刺五加及其复方防治帕金森病研究进展

帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统慢性进展性疾病,发病机制复杂,致残率高,西医临床主要采用左旋多巴与卡比多巴复合使用,但长期用药会引起多种不良反应,患者无法被完全治愈。中医认为肝肾不足是引起帕金森病(parkinson’s disease,PD)的主要病机所在,刺五加作为传统中药,具有补肝肾、坚筋骨、强志意的作用,近年来,越来越多研究发现中药刺五加在帕金森病的治疗方面具有显著的临床价值。刺五加中所含的皂苷类、香豆素类、黄酮类等成分可通过保护多巴胺能神经元、抗氧化应激、保护线粒体、抗炎症反应、抑制神经元免疫、抑制富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)蛋白表达等多通路、多途径来防治帕金森病。该文通过检索国内外相关文献,对刺五加及其复方防治帕金森病的药理作用及作用机制进行归纳梳理,旨在为刺五加治疗帕金森病的进一步开发利用提供参考。

超声法与闪式提取法提取刺五加中刺五加苷B的工艺对比研究

本试验采用正交试验优化超声法和闪式提取法提取刺五加中刺五加苷B的提取工艺,并对两种提取方法的最佳工艺进行对比研究。以刺五加苷B的提取率为评价指标,设计L_(9)(3^(4))超声法和闪式提取法的正交试验,以高效液相色谱法测定刺五加苷B的含量。结果显示:超声法提取率高于闪式提取法,最佳提取工艺为提取溶剂30%乙醇,超声功率200 W,提取时间0.75 h,料液比1:5(g/mL)。本研究可为刺五加在饲料领域的开发和利用提供参考。

超快速液相色谱法同时测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量

目的建立一种同时测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量的超快速液相色谱法。方法采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);H_(2)O(A)-CH3OH(B)为流动相,梯度洗脱(0~1 min,10%B→35%B;1~5 min,35%B→50%B;5~8 min,50%B→60%B);流速:0.4 mL·min^(-1);柱温:30°C;进样量:5μL;平衡时间:5 min;检测波长:215 nm。结果刺五加苷B和刺五加苷E分别在10~400μg·mL^(-1)(r=0.9990)和5~200μg·mL^(-1)(r=0.9991)质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.9%和98.2%;6批样品中刺五加苷B与刺五加苷E的含量范围分别为0.130%~0.145%和0.0708%~0.0776%。结论与《中国药典》方法比较,该方法稳定性和专属性好,分析时间短,可用于刺五加药材的质量控制研究。

超声法与闪式提取法提取刺五加中绿原酸的工艺对比研究

刺五加中绿原酸含量较高,具有潜在利用价值。本研究采用正交试验的方式比较两种方法(超声法和闪式提取法)提取绿原酸的提取效率。采用L_(9)(3^(4))分别设计超声法和闪式提取法的正交试验,建立高效液相色谱法测定刺五加中绿原酸的含量,以绿原酸的提取率作为评价指标。结果显示:超声法提取优于闪式提取法,最佳提取工艺为提取溶剂50%乙醇,提取时间1 h,料液比1∶5(g/mL),超声功率250 W。该研究确定的提取方法和提取工艺可为刺五加在饲料领域的开发和利用提供参考。

HPLC法测定刺五加、五加皮与红毛五加皮中3种成分的含量

目的建立刺五加、五加皮、红毛五加皮中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸的质量分数测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%（体积分数）H3PO4溶液,梯度洗脱;检测波长为270 nm;流速为1.0 m L/min;柱温为30℃。结果刺五加中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸达到基线分离,线性关系良好（r≥0.999 9）,平均加样回收率分别为98.7%、99.7%、101.0%,RSD均小于3.0%（n=6）。刺五加、五加皮、红毛五加皮中原儿茶酸质量分数分别为0.022 5~0.028 7、0.076 3~0.132、0.013 8~0.071 2 mg/g;紫丁香苷质量分数分别为0.445~0.616、0.023 8~0.025 9、0.037 3~0.069 3 mg/g;绿原酸质量分数分别为1.834~2.169、0.659~0.713、0.372~0.709 mg/g。刺五加中紫丁香苷、绿原酸质量分数最高,其中紫丁香苷约为五加皮、红毛五加皮中质量分数的7~25倍,绿原酸约为五加皮、红毛五加皮中质量分数的3~5倍;而原儿茶酸在五加皮中质量分数最高,其次为红毛五加皮、刺五加。结论该方法灵敏、可靠,可用于刺五加、五加皮和红毛五加皮类药材质量控制的参考。

刺五加不同药用部位中槲皮素鼠李糖苷的含量比较

[目的]测定刺五加不同药用部位中槲皮素鼠李糖苷含量,并对结果进行比较,为刺五加合理利用及质量评价提供科学依据。[方法]采用高效液相色谱法测定刺五加的根、茎、叶、花和果中槲皮素鼠李糖苷含量。色谱条件为:大连江申Nucleosil C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为无水甲醇-水(40∶60,V/V),流速为1.1 ml/min,检测波长为370 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。[结果]刺五加各药用部位中槲皮素鼠李糖苷的含量大小顺序为花蕾>叶>果>茎>根。其中,花蕾中槲皮素鼠李糖苷含量最高,为4.43%;其次为叶(0.61%);根中的最低,为0.01%。[结论]该方法操作简便、快速、准确,可用于刺五加不同部位中的槲皮素鼠李糖苷的含量比较。

刺五加HPLC数字化指纹图谱研究

目的:建立刺五加HPLC数字化指纹图谱。方法:采用反相高效液相色谱法,使用Century SIL BDS(20 cm×4.6mm,5μm)柱,以1%醋酸水-1%醋酸乙腈为流动相,线性梯度洗脱,流速1.0 mL/mL,检测波长265 nm,柱温(30.0±0.15)℃,进样量10μL。以定性、定量相似度和色谱指纹图谱指数等数字化指标评价药材质量。结果:以绿原酸峰为参照物峰,确定31个共有指纹峰,建立了刺五加HPLC数字化指纹图谱。应用色谱指纹图谱指数F和相对指数Fr参数对不同产地刺五加HPLC指纹图谱的超信息特征进行了数字化评价。结论:所建立的HPLC指纹图谱具有较好的精密度和重现性,适用于刺五加药材的质量控制。

郑邦本常用对药举隅

郑邦本老师常用黄芪60 g配伍益母草15～30 g治疗肾病综合征、肾炎综合征、慢性肾炎、糖尿病肾病;灵芝30 g配刺五加15 g对脾肾阳虚,体虚乏力,食欲不振,腰膝酸痛,失眠多梦等证尤为有效,常用于疲劳综合征、神经衰弱的治疗;苏子10 g配地龙10 g降气止咳平喘,常用于支气管哮喘、喘息性支气管炎的治疗;木香10 g配伍槟榔10 g行气宽肠,治疗腹胀、肛门坠胀疗效显著;益母草15～30 g配生山楂30 g活血通经,治疗月经量少、痛经、不孕症等;半枝莲30 g与垂盆草30 g清热利湿退黄,退黄与降酶并举,常用于治疗肝功能异常湿热证;血肉有情之品鹿角胶10 g配伍骨碎补15 g补肾强筋骨,用于骨质疏松、骨折术后愈合不佳、脑萎缩等病;穿山甲5～10 g配鹿角片5～10 g治疗乳腺增生、输卵管不通疗效显著;怀牛膝15 g配刘寄奴30 g治疗血瘀阻络引起的关节疼痛,用于风湿性关节炎、膝骨性关节炎、骨关节损伤疾病。上述对药为郑老师经过长期临床验证,效如桴鼓,具有可重复性,如能在辨证基础上正确运用,常能收到良好效果。

反相高效液相色谱法测定恩施不同产地刺五加中紫丁香苷和异嗪皮啶含量

目的考察恩施不同产地刺五加中紫丁香苷和异嗪皮啶的含量,为恩施地区刺五加的开发和利用提供依据。方法采用InertsustainC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(25∶75),流速1.0mL/min,柱温30℃,进样量10μL,检测波长分别为266、344nm。结果紫丁香苷和异嗪皮啶分别在2.5~100μg/mL、5~500μg/mL范围内呈良好的线性关系,精密度、稳定性、重复性试验RSD<2.30%,紫丁香苷、异嗪皮啶的加样回收率分别为100.60%、97.77%,RSD分别为1.82%、2.50%。宣恩县椿木营、利川市南坪镇、建始县官店镇、建始县高坪镇、恩施市红土乡、鹤峰县燕子乡所产的刺五加中紫丁香苷平均含量分别为0.191%、0.225%、0.224%、0.278%、0.289%、0.239%,异嗪皮啶平均含量分别为0.018%、0.016%、0.016%、0.020%、0.009%、0.013%。结论恩施地区所产刺五加中紫丁香苷含量较高,可作为紫丁香苷的重要来源。

解郁颗粒质量标准的研究

目的:提高解郁颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱法对解郁颗粒中的刺五加、丹参、当归、白芍进行定性鉴别。结果:薄层色谱图斑点清晰,阴性对照无干扰。结论:方法简便可行,结果准确可靠,重现性好,可作为本制剂的质量控制方法。

三黄颗粒质量标准的研究

目的:提高三黄颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱法对三黄颗粒中的黄芪、黄芩、黄连进行定性鉴别。结果:薄层色谱图斑点清晰,阴性对照无干扰。结论:方法简便可行,结果准确可靠,重现性好,可作为该制剂的质量控制方法。

HPLC法测定短柄五加根和茎中刺五加苷E含量

[目的]建立测定不同产地短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的HPLC方法。[方法]采用Agilent TC-C_(18)(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸(16∶84)为流动相;流速1 mL/min;检测波长220 nm,进样体积为10μL,柱温30℃。[结果]刺五加苷E在8.0~160.6μg/mL与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996),平均加样回收率为98.62%,RSD为0.50%。[结论]该方法操作简便、稳定可靠,适用于短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的测定,可作为倒卵叶五加药材的质量控制指标。

HPLC法测定不同产地倒卵叶五加中绿原酸的含量

目的:建立短柄五加根、茎中绿原酸的含量测定方法,比较不同产地短柄五加中绿原酸的含量。方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长348 nm;进样体积10μL。结果:绿原酸在5.81~290.25μg/mL范围内呈良好的线性关系,R2=0.9992,短柄五加根、茎中绿原酸平均回收率为98.75%,98.05%。短柄五加根、茎中绿原酸含量分别为陕西宜君县(1.914 mg·g^(-1)、2.322 mg·g^(-1)),甘肃正宁县(2.363 mg·g^(-1)、2.442 mg·g^(-1)),陕西黄龙县(3.769 mg·g^(-1)、2.642 mg·g^(-1)),陕西旬邑县(1.903mg·g^(-1)、2.723mg·g^(-1))。结论:该方法快速、准确,测定结果显示黄龙县短柄五加根中绿原酸含量最高,整体比较根、茎中绿原酸含量无显著差异,基本都在2.5 mg·g^(-1)左右。

刺五加中4个木脂素成分的药代动力学及生物利用度研究

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法测定大鼠血浆中刺五加提取液中7-羟基香豆素、秦皮素、异嗪皮啶、东莨菪内酯4个成分的含量,评价大鼠体内的药代动力学行为和生物利用度。方法:采用Thermo Scientific Hypersil GOLD aQ色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以0.1%甲酸-水(A)和0.1%甲酸-乙腈(B)(82∶18)为流动相,流速0.30 mL·min^(-1),柱温40℃;质谱正离子模式扫描,进样量5μL;选取健康SD大鼠,单次灌胃10 mL·kg^(-1)(相当于原药1 g·kg^(-1)剂量)的刺五加提取液,测定给药后不同时间间隔的待测物质血浆浓度,利用DAS软件,经非房室模型拟合计算药代动力学参数。结果:7-羟基香豆素(r=0.9994)、秦皮素(r=0.9989)、异嗪皮啶(r=0.9993)、东莨菪内酯(r=0.9984)质量浓度在0.05~55μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,精密度RSD均<15%,回收率均在85%~115%。绝对生物利用度均在59%~78%,相对生物利用度均在80%~87%。提取回收率、基质效应和稳定性均满足相关要求。结论:大鼠单次灌胃刺五加提取液后,4个待测物质均被大鼠吸收和消除,方法验证结果符合生物样本分析方法指导原则,可用于评价刺五加提取液在大鼠体内的药代动力学行为和生物利用度。

基于GC-MS代谢组学分析刺五加总苷提取物的降糖作用

目的:采用GC-MS代谢组学分析糖尿病模型小鼠血清代谢物组,并对刺五加总苷提取物的降糖作用进行探讨。方法:建立链脲佐菌素联合四氧嘧啶诱导小鼠糖尿病模型,采用多元分析方法研究小鼠血清代谢物组及变化规律;通过NIST11数据库匹配及对照品指认鉴定差异代谢物;借助代谢组学途径分析(Met PA)数据库分析代谢通路。结果:糖尿病小鼠模型成功复制。刺五加总苷提取物能够降低模型组中棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、酪氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、丝氨酸的浓度;升高丙氨酸,乳酸,柠檬酸,谷氨酰胺,缬氨酸,甘氨酸,(异)亮氨酸和β-羟基丁酸的浓度并使之转归。Met PA富集分析发现6条代谢通路与糖尿病关系密切。结论:刺五加总苷提取物具有降糖作用,其机制可能与调节能量代谢、氨基酸代谢、氨基酸生物合成及有机酸代谢相关。

刺五加根有效组分的抗氧化活性分析

目的:研究刺五加根有效组分在不同质量浓度下的体外抗氧化活性,筛选最佳有效组分,为刺五加根的研究和开发提供参考。方法:采用紫外分光光度法测定各组分中总黄酮和总皂苷含量,检测波长分别为510,550 nm。利用超氧阴离子自由基(O-2·)清除法,羟基自由基(·OH)清除法,1,1-二苯基-2-苦基肼基(DPPH)自由基清除法和亚铁还原能力实验(FRAP)法测定刺五加根不同有效组分的抗氧化活性。结果:不同有效组分的刺五加根在一定质量浓度范围内均有一定的抗氧化活性,且随着质量浓度的增加抗氧化能力越强。在O-2·清除法模型中,质量浓度为20 g·L^(-1)时,30%乙醇洗脱部位清除率(91.61±2.59)%。在·OH清除法模型中,质量浓度为1.0 g·L^(-1)时,30%乙醇洗脱部位清除率(90.29±2.06)%。在DPPH自由基清除法模型中,质量浓度为0.7 g·L^(-1)时,30%乙醇洗脱部位清除率清除率达(84.45±0.14)%。在FRAP法中,质量浓度为1.0 g·L^(-1)时,30%乙醇洗脱部位的FRAP值3 474±36.84。结论:刺五加根各有效组分均有一定的抗氧化活性,30%乙醇洗脱部位的抗氧化能力最强,可开发成天然的植物抗氧化剂。

柱前衍生化RP-HPLC法鉴别及测定9种补气药中的生物胺

目的:建立柱前衍生化RP-HPLC法测定白术、人参、红参、西洋参、党参、炒扁豆、刺五加、绞股蓝、红景天中11个生物胺的方法,并探讨与补气的相关性。方法:药材样品经1 mol·L^(-1)盐酸提取,正丁醇-二氯甲烷(1∶1)萃取富集,以丹磺酰氯为柱前衍生试剂进行衍生化,RP-HPLC法测定。采用C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~7 min,45%A→50%A;7~25 min,50%A→90%A;25~35 min,90%A;35~40 min,90%A→45%A),流速为0.8 mL·min^(-1),检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果:甲胺、尸胺、组胺、亚精胺与精胺的线性范围为0.10~10.00 mg·L-1(r>0.999),色胺、腐胺的线性范围为0.10~50.00 mg·L-1(r>0.999),2-苯乙胺、5-羟色胺、酪胺与多巴胺的线性范围为0.25~10.00 mg·L-1(r>0.999),平均回收率在70.4%~96.3%之间。白术、党参、炒扁豆中均含有甲胺、腐胺、尸胺、亚精胺与精胺,人参、刺五加中均含有腐胺、尸胺、亚精胺与精胺,红参中含有腐胺、亚精胺与精胺,西洋参中含有腐胺、尸胺、组胺、亚精胺与精胺,绞股蓝中含有甲胺、腐胺、尸胺、酪胺、亚精胺与精胺,红景天中含有甲胺、腐胺与亚精胺。结论:在白术、人参、红参、西洋参、党参、炒扁豆、刺五加、绞股蓝、红景天中含有生物胺类成分。亚精胺是这些补气药中的共有成分,考虑到它的生物活性,这可能是中药补气和抗衰老延年益寿作用的关键成分之一。

促进脊髓损伤修复的天然药物筛选

目的:从天然药物中筛选促进大脑皮质神经元轴突增长的药物。方法:采用系统溶剂提取法得到不同部位的人参、刺五加、黄芪提取液。从大鼠胚胎(SD大鼠,妊娠17 d)的大脑皮质分离神经细胞原代培养;应用磷酸化神经丝H(pNF-H)抗体(轴突的标记)和微管相关蛋白2(MAP2a&2b)抗体(树突的标记)进行免疫染色;采用显微摄影技术及图像分析技术,测量神经细胞轴突和树突的长度。结果:人参醇提液1 mg.L-1可促进大脑皮质神经细胞轴突增长(P<0.05);刺五加水提取液1 mg.L-1在大脑皮质神经细胞轴突增长方面有效(P<0.05);从刺五加水提取液中再次分得乙酸乙酯、正丁醇和水部分,其中1 mg.L-1正丁醇部位和水部位显示出促进轴突增长的作用(P<0.05)。结论:人参的醇提取液和刺五加的正丁醇部位及水部位可能具有潜在的促进脊髓损伤修复的作用。

刺五加乙酸乙酯部位对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肠道菌群的影响

目的:观察刺五加乙酸乙酯部位对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠的影响,探讨其通过调控肠道菌群从而治疗动脉粥样硬化的作用机制。方法:32只8周龄雄性;小鼠随机分为模型组,瑞舒伐他汀组(10 mg·kg^(-1))和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组(75,25 mg·kg^(-1)),每组8只。8只C57BL/6小鼠作为空白组。连续给药8周后,取血测定其血脂水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测小鼠血清中相关指标含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉病理形态;收集盲肠内容物采用16S rRNA扩增子测序检测肠道菌群。结果:与空白组比较,模型组小鼠斑块面积显著增加并伴有炎性浸润,升高甘油三酯(TG),总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,增加炎症因子和血管内皮因子诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)含量,降低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;与模型组比较,瑞舒伐他汀组和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组能改善小鼠主动脉斑块沉积,降低TG,TC,LDL-C,炎症因子和iNOS含量,升高HDL-C含量。与空白组比较,模型组厚壁菌门和变形菌门相对丰度升高,拟杆菌门相对丰度降低。Alpha和Beta多样性分析显示,各组样本能够显著分离,模型组肠道菌群物种总数和丰度较低;与模型组相比,刺五加乙酸乙酯部位可提高有益菌的相对丰度,降低致病菌的相对丰度。结论:刺五加乙酸乙酯部位主要为黄酮类成分,能够通过调控肠道菌群来治疗动脉粥样硬化,改善高脂饮食喂养ApoE;小鼠主动脉病理变化,作用机制可能与其能够降低炎症因子水平、提高抗氧化能力、修复肠道菌群结构紊乱现象有关。

刺五加叶的药理作用研究进展

刺五加为临床常用药材,含有皂苷、黄酮、多糖、酚酸等丰富的化学成分,并具有保护心脑血管、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降糖等广泛的药理作用。临床常用部位为根及根茎部分,但由于资源的不可再生性,对可再生性刺五加叶的研究具有重要的意义。在查阅文献的基础上,本文对近年来国内外有关于刺五加叶的药理作用、作用机制及药效物质基础进行了详细的总结概括,发现叶的药理作用研究主要集中在皂苷类,对于其他化学成分研究报道较少;并且刺五加叶能否代替刺五加根及根茎应用于临床,质量标准如何建立,这些问题局限了刺五加叶资源的应用。为了更加全面、科学的开发及利用刺五加叶资源,还有待于进一步的研究。