siRNAs表达载体沉默RAB5A基因的位置效应研究

目的研究小干扰RNA(siRNAs)表达载体沉默RAB5A基因的位置效应,寻找沉默RAB5A基因的最佳作用靶点。方法利用MFold软件分析RAB5A mRNA的二级结构,构建针对RAB5A mRNA不同位点的siRNAs表达载体,转染Anip973细胞后,通过RT-PCR和Western-blot方法评价siRNAs对RAB5A基因表达的抑制作用。结果针对RAB5A mRNA编码区内最可及位点设计的siRNAs分别抑制72％和85％的RAB5A基因表达,而针对最不可及位点设计的siRNAs则完全没有活性;非编码区内也存在沉默RAB5A基因的siRNAs有效作用靶点;siRNAs分子与RAB5A mRNA靶序列之间引入2个错配碱基时,siRNAs的抑制活性完全丧失。结论MFold软件分析的RAB5A mRNA二级结构可以作为分析和寻找可及位点的依据,siRNAs的作用效率与RAB5A mRNA靶位点的可及性密切相关。

RMB5A反义寡脱氧核苷酸对不同转移潜能大肠癌细胞系裸鼠移植癌体内影响研究

目的观察RMB5A反义寡脱氧核苷酸对人大肠癌高、低转移潜能细胞系的裸鼠移植瘤的抑制作用及抑制肿瘤转移效果。方法建立人大肠癌高转移和低转移的裸鼠模型,分组给予RAB5A反义寡核苷酸治疗,观察荷瘤鼠的肿瘤体积、肿瘤大小以计算抑瘤率;RT-PCR和免疫组化法检测治疗组RAB5A的表达。结果在大肠癌裸鼠移植瘤高转移和低转移组中RAB5A反义寡核苷酸均具有抑瘤效果(P<0.05)。反义寡核苷酸组的肿瘤组织中RAB5A基因和蛋白质表达均减少,远隔脏器无转移发生。而正义寡核苷酸组以上指标均与模型组无差别(P>0.05)。结论体内抑制RAB5A可抑制裸鼠移植癌生长及推迟转移。

Rab5A在结直肠癌中的表达及其意义

背景:结直肠癌是消化系统常见恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已为进展期,预后较差,早期诊断对改善患者预后尤为重要。目前,分子标记物诊断结直肠癌备受关注。目的:探讨Rab5A在结直肠癌中的表达及其意义。方法:收集135例行结直肠癌切除术患者的癌组织及其配对癌旁非癌组织。采用real-time PCR检测21例患者癌组织及其配对癌旁非癌组织以及结肠癌细胞株HCT116、HT-29、LoV o、SW480和正常结肠上皮细胞株NCM460中的Rab5A mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测4例患者癌组织及其配对癌旁非癌组织中的Rab5A蛋白表达;采用免疫组化法检测110例患者癌组织中的Rab5A蛋白表达;分析Rab5A表达与结直肠癌临床病理特征和预后的关系。结果:结直肠癌组织中的Rab5A mRNA表达水平显著高于癌旁非癌组织(P=0.003);结肠癌细胞株HCT116、HT-29、LoV o、SW480中的Rab5A mRNA表达水平显著高于正常结肠上皮细胞株NCM460(P<0.05)。结直肠癌组织中的Rab5A蛋白表达水平显著高于癌旁非癌组织。110例结直肠癌组织中,51例(46.4%)为Rab5A低表达,59例(53.6%)为Rab5A高表达。Rab5A蛋白表达与肿瘤大小、血清癌胚抗原(CEA)水平和TNM分期相关(P=0.008;P=0.002;P=0.010)。Rab5A高表达患者的3年生存率显著低于低表达者(52.1%对77.5%,P<0.05)。Rab5A、血清CEA和TNM分期与结直肠癌患者的预后相关(P=0.009;P=0.006;P=0.017),是影响预后的独立因素(P=0.026;P=0.032;P=0.014)。结论:Rab5A参与了结直肠癌的恶性演进过程,其高表达提示患者预后不良,可作为预测结直肠癌患者预后的有效指标。

Rab5a和APPLl在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨Rah5a和APPLl在乳腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测柏例乳腺纤维瘤组织和74例乳腺癌组织中Rab5a和APPLl的表达水平，分析其与乳腺癌转移、病理分级和人表皮生长因子受体2（HER-2）表达的相关性。结果Rah5a和APPLl在乳腺纤维瘤组织中的阳性率分别为45．O％和30．0％，在乳腺癌组织中的阳性率分别为91．9％和83．8％（均P〈0．01）。Rab5a在乳腺癌HER-2阳性组和阴性组中的阳性率分别为92．6％和90．0％（P〈0．05），APPLl在乳腺癌HER-2阳性组和阴性组中的阳性率分别为85．2％和80．0％（P〉0．05）。Rab5a和APPLl在有无乳腺癌局部转移和不同病理学分级中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Rab5a和APPLl在乳腺癌中高表达，并与HER-2表达呈正相关；Rab5a和APPLl可能通过调节HER-2的信号传导而影响乳腺癌细胞生物学行为。

HPV16阳性宫颈鳞癌组织EGFR上游与下游相关蛋白表达临床意义探讨

目的探讨HPV阳性宫颈鳞癌（cervicalsquamouscellcarcinoma，CSCC）组织中表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）、Rab5a、Rab21、c-jun、plos蛋白表达关系及临床意义。方法收集2012—09—01—2013-09—30新疆医科大学附属肿瘤医院病理科保存的初治HPV阳性CSCC组织标本45例。其中维吾尔族人群标本33例，汉族人群标本12例，年龄30～70岁，中位年龄46岁。采用免疫组织化学法检测45例HPV阳性CSCC组织中EGFR、Rab5a、Rab21、c-jun和c-los蛋白表达情况。结果EGFR、Rab5a、Rab21、c-jun和c-los蛋白阳性表达率分别为64．4％、66．7％、60．0%、75．6％和66．7％；EGFR蛋白表达与临床分期（x2=8．008，P=0．005）、淋巴结转移（x2=7．162，P=0．007）有关，Rab5a蛋白表达与临床分期（x2=10．045，P=0．002）、肿瘤分化程度（x2=3．906，P=0．048）、淋巴结转移（x2=5．511，P=0．019）有关，Rab21蛋白表达与临床分期（x2=9．644，P=0．002）、淋巴结转移（x2=23．766，PG0．001）有关，c-jun（x2=4．022，P=0．045）、c-fos（x2=18．219，PG0．001）蛋白表达与淋巴结转移有关。Spearman等级相关分析显示，c-jun、c-los蛋白表达与肿瘤分化程度呈负相关（r=-0．347，P=0．020；r=-0．299，P=0．046），与临床分期呈正相关（r=0．362，P=0．015；r=0．329，P=0．028）；EGFR与Rab21表达呈负相关（r=-0．322，P=0．031），EGFR与Rab5a、c-jun、c-los表达呈正相关（r值分别为0．558、0．658和0．755，P值均G0．001）。结论HPV阳性CSCC中Rab21蛋白可能阻碍EGFR介导的信号传导，Rab5a、c-jLln、c-los蛋白可能促进EGFR介导的细胞信号传导，EGFR、c-jun、c-los、Rab21、Rab5a可能作为CSCC发展、转移的参考指标。联合检测EGFR、c-jun、c-fos、Rab5a、Rab21可为CSCC的诊断、寻找新的治疗靶点和预后评估提供依据。

野生型大鼠Rab5a基因表达载体pcDNA3-Rab5(a)WT的转化扩增及鉴定

目的对含野生型大鼠Rab5a基因载体pcDNA3-Rab5(a)WT进行体外转化、扩增及鉴定,为基于Rab5a的相关研究提供高纯度、高丰度的表达载体。方法取pcDNA3-Rab5(a)WT质粒转化DH5α感受态菌,再接种到含氨苄青霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选,对挑取的阳性克隆进行LB液体培养基培养后抽提质粒,用超微量核酸蛋白测定仪测定提取质粒的纯度和浓度,并取样进行琼脂糖凝胶电泳及PCR鉴定。结果经转化后获得了大量抗氨苄青霉素的阳性克隆菌落,挑取阳性克隆并经培养后提取的pcDNA3-Rab5(a)WT质粒均为浓度高、纯度高、超螺旋结构为主的质粒。pcDNA3-Rab5(a)WT经PCR后得到Rab5a基因。结论成功转化并扩增了pcDNA3-Rab5(a)WT,为Rab5的相关研究提供了高质量的表达载体。