。lncRNA RAB11B-AS1干扰表达,G0-G1期细胞所占比例显著升高,S期细胞所占比例显著降低(P<0.05);细胞存活率显著降低,迁移、侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。RAB11B-AS1靶向调控miR-628-3p。结论LncRNA RAB11B-AS1可通过上调miR-628-3p表达抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭,并提高癌细胞对顺铂的敏感性。

下调Rab11基因对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及机制探讨

背景与目的:Rab11基因在宫颈癌细胞中高表达,可能与细胞恶性转化相关。本研究采用RNA干扰技术下调Rab11基因表达,并探讨其对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及可能的相关机制。方法:将HeLa/SiHa细胞分为2组:阴性对照组(转染阴性对照的小干扰RNA)和Rab11 siRNA干扰组(转染小干扰Rab11siRNA)。蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Rab11干扰效果,检测转染Rab11 si RNA后,侵袭相关蛋白Rac1、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9表达的变化;细胞划痕损伤实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;细胞免疫荧光实验从形态学角度探索在小干扰Rab11后Rac1蛋白在细胞膜上聚集位置的变化。结果:转染小干扰Rab11siRNA到He La/SiHa细胞后,Rab11蛋白表达受到高效抑制(P<0.01);细胞迁移、侵袭能力受到抑制(P<0.05),Rac1蛋白表达明显下调(P<0.01),MMP2、MMP9蛋白表达下调(P<0.05),Rab11 siRNA处理组细胞运动前端细胞膜下Rac1蛋白聚集量减少。结论:Rab11基因表达下调可以抑制HeLa/SiHa细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Rac1、MMP2和MMP9蛋白表达量下降及Rac1定位的改变有关。

miR-320靶向Rab11对宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探讨miR-320对宫颈癌细胞SiHa增殖、侵袭及迁移的调控作用。方法选取宫颈癌细胞系SiHa,将细胞分为miR-320模拟基因组、miR-320抑制剂组、对照模拟基因组、对照抑制剂组,各组分别转染miR-320模拟基因、miR-320抑制剂、对照模拟基因、对照抑制剂。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组SiHa细胞中miR-320表达;Western blot检测各组SiHa细胞中Rab11蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。结果 miR-320抑制剂组SiHa细胞中miR-320相对表达量低于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞中miR-320相对表达量高于对照模拟基因组(P<0.05)。miR-320抑制剂组SiHa细胞的细胞活性、侵袭能力、迁移能力高于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞的细胞活性、侵袭能力、迁移能力低于对照模拟基因组(P<0.05)。miR-320抑制剂组SiHa细胞中Rab11蛋白表达高于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞中Rab11蛋白表达低于对照模拟基因组(P<0.05)。miR-320抑制剂组SiHa细胞的细胞荧光活性显著低于对照抑制剂组(P<0.05);miR-320模拟基因组SiHa细胞的细胞荧光活性与对照模拟基因组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-320可通过靶向Rab11调控SiHa细胞增殖、侵袭及迁移。

大黄鱼Rab11基因的克隆与表达分析

克隆了大黄鱼小G蛋白家族中的Rab11基因,测序查明其c DNA序列全长1373 bp,其中5’非编码区为129 bp,3’非编码区为587 bp,开放阅读框为657 bp,编码218个氨基酸;其氨基酸序列与罗非鱼、斑马鱼等鱼类Rab11蛋白序列同源性在95%左右,与人类、大熊猫等物种的同源性也达到90%以上。Rab11基因在大黄鱼脾脏、鳃、肾脏、皮肤、肝脏、血液、肠、心脏和胃9个组织中均有表达,在血液、肝脏中表达量最高,在胃中表达量最低;溶藻弧菌刺激后大黄鱼肝脏、肾脏和脾脏组织中Rab11基因的表达量均明显上调,提示Rab11在大黄鱼的抗病免疫反应中有着重要的作用。

Rab11-FIP4通过IGF1R调控结直肠癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨Rab11家族相互作用蛋白4(Rab11-FIP4)在结直肠癌发生发展中的作用、临床意义及相关机制。方法:通过免疫组化、Western blot及RT-qPCR比较结直肠癌组织与相应的癌旁组织中、正常环境及缺氧条件下直肠癌细胞中Rab11-FIP4的表达水平;应用免疫组化染色评分将临床病例分为Rab11-FIP4高表达组(n=61)和Rab11-FIP4低表达组(n=39),通过Kaplan-Meier生存分析比较两组的总生存时间与复发时间;构建Rab11-FIP4过表达慢病毒,感染结直肠癌细胞株HCT116和LoVo,采用CCK-8法、集落形成实验和Transwell实验检测Rab11-FIP4过表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响。免疫共沉淀实验检测Rab11-FIP4与胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)的相关性;人类磷酸激酶抗体阵列测定探讨Rab11-FIP4高表达的结直肠癌细胞中受IGF1R影响的信号通路;组织微阵列及双萤光素酶报告基因分析Rab11-FIP4与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的关系。结果:Rab11-FIP4在结直肠癌组织中高表达(P<0.01),且Rab11-FIP4过表达与结直肠癌患者的预后不良有关(P<0.05)。Rab11-FIP4的过表达促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。Rab11-FIP4的过表达通过IGF1R调节ERK1/2和AKT信号通路(P<0.05)。缺氧促使Rab11-FIP4启动子上的HIF-1α活化,从而上调Rab11-FIP4的表达(P<0.05)。结论:Rab11-FIP4可能作为促癌基因通过IGF1R调控结直肠癌细胞的迁移和侵袭。

条斑紫菜Rab11基因的克隆、序列分析及原核表达

Rab蛋白是小GTP结合蛋白家族最大的亚族,调控着植物的生长发育、形态建成,参与植物对病原菌的应答等过程,有些成员还受多种逆境胁迫的诱导表达。本研究通过RT-PCR技术克隆了1个条斑紫菜Rab基因,测序结果显示其cDNA含有长648 bp的完整开放阅读框.与拟南芥Rab比较时,该基因与拟南芥Rab11编码产物同源性最高,因此命名为PyRab11。条斑紫菜Rab11基因与多种生物的Rab11基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性,是典型的Rab蛋白编码基因。以pET28a为起始载体,构建了该基因的原核表达载体pET28a-PyRab11。重组大肠杆菌BL21(pET28a-PyRab11)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示得到了分子量约24 KDa的特异性重组蛋白,该基因的表达可提高重组菌的耐盐能力。

miR-125在甲状腺癌组织中的表达及通过靶向负调控RAB11A促进甲状腺癌细胞活性的研究

目的:探讨miR-125在甲状腺癌组织中的表达及促进甲状腺癌细胞增殖的相关机制。方法:采用RT-PCR法检测26例甲状腺乳头状癌(PTC)标本和4株PTC细胞株中miR-125的表达水平。采用CCK-8法、细胞集落形成实验、Transwell实验以及流式细胞法验证miR-125在PTC细胞中的作用。采用双荧光素酶实验验证RAB11A是否是miR-125的直接靶点。结果:miR-125在甲状腺癌组织中的相对表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05);与Nthy-Ori3-1相比,甲状腺癌细胞株TPC-1、NPA、KTC-1、WRO中的miR-125表达水平显著升高(P<0.05)。与miRNA NC组相比,miR-125 mimics组的细胞克隆形成数量及侵袭细胞数量明显增多,miR-125 inhibitor组显著减少(P<0.05)。Transwell实验结果显示,miRNA NC组细胞的迁移速度明显比miR-125 mimics组慢,但显著快于miR-125 inhibitor组。流式细胞检测显示,miRNA NC组、miR-125 mimics组、miR-125 inhibitor组的凋亡细胞比例分别为(5.1±0.08)%、(1.5±0.06)%、(7.8±0.07)%,两两比较后发现,miR-125 mimics组凋亡细胞比例最低,miR-125 inhibitor组最高。荧光素酶报告显示,RAB11A是miR-125的直接靶点。将miR-125模拟物、抑制剂或miRNA NC(100 nmol/L)转染KTC-1细胞后,RAB11A mRNA水平均无明显改变。但Western blot检测显示,与对照组相比,miR-125 mimics组RAB11A蛋白表达显著降低,miR-125 inhibitor组RAB11A蛋白表达显著增加。表明miR-125不影响RAB11A mRNA的稳定性,但在转录后水平调节RAB11A蛋白的表达。结论:miR-125通过在转录后水平负调控RAB11A蛋白的表达而发挥促甲状腺癌的作用。miR-125有望成为PTC患者诊断和治疗的新靶点。

长链非编码RNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中的表达及与预后的关系

目的探讨长链非编码RNA RAB11B-AS1(lncRNA RAB11B-AS1)在膀胱癌组织中的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法收集2012年10月-2014年2月于云南省第二人民医院泌尿外科手术切除的83例膀胱癌组织及相应癌旁正常组织。采用qRT-PCR检测lncRNA RAB11B-AS1的表达并分析其与患者临床病理特征的关系,采用Cox回归分析lncRNA RAB11B-AS1表达水平与膀胱癌患者预后的关系。结果 lncRNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织(1.17±0.32 vs 2.09±0.74,t=10.396,P<0.001);膀胱癌癌组织中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平与患者TNM分期、组织学分级和淋巴结是否转移有关(P<0.05)。lncRNA RAB11B-AS1高表达患者5年总生存率高于低表达患者(62.22%vs 26.32%,χ^2=13.420,P<0.001);多因素Cox回归分析显示,lncRNA RAB11B-AS1低表达是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(HR=1.126,95%CI:1.058~1.200,P<0.001)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中低表达,且低表达患者预后较差。

缺氧对合体滋养细胞胞外体分泌和Rab11蛋白表达的影响

目的探讨缺氧条件下,Rab11蛋白的表达变化及其在合体滋养细胞胞外体(syncytiotrophoblast exosome,STBEX)过度分泌中的作用。方法将传代培养的Be Wo细胞分为4组(n=24),1Be Wo常氧组:Be Wo细胞在普通培养基、常氧条件下培养;2Be Wo低氧组:Be Wo细胞在普通培养基、低氧条件下培养(92%N2、5%CO2、3%O2);3融合Be Wo常氧组:Be Wo细胞以佛司可林(Forskolin)合体化刺激48 h后,常氧条件下培养;4融合Be Wo低氧组:Be Wo细胞以Forskolin合体化刺激48 h后,低氧条件下培养(92%N2、5%CO2、3%O2)。收集各组细胞上清液并检测STBEX蛋白浓度,采用Western blot检测各组细胞HIF-1α、Rab11蛋白的表达。结果与融合Be Wo常氧组比较,融合Be Wo低氧组上清液中STBEX的蛋白浓度升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与Be Wo常氧组比较,Be Wo低氧组上清液中STBEX蛋白浓度升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果:与常氧培养组相比,低氧培养组细胞中HIF-1α与Rab11蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧条件下Rab11蛋白可能促进合体滋养细胞胞外体的过度分泌。

Rab11-FIP4对结肠癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨Rab11-FIP4的表达变化对结肠癌细胞生物学特性的影响。方法:采用结肠癌细胞株HCT116转染Rab11-FIP4特异性siR NA干扰Rab11-FIP4表达。用Western blot实验检测干扰效率。运用CCK-8实验和Transwell实验分别检测干扰Rab11-FIP4对结肠癌细胞株HCT116增殖和运动能力的影响。结果:siR NA转染使Rab11-FIP4表达量从100.2±21.5降低至23.5±5.8,差异有统计学意义(P<0.01)。干扰Rab11-FIP4后结肠癌细胞株HCT116的体外增殖明显下降,第2天的抑制率为29.40%,差异无统计学意义(P<0.05),第3天的抑制率为37.65%,差异有统计学意义(P<0.05),结肠癌细胞的迁移数从193.4±22.1降至113.9±12.7,差异有统计学意义(P<0.05),细胞侵袭数从113.3±16.7降至66.5±6.7,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:干扰Rab11-FIP4的表达能抑制结肠癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,Rab11-FIP4可能在结肠癌的进展中发挥重要作用。