核膜孔亚复合物Nup98/Rae1对小鼠卵母细胞体外减数分裂成熟的影响

【目的】探究核膜孔蛋白98(Nup98)和核糖核酸输出因子1(Rae1)对小鼠卵母细胞体外减数分裂成熟的影响。【方法】选择4周龄SPF级雌性昆明小鼠,分离小鼠卵母细胞并进行体外成熟培养,利用实时荧光定量PCR检测小鼠卵母细胞中Nup 98和Rae 1基因表达量;利用免疫荧光法检测Nup98和Rae1共定位情况;利用电转siRNA干扰技术敲低小鼠卵母细胞中Nup 98和Rae 1基因,通过实时荧光定量PCR检测干扰效率,并观察小鼠卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体排出(first polar body extruction,PBE)情况;利用免疫荧光法检测敲低Nup 98和Rae 1基因后小鼠卵母细胞纺锤体组装和染色体排列情况;利用染色体爬片技术检测染色体非整倍体率。【结果】Nup 98和Rae 1基因在小鼠卵母细胞中均有表达。在小鼠卵母细胞生发泡(germinal vesicle,GV)时期,Nup98和Rae1共定位于核膜边缘;在减数分裂过程中,Nup98和Rae1聚集于染色体动粒上。siRNA干扰试验结果显示,与对照组相比,单独敲低Nup 98和Rae 1基因后,对另一基因表达无显著影响(P<0.05);双敲Nup 98和Rae 1基因后,对卵母细胞减数分裂恢复率无显著影响(P>0.05),小鼠卵母细胞发育9.5 h时的PBE率极显著升高(P<0.01),染色体分离比率和非整倍体率极显著或显著增加(P<0.01;P<0.05)。【结论】Nup 98和Rae 1基因在小鼠卵母细胞减数分裂中参与染色体分离,影响非整倍体的发生,从而影响受精胚胎的发育潜力。

构建稳定表达小鼠RAE1ε的B16F10细胞株

目的 通过转染及流式细胞术筛选获得稳定表达小鼠RAE1ε分子的B16F10细胞株。方法 将本研究团队前期构建的含有小鼠RAE1ε基因的真核表达载体通过脂质体法转染B16F10细胞,经流式细胞仪(flow cytometry,FCM)筛选后,建立稳定高表达的B16F10细胞株,将该细胞株与NK细胞共培养后,检测IFN-γ的分泌情况。结果 建立了稳定表达RAE1ε基因的B16F10细胞株,该细胞株上的RAE1ε具有刺激NK细胞高分泌IFN-γ的功能。结论 获得了稳定表达RAE1ε分子的B16F10细胞株,为后续研究奠定了物质基础。

氧化应激对小鼠NKG2D配体表达的影响

目的分析氧化应激时小鼠免疫器官和免疫组织的NKG2D配体MULT1和Rae1表达的变化,研究氧化应激对免疫系统的影响。方法给小鼠吸入适量的臭氧,建立动物氧化应激模型;利用real-time PCR和免疫组织化学方法检测小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和小肠MULT1和Rae1的表达。用流式细胞仪检测胸腺、脾脏的淋巴细胞和小肠上皮间淋巴细胞表面的MULT1和Rae1的表达。结果氧化应激组小鼠胸腺中MULT1表达降低而Rae1表达升高;脾脏的Rae1表达略有提高,MULT1的表达变化不明显;淋巴结中MULT1的表达变化不明显,Rae1表达降低;小肠的MULT1和Rae1表达均明显上调,多集中于小肠绒毛的上皮层。结论 MULT1和Rae1的表达在体内受到严格的调控。应激分子MULT1和Rae1可以作为检测体内应激状态的参考指标。