半导体激光治疗牙本质过敏症牙髓刺激性反应临床及动物实验研究

目的 :探讨激光治疗牙本质过敏症时 ,牙髓组织的刺激性影响。方法 :临床 3 60颗患牙激光治疗 5次 ,观察牙髓刺激性反应发生率。 2 2颗兔牙激光照射后 ,光镜下观察牙髓组织病理改变。结果 :3 60颗患牙发生牙髓刺激性症状共 3颗 ,0 0 0 8%。 2 2颗兔牙照射后即刻或次日拔除的均有牙髓充血 ,或轻度慢性炎症反应 ,第 3天、第 5天拔除的 ,牙髓组织基本恢复正常。结论 :适量的激光照射可产生牙髓充血。但此反应是极轻微的 ,一般不会产生临床症状 ,可以安全使用。

神经生长因子对兔牙髓干细胞体外增殖、成骨分化影响的实验研究

目的:探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)体外增殖及成骨分化的影响,为牙髓组织的损伤修复提供新线索。方法:采用酶解组织块法分离培养健康新西兰兔的DPSCs,光镜下观察其形态学及生长变化。将培养的第3代DPSCs分为3组:空白组(只有DPSCs)、实验组(DPSCs混合100μg/L NGF)和对照组(DPSCs混合矿化液)。观察实验7 d和14 d时3组的细胞形态及碱性磷酸酶活性结果,RT-qPCR检测各组Runx-2、COL-1以及OCN的基因表达水平。结果:体外培养的DPSCs生长良好,贴壁生长,大多为多角形或长梭形,呈巢式或集落生长;3组的碱性磷酸酶活性在实验14 d时均高于实验7 d时的数值,且7 d和14 d时实验组与空白组、对照组差异均有统计学意义(P<0.05);RT-qPCR结果显示培养14 d时实验组中Runx-2、COL-1和OCN基因的表达量均高于空白组(P<0.05)。结论:NGF可以提高DPSCs的增殖和成骨分化能力,两者的联合应用修复效果优于DPSCs单独应用。

加味肾气丸联合髓芯减压术、人牙髓基质干细胞移植对兔早期激素性股骨头坏死的治疗作用研究

目的观察加味肾气丸联合髓芯减压术、人牙髓基质干细胞(hDPSCs)移植对兔早期激素性股骨头坏死的治疗作用。方法将50只日本雄性大耳白兔随机分为正常组、模型组、髓芯减压组(以下简称髓减组)、髓芯减压+干细胞移植组(以下简称髓减干移组)、髓芯减压+干细胞移植+加味肾气丸组(以下简称髓减干移加味肾气丸组),每组10只。除正常组外其余各组均通过肌肉注射醋酸泼尼松龙注射液建立激素性股骨头坏死模型,正常组肌肉注射0.9%氯化钠注射液。正常组和模型组造模期间不予任何干预,髓减组于造模第4周给予髓芯减压术治疗,髓减干移组于造模第4周后予髓芯减压术+hDPSCs移植治疗,髓减干移加味肾气丸组在开始造模第1天即开始进行加味肾气丸灌胃治疗,每周2次,连续灌胃12周,于造模第4周后予髓芯减压术+hDPSCs移植治疗。比较各组造模第12周空骨陷窝率、血清血管内皮生长因子(VEGF)水平变化情况,并通过Micro CT检测计算各组造模第12周骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)、骨密度(BMD)变化情况。结果与正常组比较,模型组造模第12周空骨陷窝率升高(P<0.05);与模型组比较,髓减组、髓减干移组、髓减干移加味肾气丸组造模第12周空骨陷窝率均降低(P<0.05),且3个治疗组组间比较差异也均有统计学意义(P<0.05),髓减干移加味肾气丸组水平最低,其次是髓减干移组,最后是髓减组。与正常组比较,模型组造模第12周后血清VEGF水平降低(P<0.05);与模型组比较,髓减组、髓减干移组、髓减干移加味肾气丸组造模第12周血清VEGF水平均升高(P<0.05),且3个治疗组组间比较差异也均有统计学意义(P<0.05),髓减干移加味肾气丸组水平最高,其次是髓减干移组,最后是髓减组。与正常组比较,模型组造模第12周BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BMD均降低(P<0.05),Tb.Sp、SMI均升高(P<0.05);与模型组比较,髓减组、髓减干移组、髓减干移加味肾气丸组造模第12周BV/TV、Tb.Th、Tb.N、BMD均升高(P<0.05),Tb.Sp、SMI均降低(P<0.05);3个治疗组组间比较,髓减干移组、髓减干移加味肾气丸组造模第12周BV/TV、Tb.Th、Tb.N、Tb.Sp、SMI改善均优于髓减组(P<0.05),髓减干移加味肾气丸组BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、SMI改善均优于髓减干移组(P<0.05)。结论加味肾气丸联合髓芯减压术、hDPSCs移植治疗早期激素性股骨头坏死兔模型疗效确切,可有效促进坏死股骨头血管再生,改善局部血运,促进骨细胞增殖,促进骨组织修复,多种方案联合治疗具有明显优势。

牙本质粘结剂直接盖髓的组织病理学研究

目的 观察 3种牙本质粘结剂直接盖髓后 ,不同时期内牙髓的反应。方法 兔牙 72颗 ,机械穿髓后分别用 3种粘结剂盖髓 (Vivadent,Densply ,Kulzer) ,Dycal为对照 ,于 7天、1 5天、2 4天每组拔除 6颗牙 ,脱钙切片 ,镜下观察充血 ,炎细胞 ,纤维化 ,牙本质桥 ,修复性牙本质 ,细菌污染情况。结果 所有实验牙齿都有牙本质桥形成 ,封闭穿髓孔。同一时期内 ,兔牙髓对不同盖髓剂的反应无显著性差异。除对照组外 ,同种粘结剂在不同时期内对牙髓的影响无显著性差异。结论 此 3种粘结剂对兔牙髓具有良好的生物相容性 。

高频电刀处理家兔牙髓对牙周组织表面温度变化的实验研究

目的利用红外线测温技术测量高频电刀处理家兔牙髓时牙周组织表面的温度变化,初步评估高频电刀产生的高热可能对牙周组织的影响程度。方法选取20只3月龄的健康实验家兔,共40颗上颌门齿,再随机分成4个小组。在上腭黏膜标记好固定测温点,分别使用5.0 W、10 W、15 W、20 W输出功率的高频电流处理相应小组的家兔牙髓(分别处理冠髓或根髓),并同步对已标记的2个测温点测温,根据温度变化的数据进行统计学分析。结果经高频电刀处理牙髓前后的牙周组织表面温度变化值在-0.02℃～2.61℃之间;处理冠髓时,使用15 W及以上功率的,两测温点有统计学差异;处理根髓时,使用20 W功率的,两测温点有统计学差异;使用10 W及以上功率分别处理冠髓和根髓,牙颈部和根尖的温度变化有统计学差异。结论使用4种输出功率处理家兔牙髓,牙周组织表面温度的变化值(-0.02℃～2.61℃),都在对牙周组织不造成副损伤的安全阈值内。由此,我们认为,使用20 W以内输出功率处理家兔牙髓时,对根尖周的热损伤不会太大。

内毒素血症致牙髓组织病理学改变的实验研究

目的：观察家兔病理性氧供依赖性（ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｏｘｙｇｅｎｓｕｐｐｌｙｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ，ＰＯＳＤ）模型中各组织，特别是牙髓组织的病理学改变，以及抗ｒｈＴＮＦ单克隆抗体对实验动物是否有保护作用。方法：２８只大耳白兔随机分为对照、内毒素、抗体保护和无关抗体４组，每组７只。以小剂量大肠杆菌内毒素分次注射复制ＰＯＳＤ模型。ＥＬＩＳＡ测定血中ＴＮＦ浓度。采用组织学、组织化学和免疫组化法评价牙髓形态学特征。结果：①内毒素组与无关抗体组的牙髓组织有充血、水肿、渗出、弥漫性血管内凝血等病理变化，而对照组和抗体保护组形态正常；②内毒素组的ＴＮＦ浓度明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），抗体保护组的ＴＮＦ浓度则明显低于无关抗体组（Ｐ＜０．０１）。结论：内毒素血症可致牙髓组织的病理学改变，抗ｒｈＴＮＦ单抗可以阻断其病变，具有临床应用前景。

高频电流处理家兔牙髓的初步实验研究

目的验证高频电流处理家兔牙髓的效果。方法选取约3月龄的健康实验家兔55只,共220颗切牙,分成8个实验组和2个对照组。实验组暴露牙髓后分别采用5、10、15、20W输出功率下的高频电流处理家兔牙髓,对照组牙髓不作任何处理。实验完成后,即刻将两组家兔切牙连同牙槽骨一同切下,制成联合切片,通过组织学方法将实验组和对照组的切片进行对比,观察实验组处理后的牙髓组织、根管壁及根尖周组织的变化,比较各实验组中各组织损伤的程度。结果 5、10W组高频电流处理后的牙髓,主要是出现局部点灶状的变性坏死区,变性坏死区的改变以凝固性坏死改变为主。15、20W实验组高频电流可令根髓出现变性坏死及断裂现象,可达到药物失活牙髓的组织学变化指标。各实验组根管壁均无异常变化,根尖周未发现副损伤。结论采用20W输出功率下的高频电流处理兔牙髓,可使牙髓失活,且未发现根管壁和根尖周的副损伤。

转化生长因子β3促进兔牙髓干细胞成骨向分化的体外实验研究

目的:探讨转化生长因子β3(TGF-β3)体外诱导兔牙髓干细胞(rDPSCs)骨向分化的效果及其作用机制。方法:酶解组织块法分离的rDPSCs分为实验组(rDPSCs+80 ng/ml TGF-β3),对照组(rDPSCs+矿化液)和空白组(rDPSCs),免疫细胞化学染色法行COL-I、OCN, Runx-2染色;RT-qPCR检测各组ALP、COL-I、OCN、Runx-2表达水平;茜素红(ARS)染色观察矿化结节。结果:免疫细胞化学染色结果示实验组成骨蛋白表达明显强于其余2 组;RT-qPCR结果显示实验组中成骨基因的表达均高于其余2 组(P<0.05);实验组矿化结节形成数高于其余2组(P<0.05)。结论:TGF-β3能促进rDPSCs骨向分化。

兔牙髓干细胞与雪旺细胞体外间接共培养对增殖和兔牙髓干细胞成神经向分化的研究

目的:体外间接共培养兔牙髓干细胞(rabbit dental pulp stems cells,rDPSCs)与兔雪旺细胞(rabbit Schwann cells,rSCs),研究两种细胞对彼此增殖的影响以及rSCs诱导rDPSCs神经向分化的可能性。方法:通过Transwell间接共培养系统构建rSCs/rDPSCs间接共培养体系,采用MTT法检测两种细胞对彼此增殖的影响;通过免疫荧光染色和Western bolt检测S-100β和NF-H的表达,研究rSCs诱导rDPSCs神经向分化的可能性。结果:将rDPSCs与rSCs以1∶2比例间接共培养5 d时,rDPSCs能够促进rSCs的增殖(P<0.05),同时rSCs对rDPSCs的增殖也有明显的促进作用(P<0.05);在与rSCs间接共培养7 d与14 d后,rDPSCs形态与神经细胞类似,并表达S-100β和NF-H,并且14 d时两种蛋白表达更高(P<0.01)。结论:将rDPSCs与rSCs间接共培养,5 d时rDPSCs与rSCs能显著促进彼此的增殖,且rSCs能诱导rDPSCs神经向分化。

光固化复合树脂对牙髓影响的实验研究

目的 评价光固化复合树脂修复纯种大白兔牙体时对牙髓的影响。方法 对照组 (N)分为 4个小组 ,分别用 4种光固化复合树脂充填 ;实验组 (P)也分为 4个小组 ,氢氧化钙垫底 +同法光固化复合树脂充填 ,在显微镜下观察各组标本的组织切片。结果 ①在一定的有效牙本质厚度时 ,光固化复合树脂修复可引起牙髓炎症。②不同品牌的复合树脂引起的牙髓炎症反应程度不同。③氢氧化钙垫底能够有效地保护牙髓。结论 光固化复合树脂作为一种新型的修复材料 ,在医疗实践中应密切观察牙髓的变化。

转化生长因子β3促进兔牙髓干细胞成骨向分化机制的初步研究

目的探讨转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)体外联合兔牙髓干细胞(rabbit dental pulp stem cells,r DPSCs)诱导其成骨向分化的作用机制。方法酶解组织块法分离获得r DPSCs;将r DPSCs分为实验组(r DPSCs+80μg/L TGF-β3)、对照组(r DPSCs+矿化液)和空白组(r DPSCs),3组细胞分别培养7、14 d后行ALP活性定量检测; RT-qPCR检测COL-1A1、Runx-2、OPN、BSP和Smad4基因的表达; Western blot法检测COL-1A1和Runx-2蛋白的表达情况;茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果成功分离获得r DPSCs;实验组ALP含量明显高于对照组和空白组(P<0.05); COL-1A1、Runx-2、OPN、BSP、Smad4基因的表达均高于空白组(P<0.05); COL-1A1、Smad4基因的表达高于对照组(P<0.05); Western blot结果示实验组COL-1A1和Runx-2蛋白的表达均强于其余两组(P<0.05);实验组矿化结节较其余两组明显。结论 TGF-β3体外促进r DPSCs成骨向分化; TGF-β3促进r DPSCs成骨向分化可能通过激活Smad通路来实现。

转化生长因子-β_3和牙髓干细胞在兔面神经损伤修复中作用

目的探讨再生室内联合应用牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)和转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)修复兔面神经横断性损伤的可行性,比较各时间段不同药物干预后面神经的恢复情况。方法健康成年新西兰大白兔36只,随机分为DPSCs+TGF-β3组(实验组)、TGF-β3组和PBS组,每组各12只,3组均于兔左面颊部分离面神经上颊支并切断,利用硅胶管作为再生室桥接离断的神经上颊支,建立面神经上颊支横断伤模型。实验组在再生室内加入100ng/μL TGF-β3液和1×108/LDPSCs悬液0.1mL,TGF-β3组加入等量100ng/μL TGF-β3液,PBS组加入等量PBS液,术后4、12周比较3组兔面神经修复再生情况。结果4、12周时实验组神经纤维数[(1 034.58±94.28)、(1 425.92±188.98)根]和纤维直径[(2.05±0.14)、(7.18±0.40)μm]高于TGF-β3组[(935.00±44.60)、(1 053.42±135.26)根,(1.56±0.12)、(6.21±0.47)μm]和PBS组[(555.50±80.20)、(694.36±24.11)根,(1.26±0.08)、(3.64±0.56)μm](P<0.05);12周时3组再生神经纤维总数和纤维直径均高于4周时(P<0.05)。结论 TGF-β3与DPSCs联合应用可有效促进面神经再生,二者联合应用较单用TGF-β3修复效果好;DPSCs可作为种子细胞应用于面神经组织工程。

牙髓干细胞来源外泌体修复兔颞下颌关节软骨损伤后软骨组织修复的实验研究

目的:研究牙髓干细胞来源外泌体在兔体内对颞下颌关节软骨损伤的修复能力。方法:由兔前牙及磨牙获取牙髓干细胞,差速离心法分离外泌体并利用透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析,免疫印迹法鉴定。将获得的外泌体种植到兔的损伤软骨组织中,实验组为外泌体组,阳性对照组为透明质酸钠组,对照组为常规手术组,在4、8、12周处死,HE染色观察软骨组织再生情况。结果:成功提取兔牙髓干细胞并提取鉴定外泌体,将外泌体种植到兔损伤软骨组织中,发现其可有效促进损伤软骨组织的修复。结论:牙髓干细胞的外泌体能够有效促进兔颞下颌关节软骨损伤后软骨组织修复能力,为外泌体对组织再生的调控提供依据。