板栗疫病菌RasGAP基因的功能研究

Ras超家族蛋白的生化功能是催化GTP的水解,为生命体提供能量。RasGAP是Ras蛋白激活子,可提高Ras蛋白对GTP的水解能力。本研究利用同源双交换的方法成功构建了板栗疫病菌RasGAP基因的缺失突变株ΔRasGAP。与野生型菌株EP155及敲除出发菌株Δcpku80相比,ΔRasGAP突变体的菌丝形态、漆酶分泌、致病力和对低毒病毒复制的支持均无明显变化。但ΔRasGAP的生长速度加快,色素分泌延迟,分生孢子产量也显著下降。mRNA定量分析表明,RasGAP基因的缺失导致产孢相关基因的转录模式发生明显改变,提示RasGAP是板栗疫病菌分生孢子形成的一个重要调控因子。本研究为揭示板栗疫病菌产孢机制提供了新的知识。

G3BP在肿瘤细胞中的研究进展

G3BP是1996年在法国Rhone PoulencRorer实验室于由Parker F等从生长状态的中国仓鼠肺成纤维细胞中首次克隆。它是一种位于细胞质中RasGAP SH3结构域特异性结合蛋白,参与Ras下游信号通路。有研究发现,RAS GAP的SH3结构域对于信号转导途径发挥作用是必不可少的,而且还能以RAS非依赖方式调节Rho介导的细胞骨架重建以及细胞凋亡。

Ras GAP作用下ras P21水解GTP的计算机模拟分析

利用PDB(brookhavenproteindatabank)文库提供的晶体结构数据 ,从大分子的计算机三维模拟分析入手 ,分析了rasP2 1在RasGAP(GTPase activatingproteinofRAS)作用下水解GTP的具体机制。对rasP2 1核苷酸结合口袋的微环境和rasP2 1在GTP水解过程中的结构变化进行了讨论。在分析rasP2 1空间三维结构的基础上 ,分析了催化水解过程中RasGAP的变化。讨论了对于RasGAP和rasP2 1的结合定位以及对水解过程中rasP2 1的Switch1的构象变化起重要作用的Lys94 9手指结构 ,并给出了rasP2 1在RasGAP催化下水解GTP的一个模型 。

G3BP：一个潜在的肿瘤治疗靶点

G3BP(RasGAP SH3domain binding protein)是一种RasGAP SH3结构域特异性结合蛋白,参与Ras下游信号通路,属于RNA结合蛋白家族。G3BP具有核酸内切酶、DNA解旋酶活性,能够诱导应急颗粒的形成,参与多种细胞生长、分化、凋亡和RNA代谢的信号通路。已经发现G3BP在多种肿瘤组织和细胞中高表达,并且与侵袭转移相关。由于G3BP与肿瘤细胞的多种生物学特性有关,因此G3BP有望成为一个肿瘤治疗的新靶点。

超声微泡介导G3BP1转染对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响

目的探究超声微泡介导RasGAP SH3结构域结合蛋白1(G3BP1)转染对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响。方法超声靶向微泡破坏(ultrasound-targeted microbubble desturction,UTMD)技术介导的沉默G3BP1(si-G3BP1)处理HepG2细胞,通过逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot分析G3BP1在HepG2细胞中的表达水平;通过流式细胞术、甲基噻唑蓝(MTT)、EdU染色、集落形成实验、伤口愈合实验、Transwell实验及Western blot分析HepG2细胞增殖和迁移。结果HepG2细胞中沉默G3BP1后,其mRNA和蛋白水平显著降低[(1.01±0.03)vs(0.27±0.03)、(1.02±0.01)vs(0.33±0.04)];UTMD介导的si-G3BP1可明显降低HepG2细胞阳性细胞增殖率[(31.49±3.09)vs(12.51±1.02)]、增殖活力[(1.20±0.13)vs(0.46±0.31)]、EdU阳性细胞率[(99.23±1.01)vs(36.75±4.03)]、集落形成率[(96.45±1.21)vs(32.67±2.62)]、划痕愈合率[(97.58±1.04)vs(42.33±2.56)]、迁移率[(94.28±2.33)vs(39.36±2.51)]及Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、波形蛋白(Vimentin)蛋白水平,升高E-钙粘蛋白(E-cadherin)蛋白水平。结论UTMD介导的si-G3BP1可抑制人肝癌HepG2细胞增殖和迁移。