炆何首乌乌发的药效评价及其网络药理学机制研究

目的:对炆何首乌乌发的药效进行评价,并对其作用机制进行研究。方法:构建小鼠白发模型,通过白发面积在新生毛发区域占比、苏木精-伊红(HE)染色及血浆中酪氨酸酶(TYR)的含量来评价炆何首乌的乌发作用;并利用网络药理学及免疫荧光探讨其作用机制。结果:与假手术组比较,模型组小鼠背部白发面积明显升高,皮肤组织中含黑色素的毛囊数量明显降低,血浆中TYR含量明显降低。与模型组比较,阳性药、制何首乌(中剂量、高剂量)及炆何首乌(低剂量、中剂量、高剂量)均能明显降低小鼠白发面积;制/炆何首乌低剂量、中剂量、高剂量能够明显增加小鼠皮肤组织中黑色素毛囊数量;制/炆何首乌高剂量可以明显提高小鼠血浆中TYR含量。在生药量相同的条件下,与制何首乌比较,炆何首乌中剂量能明显增加黑色素毛囊数量;炆何首乌低剂量、高剂量能明显增加小鼠血浆中TYR含量。网络药理学分析发现,炆何首乌的乌发作用涉及黑色素生成和Wnt信号通路等。免疫荧光结果表明,与假手术组比较,模型组小鼠皮肤组织中淋巴增强结合因子1(LEF1)及TYR表达水平明显降低;炆何首乌组小鼠皮肤组织中LEF1及TYR表达水平均明显增高。结论:炆何首乌对小鼠白发模型具有一定的改善作用,其作用机制可能与上调LEF1及TYR的表达水平有关。

基于多成分含量测定的制何首乌煮散饮片与原饮片煎煮质量比较研究

【目的】建立制何首乌提取液多成分含量测定方法,比较制何首乌煮散饮片与传统饮片煎煮过程中化学成分的变化规律,为中药煮散饮片的制备和临床应用提供科学依据。【方法】采用高效液相色谱法(HPLC)测定没食子酸、5-羟甲基糠醛、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素等主要成分的含量,以出膏率、醇溶性浸出物作为评价指标,考察标准汤剂煎煮法和非标准汤剂煎煮法对制何首乌煮散饮片和原饮片提取液的影响。【结果】非标准汤剂煎煮法:制何首乌煮散饮片中没食子酸、5-羟甲基糠醛、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素等指标性成分含量均显著性提高,提升比例分别为71.18%、141.67%、146.29%、150.00%、625.00%、296.00%,尤其是大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷提升了7.25倍。标准汤剂煎煮法:制何首乌煮散饮片中上述指标性成分含量均显著性提高,提升比例分别为28.09%、10.53%、66.01%、45.45%、316.67%、65.85%,尤其是大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷提升了4.17倍。采用标准汤剂煎煮法的煮散饮片各指标含量的相对标准偏差(RSD)在10%以内。【结论】制何首乌煮散饮片指标性成分溶出和质量均一性均优于原饮片,可提高临床用药的精准性,需酌情减量使用。

不同地区制何首乌中二苯乙烯苷含量测定及稳定性考察

目的 :测定不同地区制何首乌中 2 ,3,5 ,4′ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷 (简称二苯乙烯苷 )含量 ,同时考察其稳定性。方法 :采用高效液相色谱法测定二苯乙烯苷含量。稳定性实验采用高温试验及60 Co γ射线辐射试验。结果 :制何首乌中二苯乙烯苷含量为 0 .12 7%～ 4 .15 0 %。温度及湿度影响二苯乙烯苷稳定性 ,干燥条件下60 Co γ射线辐射稳定。结论

不同炮制工艺对制首乌外观性状及内在质量的影响

目的：以鲜品何首乌为研究对象，确定合理制首乌炮制加工工艺参数，为制定制首乌炮制加工标准操作规程提供试验依据。方法：对比不同前处理、不同蒸制时间制首乌外观性状及内在质量变化情况。结果：采用鲜品直接干燥后用黑豆汁拌匀，炖制制首乌的时间应为44～52 h；鲜品蒸制干燥后再用黑豆汁拌匀，炖制制首乌则需至少炖制48 h以上，这样才能保证游离蒽醌类成分含量符合要求并相对稳定。结论：为更加合理地优选制首乌工艺并最大限度发挥药效，以二苯乙烯苷及蒽醌类成分的含量来控制制首乌的质量有待商榷，是否增加磷脂类成分和多糖的含量作为制首乌的质量控制检测指标有待进一步研究完善。

制首乌对脑内灌流6-羟基多巴胺所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的影响

目的观察制首乌对脑内灌流6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的影响,探讨制首乌对脑保护的作用机理。方法用脑内微透析造模,水杨酸捕获羟自由基,高效液相-电化学检测器测定活体脑内羟自由基所形成的2,3二羟基苯甲酸(2,3-DHBA)和2,5二羟基苯甲酸(2,5-DH-BA)。结果6-OHDA脑内灌流后,模型组大鼠纹状体细胞外液2,3-DHBA和2,5-DHBA均迅速增高,前者在观察全程中一直显著高于对照组(P<0.01);后者部分时间点显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);制首乌组的2,3-DHBA有5个时点显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论制首乌对6-OHDA脑内灌流引起的细胞外液羟自由基升高有一定程度的抑制作用,提示其脑保护作用的机理之一与抗氧化有关。

产地与炮制方法对何首乌5-羟甲基糠醛含量的影响

【目的】测定何首乌不同产地的炮制品中5-羟甲基糠醛的含量,为制何首乌质量控制方法的建立奠定基础。【方法】采用Agilent SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,甲醇—水(体积比为7∶93)等梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm。【结果】何首乌片中不含5-羟甲基糠醛;不同产地同一炮制方法的样品中5-羟甲基糠醛的含量差异较大,其中以四川成都产的含量最高;而不同炮制品中又以黑豆汁炖的样品中含量最高,达2.4324 mg/g。【结论】本研究建立的何首乌中5-羟甲基糠醛含量测定方法简便易行,结果准确、可靠。5-羟甲基糠醛是生何首乌经蒸制后产生的,可用于制何首乌的质量控制。

制何首乌对大鼠肝脏毒理的实验研究

目的 观察制何首乌对大鼠的长期毒性作用。方法 用制首鸟水煎浓缩液，每天按不同剂量灌服大鼠1次，连续3—3．5个月。结果 各给药组肉眼观察可见部分肝脏表面有脂肪颗粒，病理切片显示有不同程度的脂变、肝血窦扩张充血，偶见炎细胞浸润。各剂量组给药期间大鼠精神较差，进食量减少。体重增加较慢。停药后均减轻或消失。结论 制何首鸟长期灌胃对大鼠肝脏有一定的毒副作用。

制何首乌致小鼠网状内皮系统对血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影响

目的:研究不同浓度的制何首乌水煎浓缩液致小鼠网状内皮系统对血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影响,探讨制何首乌调整免疫的最佳浓度。方法:以小鼠为实验对象,用2g/mL(大剂量)、1g/mL(中剂量)、0.5g/mL(小剂量)三种不同浓度的制何首乌水煎液给小鼠灌胃12d,采用炭粒廓清法来检测RES吞噬异物的能力。结果:大剂量能明显增强RES吞噬功能,中、小剂量组无显著性差异。结论:制何首乌浓度为2g/ml时可显著提高实验小鼠非特异性免疫功能,具有扶正固本的作用。

制何首乌中二苯乙烯苷对光和热的不稳定性

目的研究二苯乙烯苷对照品溶液和制何首乌水提液中二苯乙烯苷对光和热不稳定的现象。方法采用高效液相色谱法考察紫外光照时间以及温度对两种来源的二苯乙烯苷质量浓度的影响和动力学的变化。结果在紫外光照条件下二苯乙烯苷的吸光度逐渐下降,其最大吸收波长由320 nm紫移到285 nm。在避光加热条件下二苯乙烯苷水解为苷元,其质量浓度变化遵循动力学一级反应。对照品溶液、制何首乌水提液中二苯乙烯苷的反应活化能分别为54.5和54.8 kJ/mol,在25℃条件下的t0.9分别为108 h和162 h,反应产物最大吸收波长仍为320 nm。结论在光和热影响下二苯乙烯苷在制何首乌水提液中比在水溶液中更稳定。但在含制何首乌制剂的制备过程中应尽量保持避光,温度保持在60℃及以下。

制何首乌质量标准的初步研究

用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化，并结合测定水溶性浸出物含量，能有效地控制何首乌炮制质量。

芪胶膏的薄层色谱鉴别

目的建立鉴别芪胶膏的薄层色谱法,为其质量控制提供依据。方法采用薄层色谱法对芪胶膏中的黄芪、三七、制何首乌进行定性鉴别。结果在薄层色谱中,供试品溶液在与对照药材或对照品相应位置上显相同颜色的斑点,且斑点清晰,阴性对照品在相应位置上无对应斑点。结论该法专属性强,可用于芪胶膏的质量控制。

何首乌制剂不良反应研究进展与成因分析

通过研究何首乌制剂不良反应研究进展与成因分析,为从制备工艺影响毒性表达的角度开展后续研究,提供研究思路。查阅近年来国内外相关文献,对含何首乌制剂的化学成分、炮制减毒、复方配伍、制备工艺、不良反应及其毒副作用机制等方面的研究进行归纳、总结,并进行成因分析。从成分方面,何首乌主要含有二苯乙烯类、卵磷脂、蒽醌类、鞣质、微量元素等成分,二苯乙烯苷及蒽醌类为其主要活性成分,提出何首乌毒性的可能物质基础;从炮制方面,炮制工艺影响何首乌的成分组成,何首乌炮制前后的血药含量图谱有显著不同,致大鼠肝物质代谢途径的作用机制不同。从剂量、用法等方面,长期大量摄入何首乌可致可逆性肝损伤,主要表现为血清肝功能指标异常。在复方配伍方面,不同配伍是否会造成何首乌不良反应尚未达成共识。何首乌制剂临床不良反应提示,其对肝脏有不可忽视的毒副作用,现代制备工艺可能也是其不良反应的原因之一,但其发生肝毒性的规律特点、作用机制、物质基础均尚不清楚。在何首乌的化学成分及其炮制减毒机制方面研究基础上,应积极探索药学制备工艺对何首乌肝毒性的影响;在加强何首乌制剂安全性评价基础上,积极开展药学制备、复方配伍、药物相互作用对肝毒性的影响;探索临床合理用药模式,尽量避免患者因服用何首乌制剂导致的不良反应。

何首乌不同炮制品抗氧化作用的研究

通过溴代苯致小鼠肝中毒实验,观察何首乌3种炮制品的抗氧化作用。方法:将小鼠按性别和体重随机分为12组,每组10只。各组动物每日按剂量灌胃给药一次,空白对照及模型组给予蒸馏水20mL/kg,连续14d。末次灌胃后30min,除空白对照组外,各组动物均按10mL/kg的剂量灌胃给予0.3mol/L的溴代苯油溶液。20h后处死,取肝加试剂制成匀浆液,按试剂盒方法测定肝组织中的SOD及MDA含量。结果:何首乌三样品按小鼠1、2、5g/kg三个不同剂量连续灌胃14d,对溴代苯诱发的小鼠肝损伤有不同程度的保护作用,可使肝组织中的SOD明显增加,5g剂量组的SOD含量为分别为何首乌生品(1.20±0.19)**U/mg,制何首乌为(1.08±0.13)**U/mg,制何首乌颗粒为(0.95±0.15)*U/mg;MDA明显下降,5g时MDA含量为:何首乌生品(121.11±17.92)**nmol/g,制何首乌为(139.72±20.37)**nmol/g,制何首乌颗粒为(142.56±22.60)*nmol/g(与模型组相比:*P<0.05,**P<0.01),表明三种炮制品均有抗氧化作用。结论:何首乌同等剂量下,生、熟品作用相当,颗粒剂作用稍弱。因此何首乌炮制时只要消除泻下作用即可,尽可能留其有效成分,增强其抗衰老作用。

对《中华人民共和国药典》2010年版一部何首乌及其饮片质量标准的修订建议

目的改进《中华人民共和国药典》2005年版中蓼科植物何首乌及其饮片的薄层鉴别方法,增订检查项。方法改变原有的薄层展开剂,用氯仿-甲醇展开系统代替毒性较大的苯-乙醇展开系统。按照2005版药典附录方法增订水分、灰分及浸出物检查等。结果何首乌及其饮片的薄层鉴别方法改为氯仿-甲醇展开系统,2次展开,能得到满意结果;制定的水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物的限度范围被复核单位验证认可。结论该展开系统具有毒性较低的优点,可以作为何首乌及其炮制品的薄层鉴别方法。增加了总灰分,酸不溶性灰分,水分及浸出物的检查,并制定了相关限度,更能全面地控制药品质量。

不同加工方法何首乌中多元功效物质的测定及主成分分析

目的考察不同加工方法对何首乌中多元功效物质的影响及其变化规律,以优化及建立何首乌适宜的产地加工方法及其条件。方法采用胶束电动毛细管色谱二极管阵列检测法(MEKC-DAD)测定12种不同加工方法的何首乌药材中二苯乙烯苷、游离型蒽醌、结合型蒽醌及儿茶素;将多元功效物质分析结果标准化处理,进行主成分分析(PCA),对不同加工方法进行综合评价。结果不同加工方法的何首乌中多元功效物质的量变化呈现一定规律性,二苯乙烯苷的量及结合蒽醌的总量在厚片晒干中最高;游离蒽醌的总量在厚片70℃烘干中最高;儿茶素的量在薄片40℃烘干中较高;何首乌药材厚片晒干综合评价指数明显高于其他加工样品。结论加工方法对何首乌化学成分具有一定的影响,可根据目标成分优选何首乌适宜产地加工方法。