Preparation of Rabbit Antihuman Albumin Serum and Purification of the IgG Antibodies.

We applied a very simple method,TCA-al-cobol method,to purify human serum albumin.The product is pure albumin by SDS-PAGE.Emulsified with Freund’s complete adjuvant(FCA),it was used to immunize rabbits by a pro-cedure which lasts only five weeks.Specific anti-serum with high titration(1:128)was obtained.

酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG

〔目的〕建立检测牛初乳素为原料的保健食品中免疫球蛋白IgG的常用酶联免疫双抗体夹心法。〔方法〕分离纯化小牛血清中IgG,以牛IgG免疫新西兰兔,获得抗牛IgG的血清,分离纯化,制备兔抗牛IgG。〔结果〕1000ng/孔兔抗牛IgG饮被酶联板,3倍比稀释牛IgG,夹心法检测。〔结果〕在牛IgG0.031mg/ml-2.50mg/ml范围,浓度与吸光度值线性相关,方程为:y=0.358+0.767x,相关系数为r=0.995,当添加50mmIgG时,回收率为88.4％,变异系数为6.1％。〔结论〕该方法具有特异性强、快速、灵敏和分析成本低等特点。

桂附地黄丸浸膏对兔IgG加速型小鼠肾毒血清肾炎的影响

桂附地黄丸浸膏能使兔ＩｇＧ加速型肾毒血清肾炎小鼠血清白蛋白升高，尿蛋白、血清尿素氮、血清总胆固醇降低，并能改善肾组织病变，其０．３，１．２ｇ／ｋｇ两剂量与环磷酰胺０．０１５ｇ／ｋｇ作用相当。

旋毛虫感染家兔治疗前后血清IgG抗体水平的变化

应用旋毛虫肌肉内成囊期幼虫的盐水浸出液为抗原，用ＥＬＩＳＡ间接法检测了旋毛虫感染家兔治疗前后血清ＩｇＧ水平的消长情况。血清ＩｇＧ于感染后７周达高峰，１０周下降，治疗后抗体水平明显升高。认为血清学检测在旋毛虫病的疗效考核中有一定价值。

免疫亲和层析纯化兔抗人IgG

用人IgG-Sepharose 4B亲和柱,3mol/L氯化镁洗脱,一步纯化免抗人IgG血清,获得了SDS-PAGE电泳纯,免疫双扩散法效价达1/256,收率62.6%;用8mol/L脲洗脱,效价为1/128,收率34.1%.与硫酸铵多步沉淀法比较,纯度和效价大大提高,为获得高度特异、高亲和力兔抗人IgG提供了一条简便途径.

小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用

制备小鼠抗兔IgG的mAb,经标记HRP和FITC后,应用于ELISA、Western blot、免疫组织化学染色试验以及FCM。以正常兔IgG为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过常规B淋巴细胞融合技术,获得两株分泌抗兔IgG mAb的杂交瘤细胞株,间接ELISA腹水效价均达1×10-7,且亚类均为IgG1(κ)。抗体经鉴定、纯化后,以改良的过碘酸钠法标记HRP,本室常规方法标记FITC。FITC标记的2A1 mAb的F/P值为4.1,2F11的F/P值为2.7。HRP标记抗体的效价和工作浓度分别:2A1为1:25600和1:3200,2F11为1:102400和1:25600。在相同工作浓度条件下,ELISA、Western blot的实验结果,HRP标记的2F11 mAb明显优于商品化抗兔pAb,而且,2A1和2F11 mAb经标记后还可用于免疫组化和FCM,显示出很好的应用前景。

小鼠杂交瘤细胞系的建立及抗兔IgG单克隆抗体的应用

经三次免疫一次细胞融合,得到分泌抗兔 IgG 的杂交瘤细胞克隆27个。细胞融合率100%,阳性孔率4%。经筛选和克隆化培养建立了杂交瘤细胞系3C8E4和6A3H6,其免疫球蛋白分别为 IgG2a 和IgG3。3C8E4腹水抗体滴度超过1:10240000 3C8E4除和兔 IgG 有反应外,还和人与马 IgG 有反应;6A3H6只和兔 IgG 有反应,与其它七种动物和人 IgG 无交叉反应。经用过碘酸盐法将3C8E4 MAb 和辣根过氧化物酶标记,制得酶标抗体,当使用浓度为1:10000时,其OD>2.0。用该酶标记抗体 ELISA 法检测植物病毒 PVX、PVY、TEV 和TuMV 效果良好。

五加皮注射液对兔IgG加速型小鼠肾毒血清肾炎的实验研究

给肾毒血清肾炎小鼠五加皮注射液后 ,其血清白蛋白升高 ;尿蛋白、血清尿素氮、血清总胆固醇降低。结果提示 ,五加皮注射液对肾炎有一定的治疗作用。

毛细管电泳免疫分析法研究鼠IgM、兔抗鼠IgG及其免疫复合物

根据鼠IgM能与兔抗鼠IgG发生特异性免疫反应,采用毛细管电泳免疫法分析鼠IgM及其免疫复合物。以Tris为电解质,探讨了缓冲溶液浓度和pH值、进样时间、进样电压等因素对鼠IgM、兔抗鼠IgG及其免疫复合物分离的影响。在缓冲体系浓度为40 mmol.L-1TAE、1.0 mmol.L-1EDTA(pH为8.5),进样时间为12 s,进样电压为18 kV的条件下,鼠IgM、兔抗鼠IgG及其反应形成的免疫复合物获得了很好的分离。

纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备及表征

采用还原法制备了尺寸大小分别为4、14、30、41 nm的纳米金,优化了不同尺寸的纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备条件。采用紫外-可见吸收光谱、透射电子显微镜和化学发光的方法对该探针进行了表征。结果表明纳米金兔抗猪IgG化学发光探针具有很好的单分散性和稳定性。本研究为纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的应用奠定了基础。

关中驴抗猪瘟病毒IgG制备工艺及质量监控研究

本实验用配有佐剂的猪瘟病毒抗原,按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴,用两次盐析法沉淀提取抗猪瘟病毒IgG,其中对提纯制备工艺所涉及的pH值、温度、硫酸铵浓度等工艺进行探索比较,继之对单位体积内的蛋白浓度、酶标抗体效价和稀释度进行了标化,同时对质量监控进行了平行性分析。本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物;研制用于预防和治疗猪瘟的抗病毒免疫球蛋白(IgG)生物制剂获得理想结果。经6省、市、区试用后,深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。

电位型无标记IgG免疫探针测人IgG

以 Pt 为基体电极,用戊二醛交联法在 Pt 电极上固定兔抗人 IgG 抗体,制成 IgG 免疫探针。根据人免疫球蛋白(IgG)能与兔抗人 IgG 抗体发生定量的特异性免疫反应,利用电化学方法,找到了测定人血清中 IgG的简单方法。人 IgG 的含量在0.2～1.2μg/L 之间,与兔抗人 IgG 免疫探针的电位变化值(△E)呈良好的线性关系。工作曲线的回归方程△E=23.0 c+9.733,相关系数 r=0.9986,检测下限小于0.2μg/L。用于正常人血清中 IgG 含量的测定,加标回收率为95%～103%,结果满意。

CRM9与兔抗人IgG连接方法探讨

目的:用直接偶联法构建新型蛋白兔抗人IgGCRM9.方法:分别应用异型双功能连接剂(m Maleimido benzoyl N hydoxysuccinimideester,MBS)和N琥珀酰亚胺3(2吡啶二巯基)丙酸盐(SPDP)将兔抗人IgG多抗和白喉毒素突变体(CRM9)进行连接,制备出新的蛋白.结合后的蛋白经SephacrylS300分离纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳证明二者的结合情况.采用酶联免疫法检测IgG与CRM9按不同比例反应后所构建的蛋白复合体中抗体部分的活性.结果:用MBS连接剂连接IgG与CRM9后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出的条带明显滞后于IgG所显示的条带,而在琼脂糖凝胶电泳中IgG与CRM9混合反应的样品所显示的两条条带均与IgG和CRM9单独所在的条带一致.酶联免疫实验测得的各组A450nm值表明,IgG与CRM9按1∶1和1∶3两种比例制备的样品对抗体活性影响最小,而按1∶5和1∶两种比例制备的蛋白,抗体活性受到很大的抑制.结论:兔抗人IgG与CRM9可以通过MBS结合,二者在1∶1～1∶3之间的比例时,可以有较好的连接,而且对抗体活性的影响最小.SP DP则不适用于本实验中的两种蛋白的连接.这将为免疫毒素的新型连接提供有效的方法.

兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定

目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。

分泌IgA和IgG的浆细胞在家兔鼻腔中的分布特征

分泌IgA和IgG的浆细胞是黏膜免疫系统中两种重要的效应细胞。本研究旨在探究分泌IgA和IgG的浆细胞在家兔鼻腔中的分布特征。以20只健康成年家兔为研究对象,根据硬腭褶皱和牙齿特征,依次将家兔鼻腔分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ5段,运用组织学、免疫组织化学、图像分析及统计学方法,对分泌IgA和IgG的浆细胞在家兔鼻腔中的分布特征进行了详细的研究。免疫组化结果显示:分泌IgA和IgG的浆细胞在家兔鼻腔每段都有分布,主要弥散分布于鼻黏膜固有层中;其形态呈圆形或卵圆形,核一般位于细胞一侧,胞质丰富呈阳性反应。统计结果显示:分泌IgA和IgG的浆细胞在鼻腔不同段的分布密度由高到低依次是:鼻腔第Ⅳ段、第Ⅴ段、第Ⅲ段、第Ⅱ段、第Ⅰ段。其中分泌IgA的浆细胞在鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段的分布密度显著高于鼻腔Ⅰ、Ⅱ段(P<0.05),在上颌鼻甲、鼻中隔和筛鼻甲的分布密度显著高于上鼻甲(P<0.05);与分泌IgA的浆细胞相比,分泌IgG的浆细胞除鼻腔第Ⅳ段的分布密度显著高于鼻腔Ⅲ、Ⅴ段(P<0.05)外,其分布变化趋势基本与分泌IgA的浆细胞类似。结果证明,分泌IgA和IgG的浆细胞弥散分布于家兔每段鼻腔的鼻黏膜固有层中,有利于SIgA和IgG分子在整个鼻黏膜形成完整的保护屏障;分泌IgA和IgG的浆细胞主要分布在家兔鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段及上颌鼻甲、筛鼻甲和鼻中隔,提示这些区域是家兔鼻腔免疫的重要效应部位。本研究为家兔呼吸系统疾病的预防及进一步探讨家兔鼻腔免疫应答的机制提供重要的理论依据。

抗瓜氨酸化聚合兔IgG抗体ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测血清抗瓜氨酸化聚合兔IgG(citrullinated aggregated rabbit IgG,Cit-AgRIgG)抗体的ELISA方法,探讨其对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法将兔IgG于62℃加热聚合变性,用肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)将内含精氨酸催化生成瓜氨酸,制成瓜氨酸化聚合兔IgG(Cit-AgRIgG)。以此作为抗原,包被反应板微孔,建立检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA方法。经方法学考核后,检测临床标本并对结果进行评价。结果 Cit-AgRIgG显示出与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体有较高的结合活性。以其为包被抗原建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法批内和批间平均变异系数分别为4.5%和9.5%。特异性阻断试验显示,Cit-AgRIgG、AgRIgG与CCP抗原对该抗体的最高抑制率分别为80.0%、65.9%和25.0%。抗Cit-AgRIgG与抗AgRIgG抗体的cut off值分别为0.565和0.459,此时RA患者抗Cit-AgRIgG抗体阳性率显著高于其他疾病和健康人对照组(P均<0.01),其诊断RA的敏感性为79.3%,特异性为96.5%,阳性、阴性预测值分别为84.7%和95.1%,阳性、阴性似然比分别为22.66、0.215,Youden指数为0.758,ROC曲线下面积(AUCROC)为0.890。对RA和健康人对照者检查结果显示,抗CitAgRIgG与抗AgRIgG抗体(RF)总符合率97.7%,与抗CCP抗体总符合率91.7%。结论建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法有良好的稳定性和特异性。抗Cit-AgRIgG抗体兼具RF与抗CCP抗体的双重特性,有可能发展成为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。

猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备

采用辛酸-硫酸铵法和Sephadex G-150分子筛层析法纯化猫血清IgG,SDS-PAGE电泳检测;用纯化的IgG免疫新西兰兔,制备兔抗猫IgG抗血清,并用上述方法提纯兔抗猫IgG,改良过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,即获得兔抗猫IgG的酶标抗体。

利用SPA提取鼠IgG制备兔抗鼠IgG血清的尝试

本文首次用 SPA 提取鼠 IgG,制备兔抗鼠 IgG 血清,效价高,纯度好,方法简便,可靠。

五加皮注射液对兔IgG加速型小鼠肾毒血清肾炎的实验研究

给肾毒血清肾炎小鼠五加皮注射液后 ,其血清白蛋白升高 ;尿蛋白、血清尿素氮、血清总胆固醇降低。结果提示 。

七种常见宠物二级抗体的制备和HRP标记

目的制备兔抗7种中国家庭中常见宠物的二级抗体,并进行辣根过氧化酶标记,为宠物血清学检测系统的建立提供工具。方法利用饱和硫酸铵沉淀法粗纯抗体后,再利用protein A 或protein G亲和层析的方法进一步纯化宠物的IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗宠物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗宠物的二级抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting考察标记抗体的特异性。结果纯化了狗、家猫、豚鼠、金仓鼠、松鼠、花鼠和龙猫7种宠物的血清IgG,免疫双扩散法测定兔抗这7种宠物的抗血清效价均达到1:32,并对纯化的兔抗7种宠物的二级抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1:(2000～15000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性。结论成功制备了HRP标记的兔抗7种中国家庭中常见宠物的二级抗体,为宠物血清学检测体系的建立提供了工具。