Rab35、TRIM8在子宫内膜癌中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系

目的探讨Rab35、三结构域蛋白8(TRIM8)在子宫内膜癌(EC)中的表达,并分析其与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择2017年1月至2020年1月沧州市人民医院收治的180例EC患者,取手术切除的癌组织和癌旁组织。采用免疫组化法检测Rab35、TRIM8表达,比较EC癌组织和癌旁组织中Rab35、TRIM8表达差异,以及不同临床病理特征患者EC组织中Rab35、TRIM8表达阳性率差异。采用多因素Logistic回归分析影响EC患者预后的因素,采用Kaplan-Meier生存曲线分析EC患者生存情况。结果EC癌组织Rab35表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05),TRIM8表达阳性率低于癌旁组织(P<0.05)。FIGO分期ⅢA期、低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移的EC患者癌组织Rab35表达阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、肌层浸润深度<1/2、无淋巴结转移的EC患者(P<0.05),FIGO分期ⅢA期、低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移的EC患者癌组织TRIM8表达阳性率低于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、肌层浸润深度<1/2、无淋巴结转移的EC患者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示FIGO分期ⅢA期、有淋巴结转移、Rab35表达阳性是EC患者死亡的危险因素(P<0.05),TRIM8表达阳性是EC患者死亡的保护因素(P<0.05)。Rab35表达阳性EC患者的累积生存率低于Rab35表达阴性患者(Log-Rankχ~2=11.523,P<0.001);TRIM8表达阳性EC患者的累积生存率高于TRIM8表达阴性患者(Log-Rankχ~2=9.683,P<0.001)。结论EC组织中Rab35表达阳性率上调,TRIM8表达阳性率下调,且与EC低分化、FIGO分期ⅢA期、肌层浸润深度、淋巴结转移以及低生存率有关。

Rab35与肿瘤关系的研究现状及展望

Rab蛋白是小分子GTP结合蛋白Ras超家族中最大的亚家族,在囊泡的形成、运输、融合等过程中发挥着重要的作用。Rab35作为Rab家族的新成员,在人体组织中的分布比较广泛。已有研究证实Rab35与肿瘤迁移和侵袭等生物学特性有关,可能为潜在的肿瘤预后标志物,可为临床治疗提供新的靶点。本文就Rab35的来源、结构、功能及其在肿瘤中的作用进行综述。

GST Pulldown技术检测HEK293T细胞活化的Rab35

目的:运用GST pulldown技术建立真核细胞中活化的Rab35的可靠检测方法。方法:构建GST-RUN的原核表达载体,并使其在大肠杆菌BL21中大量表达。用GST pulldown和Western blot技术分别检测HEK293T细胞中活化的Rab35及Rab35蛋白的表达。结果:成功构建了GST-RUN的原核表达载体,并使其在原核细胞中大量表达融合蛋白GST-RUN,用GSTPulldown和Western blot技术证实了HEK293T细胞中有活化的Rab35和Rab35总蛋白的表达。结论:本工作所建立的GSTPulldown技术可以检测HEK293T细胞中活化的Rab35,从而为进一步深入研究Rab35在真核细胞中的功能提供了技术保障。

Rab35蛋白在肿瘤发生发展中的作用研究进展

Rab35是一种小鸟苷三磷酸(GTP)酶,参与许多细胞过程,包括膜运输,细胞极性,脂质稳态,吞噬作用和细胞分裂。最近的研究表明激活突变的Rab35,将赋予它致癌特性。Rab35可下调反转细胞“顶-底”极性并促进细胞迁移。这里我们回顾了Rab35在肿瘤细胞中的膜运输和信号传导,在细胞分裂和细胞迁移中发挥的作用,并讨论Rab35依赖性膜运输在肿瘤进展中的重要性。

Rab35、TMPRSS4及CIP2A蛋白在子宫内膜癌中的表达及与预后的关系

目的探讨Rab35、TMPRSS4及CIP2A蛋白在子宫内膜癌中的表达及与预后的关系。方法选取2005年1月-2017年1月福建省某医院收治的100例子宫内膜癌患者作为研究对象,收集患者的临床及随访资料,比较Rab35、TMPRSS4及CIP2A蛋白在不同组织中的表达情况;分析Rab35、TMPRSS4及CIP2A表达对子宫内膜癌患者预后的影响及影响患者预后的危险因素。结果子宫内膜癌组织中Rab35、TMPRSS4及CIP2A蛋白高表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(χ^(2)=62.947、122.120、42.762,均P<0.001)。浸润肌层深度≥1/2、肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、分化程度G1、淋巴结转移的子宫内膜癌患者Rab35、CIP2A及TMPRSS4蛋白高表达率均高于浸润肌层深度<1/2、肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期、分化程度G2、G3及淋巴结未转移者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Rab35、TMPRSS4及CIP2A蛋白表达阴性者中位生存时间长于表达阳性者,差异均有统计学意义(χ^(2)=12.733、13.400、12.127,均P<0.001)。COX回归分析结果显示,浸润肌层深度≥1/2、肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤分化程度G1、出现淋巴结转移和Rab35、CIP2A、TMPRSS4蛋白高表达是影响子宫内膜癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论Rab35、TMPRSS4及CIP2A蛋白在子宫内膜癌组织中呈高表达,且Rab35、TMPRSS4及CIP2A蛋白的表达及浸润肌层深度、肿瘤分、分化程度、淋巴结转移情况等均会影响子宫内膜癌患者预后,临床需加强这些指标的监测。

Rab35蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的探讨Rab35蛋白在子宫内膜癌(EC)组织中的表达情况及其临床意义。方法选取108例正常子宫内膜(NE)组织、30例不典型性增生子宫内膜(AHE)组织、143例子宫内膜癌组织,采用免疫组化SP法检测Rab35在这三种组织中的表达,并分析Rab35的表达与EC患者临床病理特征及预后的关系。结果Rab35在NE、AHE、EC组织中均有表达,分别为55.6%(60/108)、70.0%(21/30)和71.3%(102/143),且EC组织中的表达显著高于NE组织(P <0.05)。Rab35蛋白的表达与深肌层浸润、FIGO分期晚、组织学分级差有关(P <0.05)。Rab35阳性表达与阴性表达患者的总生存时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Rab35蛋白可能在EC发生、发展中起促进作用,其表达可能与EC的不良预后有关。

LRRK2G2019S位点突变通过抑制自噬相关蛋白诱发驱铁处理后小胶质细胞的活化

目的探讨LRRK2G2019S位点突变对驱铁处理后小胶质细胞活化的影响及其机制。方法(1)利用人类诱导多能干细胞(IPSC)经造血祖细胞(HPC)分化产生小胶质细胞,免疫荧光染色进行鉴定,利用蛋白纯化技术获取α-突触核蛋白(α-syn)A53T突变蛋白。(2)将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+甲磺酸去铁胺(DFO)组,分别加入磷酸盐缓冲液(PBS)、1μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白、1μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白+30 mmol/L DFO作用24 h。采用比色法检测细胞Fe2+浓度,Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)mRNA的表达。将3组小胶质细胞培养上清液(MCS)转移到SH-SY5Y细胞中,采用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。(3)双向DNA测序检测1μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白处理后小胶质细胞富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)基因的突变。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A组,分别加入对应的药物处理24 h(LRRK2抑制剂GSK3357679A浓度为10 nmol/L),采用Western blotting实验检测细胞LRRK2蛋白的表达。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A、α-syn+GSK3357679A+DFO组,分别加入对应的药物处理24 h后采用Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR检测细胞IL-6、TNF-a、TGF-βmRNA的表达。(4)将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+雷帕霉素(RAPA)组,分别加入对应的药物处理24 h(自噬诱导剂RAPA的浓度为50 nmol/L),采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR检测细胞IL-6、TNF-α、TGF-βmRNA的表达。(5)将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+Rab35组,分别加入对应的药物处理24 h(Rab35过表达质粒的浓度为1μg/mL),采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、LC3Ⅱ蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR检测细胞IL-6、TNF-α、TGF-βmRNA的表达。结果(1)免疫荧光染色检测显示小胶质细胞神经元核蛋白(NeuN)表达阴性、离子钙结合适配分子1(Iba1)表达阳性、LRRK2呈高表达。成功构建PcDNA3.1-SNCA-A53T表达质粒并纯化获得α-syn A53T突变蛋白。(2)α-syn组细胞Fe2+浓度高于对照组,α-syn+DFO组细胞Fe2+浓度低于α-syn组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组细胞Rab35蛋白、TGF-βmRNA的表达依次降低,IL-6、TNF-a mRNA的表达依次增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组小胶质细胞ROS水平、SH-SY5Y细胞凋亡率均依次增加。(3)双向DNA测序显示α-synA53T突变蛋白刺激后小胶质细胞LRRK2G2019S突变最明显。与对照组比较,α-syn组细胞LRRK2蛋白的表达增高;与α-syn组比较,α-syn+GSK3357679A组细胞LRRK2蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,α-syn组细胞Rab35蛋白、TGF-βmRNA的表达降低,IL-6、TNF-a mRNA的表达增高;与α-syn组比较,α-syn+GSK3357679A组细胞Rab35蛋白、TGF-βmRNA的表达增高,IL-6、TNF-a mRNA的表达降低;与α-syn+GSK3357679A组比较,α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞Rab35蛋白、TGF-βmRNA的表达降低,IL-6、TNF-a mRNA的表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。α-syn组细胞ROS水平高于对照组,α-syn+GSK3357679A组细胞ROS水平低于α-syn组,α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞ROS水平高于α-syn+GSK3357679A组。(4)与对照组比较,α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、TGF-βmRNA的表达降低,P62蛋白、IL-6、TNF-a mRNA的表达升高;与α-syn组比较,α-syn+RAPA组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、TGF-βmRNA的表达升高,P62蛋白、IL-6、TNF-a mRNA的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+RAPA组。(5)与对照组比较,α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、TGF-βmRNA的表达降低,P62蛋白、IL-6、TNF-a mRNA的表达升高;与α-syn组比较,α-syn+Rab35组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、TGF-βmRNA的表达升高,P62蛋白、IL-6、TNF-a mRNA的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+Rab35组。结论在驱铁处理条件下,LRRK2G2019S能通过抑制Rab35等自噬相关蛋白诱发小胶质细胞活化,Rab35有望成为干预神经炎症反应的关键因素。