超声波法提取恒山黄芪叶茶黄酮最佳工艺研究

目的探索超声波法提取黄芪叶茶中黄酮的最优方法。方法利用超声波辅助提取法结合单因素试验和正交试验,确定提取恒山黄芪叶茶中黄酮的最佳提取工艺。结果因素影响力排序:料液比>乙醇浓度>超声波功率>提取温度>提取时间。得到最佳提取工艺为:料液比为1∶35 g/mL,乙醇浓度为60%,超声波功率为280 W,提取温度为60℃,提取时间为45 min。结论在此最佳条件下,恒山黄芪叶茶中总黄酮的提取率为14.302%。

基于网络药理学、分子对接技术及实验验证研究黄芪提取物治疗缺血缺氧性脑病的机制

运用网络药理学、分子对接技术探究黄芪提取物治疗缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的机制,并进行实验验证。通过中药系统药理学数据库平台(TCMSP)、UniProt、GeneCards和OMIN数据库获得黄芪提取物的主要活性成分和基因靶点,通过GeneCards数据库获得HIE的相关靶点;利用Cytoscape软件构建黄芪提取物“活性成分-药物靶点”网络。应用PDB和TCMSP数据库获取分子结构,使用SYBYL-X2.1软件进行模拟分子对接。建立大鼠动物试验模型,采用Western blot法检测关键蛋白的表达情况。根据TCMSP数据库,共得到黄芪提取物的70个活性成分及其350个相关靶点,去除重复靶点和基因注释后,最终获得“黄芪提取物”有效成分的120个靶点。通过将黄芪提取物的120个靶点与HIE的前242个靶点(相关性分数>5)相映射,筛选出黄芪提取物治疗HIE的18个潜在靶点,发现4-羟基肉桂酸、顺式阿维酸、黄芪紫檀烷苷、常春藤皂苷元、华良姜素为关键活性成分。将18个潜在靶点输入STRING中进行蛋白相互作用分析,共发现3个核心靶点(degree值>30),分别为诱导型一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase 2,NOS2)、前列腺素氧化环化酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)。动物实验显示,黄芪提取物能够降低大鼠模型海马组织内的NOS2、PTGS2、MAPK4、CASP8蛋白表达。通过网络药理学分析和实验验证得出黄芪提取物能够通过多靶点、多通路起到抑制神经元凋亡、保护神经细胞的作用。

基于NLRP3介导的细胞焦亡探讨当归黄芪超滤物对冠状动脉微血管疾病的影响

目的观察当归黄芪超滤物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)焦亡的影响,探讨其治疗冠状动脉微血管疾病的作用机制。方法将HUVEC分为空白组、模型组、MCC950组和当归黄芪低、中、高剂量组,造模及含药血清处理后,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,鬼笔环肽染色检测细胞骨架形态,免疫荧光染色检测细胞血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、血管生成素-2(Ang-2)、活性氧(ROS)、内皮素-1(ET-1)、血栓素A2(TXA2)表达,ELISA测定细胞上清液白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,Weasten blot检测细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、GSDMD蛋白表达。结果与空白组比较,模型组HUVEC细胞活力降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01),细胞微丝结构紊乱、打结,VEGF、eNOS表达降低,Ang-2、ROS、ET-1、TXA2表达升高,细胞上清液IL-1β、IL-18含量增加(P<0.01),细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,低、中、高剂量当归黄芪含药血清可提高细胞活力(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),改善细胞微丝结构,升高VEGF、eNOS表达,降低Ang-2、ROS、ET-1、TXA2表达,减少细胞上清液IL-1β、IL-18含量(P<0.05),降低NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达(P<0.05),且当归黄芪中剂量组作用更明显(P<0.05)。结论当归黄芪超滤物可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的HUVEC焦亡,减轻内皮细胞功能障碍,进而治疗冠状动脉微血管疾病,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体组装相关。

黄芪提取工艺优化及凝胶产品的研制

目的 采用Box-Behnken响应面法优选黄芪凝胶产品的制备工艺。方法 采用单因素试验及正交试验优选黄芪水提液的最佳工艺,以感官评分为评价指标,以木糖醇添加量、原料B浸泡时间、黄芪与中药A配比、柠檬酸、果胶添加量为考察因素进行单因素试验,用Box-Behnken响应面法优选黄芪凝胶产品的制备工艺。结果 黄芪提取条件:料液比1∶10、时间2 h、次数3次。凝胶产品制备工艺:木糖醇的添加量20%,原料B浸泡时间2.5 h,黄芪与中药A的比例2∶1,柠檬酸添加量0.20%,果胶添加量2.50%;凝胶产品中水分的含量为72.71%,黄酮的含量为0.81%。结论 研究所优选出的黄芪提取工艺,提取效率高,所制备的黄芪凝胶产品颜色鲜红,酸甜适中,工艺简便易行具有一定的开发应用前景。

黄芪提取工艺优选及其药物配比优化研究

目的采用正交试验法优选黄芪水提液提取的最佳条件,利用Box-Behnken响应面法优化黄芪及药物配比研究。方法水浴回流法提取黄芪,以干膏率为评价指标,在料液比、提取时间、提取次数3个单因素的基础上进行正交试验优选黄芪水提液的最佳提取条件。该实验以黄芪为原料,在单因素的基础上,以黄芪浓缩液/药物混合液、辅料1加入量、辅料2加入量、柠檬酸加入量为考察因素,优化黄芪及药物最佳配比。结果黄芪水提液最佳提取条件为料液比1∶6,提取时间1 h,提取次数3次,黄芪的提取率为44.75%。黄芪及药物配比为以50 g药物混合液为基准,黄芪浓缩液/药物混合液为29%,辅料1加入量0.15 g,辅料2加入量20 g,柠檬酸加入量0.2 g,最终感官评分达92.5分,与预测值相近,说明模型拟合良好,该优化工艺准确可行。结论黄芪最佳提取工艺及其药物配比优化结果重现性好,工艺简便易行,可以为黄芪系列产品的开发奠定基础,有一定的开发应用前景。

同时蒸馏-萃取黄芪地上部分挥发油成分及其气相色谱-四极杆飞行时间串联质谱分析

目的采用同时蒸馏-萃取方法提取甘肃产黄芪地上部分挥发油,并运用气相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(GC-Q/TOF-MS)技术对中药黄芪地上部分挥发油中的化学成分进行鉴定,为黄芪的进一步开发和利用提供理论依据。方法应用GC-Q/TOF-MS检测挥发油中的化学成分,通过NIST 14.L数据库进行化合物检索并鉴别,采用面积归一法确定各成分的相对含量。结果共鉴定出挥发性成分66种,占挥发油总量的93.62%。主要包括脂肪族化合物(79.48%),芳香族化合物(6.71%)和萜类化合物(4.68%)。脂肪族成分主要为植物醇(16.84%),1-辛烯-3-醇(15.42%),反式-3-己烯-1-醇(9.51%)。芳香族成分主要为苯甲醇(2.68%),苯乙醇(1.84%)。萜类成分主要为芳樟醇(2.98%)。结论GC-Q/TOF-MS技术能准确快速地鉴定黄芪地上部分挥发油,且挥发油化学成分丰富,为黄芪药材挥发油的进一步开发和利用提供新思路。

响应面法优化黄芪黄酮提取工艺的研究

为确定黄芪中黄酮类成分乙醇回流提取的最佳工艺条件,采用高效液相色谱法对4种黄芪黄酮(毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素和芒柄花苷)的含量进行测定;以黄酮得率为指标,采用响应面法对主要工艺参数进行优化并得到回归模型。方差分析结果表明:回归模型较好地反映了黄芪黄酮得率与浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和液固比的关系;最优工艺条件为,提取温度75℃,提取时间2.5 h,乙醇体积分数88.3%,液固比25 mL/g。此工艺条件下提取黄芪黄酮得率为0.977 mg/g,回归模型的预测值与实测值的相对误差<1%,该回归方程与实际情况拟合较好。

白术和黄芪不同提取部位对小肠上皮细胞增殖的影响

目的观察白术和黄芪的不同提取部位对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖的影响。方法以系统溶剂分离法分别提取白术和黄芪的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、醇沉上清液和多糖部位;另将白术和黄芪以乙醇提取,D101大孔树脂吸附法得到40%和70%乙醇洗脱部位。MTT法检测白术和黄芪正丁醇部位、醇沉上清液、多糖部位、40%和70%醇洗脱液对IEC-6细胞增殖的作用。结果初步发现黄芪正丁醇部位、醇沉上清部位、糖复合物、40%和70%醇洗脱部位加药24h能促进细胞增殖;白术40%乙醇洗脱液部位加药24h能促进细胞增殖,白术正丁醇部位、糖复合物、40%和70%乙醇洗脱液部位加药48h能促进细胞增殖。结论白术和黄芪正丁醇部位、多糖部位、40%和70%醇洗脱液在加药后不同时间对IEC-6细胞有不同程度的促进增殖作用;采用系统溶剂分离法和大孔树脂吸附法提取白术和黄芪不同部位,可以用于细胞增殖实验,为进一步开展白术和黄芪在细胞水平上的药理研究提供参考。

黄芪和当归各提取物优化配方对特发性肺纤维化小鼠生存状况及肺细胞新生相关基因表达水平的影响

【目的】观察黄芪当归各提取物优化配方对特发性肺纤维化(IPF)小鼠生存状况、转化生长因子(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响,确定最佳治疗方案,并探讨其内在机理。【方法】选用SPF级ICR雄性小鼠105只,随机分为正常组、模型组、5个中药治疗组(即黄芪当归组分优化方1~5组)。模型组和治疗组于气管内注射博莱霉素(剂量为5 mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型,在第21天时剪取小鼠肺组织,采用碱水解法检测羟脯氨酸(HYP)的含量;苏木素—伊红(HE)染色及Mallory氏染色,观察肺组织形态变化;聚合酶链反应(PCR)技术检测肺细胞新生相关基因转化生长因子(TGF)-β、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。【结果】HE染色及Mallory氏染色结果显示,5个中药治疗组较模型组肺纤维化程度均有所改善,其中优化方1组改善明显,肺泡结构恢复较好。治疗组小鼠的21 d死亡率较模型组均有所降低,且优化方1组、5组作用显著,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,治疗组小鼠肺组织HYP含量各有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。TGF-β、VEGF基因表达水平模型组均高于正常组,治疗各组(除优化方5组TGF-β表达外)较模型组有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芪水提物和当归醇提物所占比例较大时,可降低肺中HYP的含量,抑制TGF-β、VEGF表达水平,从而改善小鼠肺纤维化的程度。

黄芪提取物对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用

目的:研究黄芪提取物(RAE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促血管新生作用。方法:以体外培养HUVEC为模型,XTT法及细胞计数法检测不同剂量黄芪提取物对细胞增殖的影响;细胞迁移实验检测加药后细胞迁移能力;采用Transwell chamber进行细胞侵入实验检测黄芪提取物对细胞侵入能力的影响;管形形成实验观察加入黄芪提取物后细胞分化情况。结果:XTT法检测HUVEC在黄芪提取物浓度为12.5μg/ml时产生最大增殖效应,增殖率为42.04%。细胞计数法测得在黄芪提取物浓度为25μg/ml时细胞数目比对照组增多124.64%。同时发现在黄芪提取物浓度为25μg/ml时能够最大能力地诱导细胞侵入和管形形成,其侵入率为66.68%,管形分枝点增值率为44.38%;而在浓度为12.5μg/ml时能够最大限度地诱导细胞迁移,迁移率为74.94%。结论:黄芪具有促进血管新生的作用。

凝胶渗透色谱净化超高效液相色谱-串联质谱法检测甘草及其提取物中的11种氨基甲酸酯类农药残留

建立了甘草及其提取物中11种氨基甲酸酯类农药多残留的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。以11种氨基甲酸酯类农药为目标分析物,样品经乙腈超声提取、凝胶渗透色谱(GPC)净化后,用UPLC-MS/MS检测。以甘草及其提取物为例,分别进行了0.02、0.04和0.1mg/kg3个添加浓度的11种目标分析物的加标回收率实验,甘草中11种目标分析物的回收率为72.2%～94.0%,相对标准偏差为0.7%～7.8%;甘草提取物中11种目标分析物的回收率为73.8%～94.7%,相对标准偏差为1.5%～12.7%。该方法灵敏度高、准确度好,符合农药多残留检测的技术要求,适用于甘草、黄芪等中药材及其提取物中氨基甲酸酯类农药残留的检测。

基于BP神经网络的纤维性根茎药材酶解提取-超滤纯化的临界通量与压力预测

为了有效解决纤维性根茎药材在采用酶解提取-超滤纯化集成技术过程中的膜污染问题,保证该集成技术的顺畅使用,以红芪酶解液的超滤数据为基础,采用BP神经网络构建了临界通量和临界压力预测模型,对模型的模拟能力和对黄芪的适用性进行了检验,并对利用连接权法计算得到的输入变量的相对贡献进行了敏感性分析。结果表明,所建模型具有很好的模拟能力和适用性,模拟的临界通量和临界压力的绝对误差和误差率的平均值分别为1.5228 L/(m^2·h)、0.0032 MPa和3.46%、2.50%,R^2分别为0.96和0.95;对黄芪模拟的绝对误差和误差率的平均值分别为1.4360 L/(m^2·h)、0.0034 MPa和3.93%、2.80%;输入变量对临界通量和压力的相对贡献大小顺序均为黏度>浓度>p H>温度。

超高压提取黄芪甲苷工艺研究

目的研究超高压提取黄芪药材中皂苷类成分的最佳工艺。方法以黄芪甲苷含量为指标,蒸发光散射检测器(ELSD)进行高效液相色谱检测,正交设计法对提取压力(100,300,500MPa),溶剂中乙醇浓度(50%,70%,90%),溶剂与原料比(10:1,15:1,20:1)以及提取时间(1,3,5min)等影响因素进行考察,确定最优提取条件,并同热回流提取作比较。结果超高压提取黄芪皂苷类成分的最佳工艺为:压力300MPa,溶剂乙醇体积分数70%,溶剂原料比20:1(mL.g-1),提取时间5min。超高压提取的效率优于热回流提取。结论同热回流方法比较,超高压提取黄芪中皂苷类成分,具有效率高、时间短和能耗低等优点。

紫锥菊 黄芪对传染性囊病疫苗免疫雏鸡淋巴细胞亚群和肿瘤坏死因子含量的影响

为探讨紫锥菊、黄芪提取物提高雏鸡免疫力的效果,本试验选用紫锥菊、黄芪、紫黄(紫锥菊黄芪)合剂3种组方分别以不同的3种剂量给6日龄雏鸡连续口服7 d,13日龄进行腔上囊疫苗免疫,在20,27,34日龄时ELISA方法检测血清中TNF-α的含量;在13,20,27日龄时流式细胞仪检测外周血中CD4+、CD8+含量并计算CD4+/CD8+比值。结果表明,紫锥菊对外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群的比例以及血清TNF-α的含量均有一定的提高,说明紫锥菊提取物针对IBD疫苗具有明显的免疫促进作用,是一种效果极为明显的免疫增强剂。

黄芪和白术提取物对IEC-6细胞迁移的影响

目的筛选益气健脾中药黄芪和白术促进小肠上皮细胞(IEC-6)迁移的有效提取部位。方法以系统溶剂分离法从黄芪、白术药材分别得到糖复合物、正丁醇萃取物、醇沉上清液以及大孔树脂吸附后70%乙醇洗脱部位作受试药。IEC-6细胞接种于6孔板并培养24 h,划痕法造细胞迁移模型,划痕后加入各受试药,24 h后观察细胞迁移情况;并进一步观察具有促进细胞迁移的有效部位对二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致细胞迁移抑制的影响。结果 50 mg.L-1的黄芪糖复合物或白术糖复合物能促进细胞迁移(P<0.01);黄芪、白术的正丁醇萃取物、醇沉上清液、大孔树脂吸附后醇洗脱部位对细胞迁移均无明显影响;2.5 mmol.L-1的DFMO能抑制细胞迁移(P<0.01),加入DFMO同时加入100 mg.L-1黄芪糖复合物或200 mg.L-1白术糖复合物能使细胞迁移恢复至接近正常水平。结论黄芪糖复合物和白术糖复合物能促进IEC-6细胞迁移,还能使DFMO所致的细胞迁移抑制恢复至接近正常水平。

黄芪药材的微波提取工艺研究

目的研究用微波提取黄芪的优化工艺。方法以黄芪的有效成分黄芪甲苷为指标,用均匀实验设计法对黄芪的微波提取工艺进行优化,并与传统工艺比较。结果黄芪最佳工艺为:黄芪先浸泡6 h后,然后提取3次,每次10倍量水、90 min,黄芪甲苷提取量略优于传统提取工艺的提取量。结论用微波提取黄芪药材中的有效成分-黄芪甲苷较传统提取工艺的提取率高,并能节省工时、降低能耗。

黄芪水提取物吸湿模型的拟合

目的拟合黄芪水提取物吸湿模型。方法煎煮法制备水提取物,重量法绘制提取物的吸湿动力学曲线和吸附/解吸等温线,对吸湿数据进行拟合。以均方根误差(RMSE)、残差平方和(RSS)和决定系数(R2)为评价指标,优化拟合模型。结果吸湿动力学曲线的双指数模型,以及吸附/解吸等温线的Peleg模型为拟合效果最佳的2个模型(R2最接近于1,RMSE和RSS最接近于0)。其中,各吸附/解吸等温线都属于第Ⅱ种类型"S"等温线,而解吸等温线平衡含水率高于吸附等温线,故出现明显的滞后现象,并属于H3型。结论双指数模型和Peleg模型分别能较好地拟合黄芪水提取物的吸湿动力学曲线和吸附/解吸等温线。

黄芪中重金属超临界CO_2净化技术研究

目的利用超临界CO2 萃取技术净化黄芪中重金属。方法a 以二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDTC)为金属络合剂 ,用超临界流体萃取技术净化药材中的重金属 ,并对萃取方案进行最优化。b 选择不同的混酸消化液完全消解药材后 ,以空气 乙炔火焰AAS法和氢化物发生AAS法分别测定其中的铅 (Pb)、镉 (Cd) ,以及砷 (As)、汞 (Hg)。c 采用UCTRONVX -ODS(2 5 0mm×4 6mm ,5 μm)色谱柱 ,以乙腈 水 (V∶V =30∶70 )为流动相 ,检测波长为 2 0 3nm ,卡马西平为内标 ,测定黄芪中黄芪甲苷的含量。结果与结论a 确定了药材中重金属的最佳萃取条件。在最佳萃取条件下 ,重金属净化率达到 85 %以上 ;同时 ,中药材中的有效成分损失低于 5 %。b 建立了药材中金属元素和有效成分的含量测定方法 ,为正确评价中药材的质量奠定了基础 。

正交试验优化酶法提取黄芪总黄酮工艺

以蒙古黄芪为试验材料,研究纤维素酶解辅助乙醇提取黄芪总黄酮的工艺条件。考察了酶添加量、酶解时间、液固比、乙醇浓度、提取时间、提取温度6个单因素对黄芪总黄酮提取率的影响,在单因素试验的基础上,选择四因素四水平进行正交试验优化工艺参数。结果表明:蒙古黄芪在纤维素酶添加量7.5μL/g,pH值4.0,温度55℃,酶解预处理1.5h后,液固比对黄芪总黄酮提取率影响显著,其次是提取时间和乙醇浓度,提取温度对黄芪总黄酮提取率的影响相对较小。在液固比30mL/g,乙醇浓度90%,提取温度75℃,提取时间2.5h的最优工艺条件下,黄芪总黄酮的提取率为0.57%。与传统醇提法(0.39%)相比,黄芪总黄酮提取率提高了46.15%。

用均匀设计优化黄芪皂苷提取工艺

目的 :探讨黄芪最佳提取工艺。方法 :采用均匀设计优选 ,以黄芪甲苷为检测指标。结果 :最佳提取条件为 :加入 8倍量 85 %乙醇 ,提取 3次每次 1小时。结论 :优选的黄芪提取工艺方法简便可靠 ,适合工业化生产。