针刀调控线粒体途径软骨细胞凋亡防治大鼠膝骨关节炎

背景:针刀治疗膝骨关节炎的疗效确切,但其作用机制并不十分明确。目的:基于破骨细胞相关受体-肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体-骨保护素(OSCAR-TRAIL-OPG)途径分析针刀对膝骨关节炎大鼠膝关节软骨细胞凋亡的影响。方法:采用随机数字表法将27只SD大鼠分为正常组(9只)、模型组(9只)、针刀组(9只),正常组大鼠常规饲养,不进行任何处理;模型组、针刀组采用膝关节内注射木瓜蛋白酶建立左后肢膝骨关节炎模型,造模成功后给予针刀组大鼠针刀干预,1次/周,共3次。干预结束后进行相关检测。结果与结论:①与正常组相比,模型组大鼠Lequesne MG行为学评分升高(P<0.01);与模型组相比,针刀组大鼠Lequesne MG行为学评分降低(P<0.01)。②苏木精-伊红染色显示与正常组相比,模型组大鼠膝关节软骨表面磨损且不平整,软骨细胞肿胀、破裂且数量减少,细胞排列杂乱;针刀组大鼠膝关节软骨表面较为平整,软骨细胞数量较多且排列较规整,结构基本清晰。③免疫组化染色显示与正常组相比,模型组大鼠膝关节软骨组织中OSCAR、TRAIL阳性表达增加(P<0.01),OPG阳性表达减少(P<0.01);与模型组相比,针刀组大鼠膝关节软骨组织中OSCAR、TRAIL阳性表达减少(P<0.01),OPG阳性表达增加(P<0.01)。④TUNEL染色显示与正常组相比,模型组软骨细胞凋亡数量增加(P<0.01);与模型组相比,针刀组软骨细胞凋亡数量减少(P<0.01)。⑤RT-qPCR与Western blot检测显示与正常组相比,模型组大鼠关节软骨组织中OSCAR、TRAIL、Bax表达升高(P<0.01),OPG、Bcl-2表达降低(P<0.01);与模型组相比,针刀组大鼠关节软骨组织中OSCAR、TRAIL、Bax表达降低(P<0.01),OPG、Bcl-2表达升高(P<0.01)。⑥针刀干预可减轻膝骨关节炎大鼠关节软骨组织损伤,该作用可能与OSCAR-TRAIL-OPG通路阻断线粒体途径凋亡信号释放有关。

OPG过表达的ADSC对大鼠牙槽后槽骨缺损的修复作用

目的:探究骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)过表达的脂肪间充质干细胞(Adipose-derived stem cell,ADSC)对大鼠牙槽后槽骨缺损修复的影响。方法:选择SD雄性大鼠38只,其中6只用于获得ADSC及ADSCOPG过表达转染,鉴定转染情况并观察不同ADSC的形态、成骨分化、成脂分化及增殖能力;其中8只作为对照组,另外24只建立牙槽后槽骨缺损大鼠模型,随机分为模型组、正常ADSC组和OPG过表达的ADSC组。6周后,Micro-CT扫描观察骨缺损愈合情况;苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察骨缺损组织病理改变;免疫组化分析组织中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)的表达;Westernblot分析组织中OPG/核因子-κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)/核因子-κB受体活化因子(Receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)通路蛋白表达。结果:携带空载体与OPG过表达慢病毒的转染效率分别为75.23%和79.08%;两种ADSC均为长梭形;OPG过表达ADSC中的OPG蛋白表达水平、增殖能力、成骨能力明显高于正常ADSC,成脂能力明显低于正常ADSC(P<0.05);与对照组相比,模型组的牙槽后槽骨缺损体积、RANKL、RANK蛋白表达水平明显升高,Lane-Sandhu组织学评分、ALP、OCN阳性表达率、OPG蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,正常ADSC组获得与上述相反的结果;OPG过表达的ADSC组上述指标的变化幅度较正常ADSC组更显著。结论:OPG过表达的ADSC能够促进大鼠牙槽后槽骨缺损的修复。

芹菜素调节OPG/RANKL/RANK信号通路对创伤性骨折大鼠骨折愈合的影响

目的 探讨芹菜素对骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)信号通路的调控作用及对创伤性骨折大鼠骨折愈合的影响。方法 采用闭合式股骨干骨折术构建创伤性骨折大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,芹菜素低、中、高剂量组和阳性对照组,每组10只,另取10只健康大鼠作为对照组。各组给予相应干预30 d。采用计算机断层扫描测定大鼠骨小梁密度和厚度,番红O-固绿染色观察大鼠软骨组织病理学变化,酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测大鼠股骨组织OPG、RANKL、RANK mRNA和蛋白水平。结果 对照组大鼠软骨组织正常,结构完整;与对照组比较,模型组大鼠软骨组织出现严重损伤,骨小梁密度和厚度、血清BGP、ALP及股骨组织OPG mRNA和蛋白水平降低(P<0.05),血清iNOS、TNF-α、IL-6及股骨组织RANKL、RANK mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,芹菜素低、中、高剂量组大鼠软骨组织病理损伤改善,骨小梁密度和厚度、血清BGP、ALP及股骨组织OPG mRNA和蛋白水平依次升高(P<0.05),血清iNOS、TNF-α、IL-6及股骨组织RANKL、RANK mRNA和蛋白水平依次降低(P<0.05);芹菜素高剂量组与阳性对照组各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 芹菜素可以减轻创伤性骨折大鼠炎症反应,促进骨折愈合,其机制可能与上调OPG表达,抑制RANKL/RANK信号通路有关。

骨髓间充质干细胞移植可提高骨质疏松大鼠骨代谢水平

背景:研究证实骨髓间充质干细胞具有增加骨保护素水平、促进骨代谢的作用。目的:探讨骨髓间充质干细胞对骨质疏松大鼠骨代谢的影响。方法:实验所用健康SD大鼠42只,随机分为假手术组、骨质疏松组、干细胞移植组,每组14只,后2组采用去卵巢法制备大鼠骨质疏松症模型,造模成功后干细胞移植组经尾静脉移植骨髓间充质干细胞,移植28 d后采用ELISA法检测各组大鼠血清骨保护素、碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素、胰岛素样生长因子1水平;Western blot检测各组大鼠骨组织中FoxO1的表达;AG-IX生物力学万能试验机检测股骨最大载荷和断开裂载荷;苏木精-伊红染色观察大鼠骨形态学改变。结果与结论:①骨质疏松组骨保护素、碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子1水平低于假手术组(P<0.05),抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素水平高于假手术组(P<0.05);干细胞移植组骨保护素、碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子1水平高于骨质疏松组(P<0.05),抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素的表达水平低于骨质疏松组(P<0.05);②骨质疏松组最大载荷、断裂载荷值均低于假手术组(P<0.05);干细胞移植组最大载荷、断裂载荷值高于骨质疏松组(P<0.05);③干细胞移植组骨小梁明显增粗,排列较为有序,局部间隙较均匀,较骨质疏松组明显改善;④骨质疏松组大鼠骨髓组织中FoxO1蛋白表达水平低于假手术组(P<0.05);干细胞移植组大鼠骨髓组织中FoxO1蛋白表达水平高于骨质疏松组(P<0.05);⑤结果表明,骨髓间充质干细胞移植可提高骨质疏松大鼠骨代谢水平,其作用机制与促进骨保护素、碱性磷酸酶、FoxO1的表达有关。

替勃龙上调卵巢切除大鼠腰椎护骨素mRNA的表达

目的:建立绝经后骨质疏松(postmenopausalosteoporosis,PMOP)的大鼠模型,研究替勃龙对卵巢切除大鼠腰椎组织中护骨素(OPG)基因mRNA表达水平的影响,探讨其预防和治疗PMOP的作用机制。方法:6月龄未交配健康雌性SD大鼠40只,随机分为SHAM组,OVX组,OVX+戊酸雌二醇(E2)组和OVX+替勃龙(tibolone,TIB)组。灌胃13周后处死动物,第四腰椎行骨组织形态计量指标测定,第二腰椎采用RT-PCR方法,对OPGmRNA表达水平进行检测。结果:OVX组大鼠较SHAM组TBV%显著下降;OSV%明显升高(P<0·05);E2和TIB均可使OVX大鼠的TBV%明显升高,OSV%明显下降;OPGmRNA表达水平在OVX大鼠组织中下调,与SHAM组相比有显著性差异(P<0.05),E2和TIB均可上调OVX大鼠骨组织OPGmRNA表达水平(P<0.05)。结论:E2和TIB均通过抑制骨转换预防和治疗PMOP;PMOP的发生与OPG有关,TIB和E2一样,其抗骨吸收效应很可能是通过OPG介导的。

复方黄连制剂对动脉钙化的防治作用

目的:研究复方黄连制剂(黄连、黄芩、黄柏、栀子和甘草)对华法令和维生素D3诱发大鼠血管中膜钙化的干预效应。方法:SD大鼠40只,随机分成对照组、钙化组、复方黄连制剂预防组、复方黄连制剂治疗组。钙化组与药物干预组均给予华法令和维生素D3诱导大鼠血管钙化模型,复方黄连制剂预防组在制作模型前3天给予复方黄连制剂,治疗组则在模型制作完成后给予复方黄连制剂。对照组给予生理盐水。4周后,比较各组Von Kossa染色及血管组织中钙含量,以及血管壁骨保护素(OPG)mRNA和蛋白表达。结果:32只大鼠最终进入结果分析。与对照组比较,钙化组Von Kossa染色显示血管中膜有明显钙沉积,血管组织中钙含量显著增高,分别为(608.32±42.29)μg/g,(1139.47±230.03)μg/g;血管壁OPGmRNA和蛋白表达则明显减少。预防及治疗应用复方黄连制剂,血管中膜钙化明显改善,血管壁钙含量显著降低,分别为(854.77±12.99)μg/g,(875.78±27.23)μg/g;血管壁OPGmRNA和蛋白也显著增加。与钙化组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:预防或治疗使用复方黄连制剂可能通过增加血管壁骨保护素水平,明显改善血管中膜钙化。

运动对去势大鼠成骨细胞OPG_(mRNA)表达的影响

研究目的 :探讨运动对去势雌性大鼠成骨细胞骨保护素 (osteoprotegerin,OPG)表达变化的影响并讨论其在骨代谢变化中的意义。研究方法 :2 4只 4月龄雌性大鼠随机分为 3组 :正常对照组、去势组、去势后运动组。去势后运动组和去势组均行双侧卵巢切除 ,去势后运动组大鼠卵巢切除后在跑台上进行中等强度运动 (18m/ min,1h/ day,5 d/ week) 10周。 10周后处死动物对血钙、血骨钙素、尿肌苷、尿羟脯氨酸进行检测 ;对股骨骨髓基质干细胞进行成骨细胞诱导培养 ,细胞培养至 14天抽提细胞内总 RNA,RT- PCR方法半定量检测各组细胞 OPG基因 m RNA表达量。主要结果和结论 :去势组大鼠血钙、尿羟脯氨酸 /肌苷均高于对照组 ,去势后运动组与对照组比较 ,上述指标无统计学差异。血骨钙素在 3组之间无统计学差异。去势组大鼠 OPG基因m RNA表达显著低于对照组 ,去势后运动组与对照组相比差异无显著性。雌激素缺乏导致骨吸收增强 ,运动可以抑制去势大鼠的骨吸收增强。雌激素缺乏后骨髓微环境中 OPG基因 m RNA表达降低 ,运动抑制去卵巢大鼠的骨吸收亢进可能与促进骨髓微环境中 OPG基因表达有关。

异普黄酮抗卵巢切除大鼠的骨质疏松与上调腰椎护骨素mRNA的表达

目的制造绝经后骨质疏松(postamenopausal osteoporosis,PMOP)的大鼠动物模型,研究异普黄酮(Ipriflavone,Ip)对卵巢切除大鼠腰椎护骨素(OPG)基因mRNA表达水平的影响,探讨其预防和治疗PMOP的作用机制。方法6月龄未交配健康雌性Sprague-Dawley大鼠40只,随机分为假手术组(Sham),卵巢切除组(OVX),OVX+戊酸雌二醇组(E2)和OVX+Ip组(Ip)。灌胃13周后处死动物,第四腰椎行骨组织形态计量指标测定,第二腰椎采用RT-PCR方法,对OPGmRNA表达水平进行检测。结果OVX组大鼠较假手术组骨小梁体积百分比(TBV%)显著下降;类骨质体积百分比(OSV%)明显升高(P<0.05);E2和Ip均可使OVX大鼠的TBV%明显升高,OSV%明显下降;OPGmRNA表达水平在OVX大鼠骨组织中下调,与假手术组相比有显著性差异(P<0.05),E2和IP均可上调OVX大鼠骨组织OPGmRNA表达水平(P<0.05)。结论实验成功制造了大鼠PMOP模型;E2和Ip均通过抑制骨转换发挥预防和治疗PMOP的作用;PMOP的发生与OPG有关,Ip和E2一样,其预防和治疗骨吸收效应很可能是通过OPG介导的。

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用

目的:从鲫鱼卵中提取唾液酸糖蛋白,研究其对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用,并探究其作用机理。方法:采用切除大鼠双侧卵巢的方法建立骨质疏松症大鼠模型,灌胃鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(400 mg/(kg·d))90 d后,分别检测大鼠尿液骨吸收指标(脱氧吡啶啉、钙、磷)、血清骨吸收指标(抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K)、血清骨生成指标(骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型前胶原羧基端前肽)以及血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)含量。结果:鲫鱼卵唾液酸糖蛋白能显著降低骨质疏松症大鼠尿液脱氧吡啶啉(P<0.01)、钙(P<0.01)、磷(P<0.01)含量和血清抗酒石酸酸性磷酸酶(P<0.01)、组织蛋白酶K(P<0.01)活性,防止大鼠骨吸收;显著降低血清骨源性碱性磷酸酶(P<0.01)活性和骨钙素(P<0.01)、Ⅰ型前胶原羧基端前肽(P<0.01)含量,抑制大鼠高骨转换速率;显著上调OPG(P<0.01)含量,下调RANKL(P<0.01)含量,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞增殖分化,降低骨吸收。结论:鲫鱼卵唾液酸糖蛋白具有改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用,其作用机理可能与下调RANKL/OPG比值有关。

破骨细胞在大鼠正畸牙移动性根吸收修复早期中的改变

目的初步研究大鼠正畸牙移动性根吸收修复早期中破骨细胞和骨保护因子（osteoprotegerin，OPG）的变化和规律，探讨破骨细胞在正畸导致的炎性牙根吸收修复中的作用。方法建立大鼠正畸牙移动性根吸收修复早期模型，免疫组化检测OPG的表达，TRAP染色观察破骨细胞的变化。结果实验第1天，OPG表达量下降，第3天以后逐渐恢复至生理水平。实验第1天起，TRAP染色阳性细胞逐渐减少，实验第7、10、14天，TRAP染色阳性数量已逐渐恢复至生理水平。结论施力终止后，大鼠牙根即停止吸收，并于1—3d后开始牙根修复，OPG的量与此过程密切相关。

雷公藤多苷对rmMIF诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL/OPG表达的影响

目的观察雷公藤多苷(tripterygium glycoside,TG)对重组鼠巨噬细胞移动抑制因子(recombinantmouse macrophage migration inhibitory factor,rmMIF)诱导大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖及其细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)、骨保护素(osteo-protegerin,OPG)表达的干预作用。方法采用大鼠FLS细胞株RSC-364,常规方法复苏、培养、传代,实验用3～5代FLS。分为4组:空白对照组加入200μl DMEM培养液,另3组分别加入200μl含rmMIF(200 ng/ml)(MIF组)、rm-MIF(200 ng/ml)+TG(20μg/ml)(MIF+TG组)、rmMIF(200ng/ml)+MTX(0.5μg/ml)(MIF+MTX组)的DMEM培养液。置37℃、5%CO2孵箱培养48 h。MTT法检测FLS的增殖活性;免疫组化法检测滑膜细胞OPG/RANKL的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测FLS上清液OPG、RANKL表达。结果 MIF组增殖活性高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组增殖活性低于空白对照组和MIF组(P<0.01)。MIF+TG组和MIF+MTX组细胞OPG标记指数均高于空白对照组和MIF组,MIF+TG组OPG标记指数高于MIF+MTX组(P<0.01,P<0.05)。MIF组细胞RANKL标记指数高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组RANKL标记指数均低于MIF组(P<0.05,P<0.01)。MIF组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均高于空白对照组,MIF+MTX组上清液RANKL浓度低于空白对照组(P<0.05,P<0.01);MIF+TG组和MIF+MTX组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均低于MIF组(P<0.01)。结论 rmMIF可促进体外培养大鼠FLS增殖,上调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG值;TG抑制rmMIF诱导的大鼠FLS增殖、降低rmMIF诱导大鼠FLS分泌RANKL、下调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG比值,可能是其治疗类风湿关节炎的骨免疫学机制之一。

糖基化终产物对大鼠血管平滑肌细胞骨保护素mRNA表达的影响

目的:研究糖基化终产物(AGEs)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法:体外培养VSMCs,在含10 mmol.L-1β-甘油磷酸(β-GP)的培养液中加入不同浓度(0、50、100、200、400 mg.L-1)的AGE-牛血清白蛋白(BSA)与VSMCs孵育不同时间(0、12、24、36、48、72 h)。采用RT-PCR检测OPG的mRNA表达水平。结果:AGE-BSA呈时间和剂量依赖性地增加VSMCsOPG mRNA的表达;200 mg.L-1的AGE-BSA与VSMCs孵育24 h,OPG mRNA表达水平达到高峰。结论:AGE-BSA能够促进大鼠VSMCsOPG mRNA的表达。

香豆雌酚对新生大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:观察香豆雌酚对大鼠成骨细胞(OBs)增殖分化的影响,初步探讨香豆雌酚对OBs的作用机制。方法:用不同浓度香豆雌酚干预OBs,根据不同时间分别用酶消化法测碱性磷酸酶活性和羟脯氨酸含量、放免法测骨钙素含量及半定量RT-PCR法检测OBs内OPG/RANKL基因的表达。结果:香豆雌酚呈浓度和时间依赖性促进大鼠OBs增殖及碱性磷酸酶表达;干预12 h,各浓度组羟脯氨酸含量呈浓度依赖性增高,其中10-8mo.lL-1作用最大(P=0.022);培养12 h,OBs表达骨钙素呈浓度依赖性,24 h达高峰,其中10-8mol.L-1有显著性差异(P=0.012),48 h有所下降;不同浓度、时间组香豆雌酚均能促使OBs增加表达OPG mRNA,同时有抑制RANKL mRNA表达的作用,其在24 h 10-8mol.L-1浓度作用强度最大(P=0.038),10-5mol.L-1则呈现抑制作用。结论:香豆雌酚能促进OBs的增殖分化,其作用呈浓度和时间依赖性,且至少部分有OPG/RANKL途径的参与。

大鼠牙龈组织表达护骨因子和护骨因子配体

目的 观察成年大鼠牙龈组织是否表达护骨因子 (Osteoprotegerin ,OPG )和护骨因子配体(OsteoprotegerinLigand ,OPGL) ,为进一步探讨二者在牙龈组织中表达的生理及病理意义奠定基础。 方法 提取成年大鼠牙龈组织总RNA ,应用特异引物通过逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)扩增目的片段 ,并将其插入pGEM -T载体 ,测序鉴定。结果 测序表明扩增出的二个目的片段DNA序列与文献报道一致 ,即为护骨因子和护骨因子配体。护骨因子在大鼠牙龈组织表达水平较高 ,而护骨因子配体表达水平较低。结论 大鼠牙龈组织表达护骨因子和护骨因子配体 。

伊贝沙坦对糖尿病大鼠骨质疏松影响的实验研究

目的探讨伊贝沙坦对糖尿病大鼠骨质疏松的干预作用及其机制。方法雄性SD大鼠按体重随机分为正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)、伊贝沙坦治疗组(I组)。糖尿病大鼠模型经单剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制成。所有大鼠均给以普通饲料喂养,I组大鼠每天以伊贝沙坦15mg·kg-1·d-1灌胃,C组和D组大鼠每天予等量生理盐水灌胃,第12周末,测体重及血糖,处死大鼠后取骨,应用显微镜观察骨组织显微结构和进行骨组织形态密度计量学分析,用双能X线骨密度测量仪(DEXA)测定大鼠股骨骨密度(BMD),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组骨组织OPG mRNA及RANKL mRNA的表达。结果12周末,D组和I组大鼠骨组织光镜下均出现骨质疏松表现,I组骨质疏松程度比D组轻。骨组织定量分析显示,MTPT在D组及I组均显著低于C组(P<0.01),MTPS在D组及I组均显著高于C组(P<0.01)。I组与D组大鼠骨组织相比,MTPT显著增加及MTPS显著降低(P<0.01)。骨密度的测定结果发现,与C组大鼠比较,D组和I组大鼠骨组织BMD值显著降低(P<0.01);而I组大鼠骨组织BMD值又较D组显著增加(P<0.01)。骨组织RT-PCR结果显示,与C组相比,D组和I组大鼠骨组织中OPG mRNA表达水平明显降低(P<0.01),RANKL mRNA表达水平明显升高(P<0.01);I组大鼠骨组织中OPG mRNA的表达则明显高于D组(P<0.01),而RANKL mRNA在I组和D组间差异不显著。结论伊贝沙坦可使糖尿病大鼠骨组织降低的OPG mRNA表达水平得以部分恢复,上调OPG/RANKL比值,这可能与伊贝沙坦的改善糖尿病大鼠骨质疏松的效应有关。

雌激素对去卵巢大鼠松质骨中骨保护素mRNA表达的影响

目的 :通过去卵巢大鼠予雌激素后 ,腰椎内OPGmRNA的表达进一步探讨雌激素防治骨质疏松的分子机制。方法 :雌性 3月龄SD大鼠 3 6只 ,随机均分为卵巢切除 +雌激素 (倍美力 )预防组 (EP) ,骨质疏松组 (卵巢切除OVX)及正常对照组 (SHAM ) 3组。术后 12周处死大鼠 ,取第 3腰椎椎体 ,异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,嵌套式反转录聚合酶链反应 (NRT PCR)扩增待检测各组OPGmRNA的表达。同时取第 4腰椎椎体 ,行骨组织形态计量学检测。结果 12例腰椎骨组织中 ,EP组 10例OPGmRNA呈阳性表达 (阳性率 83 .3 % ) ,OVX组 2例呈阳性表达 (阳性率 16.7% ) ,而SHAM组 12例均呈阳性表达。统计学处理 :EP组与OVX组有高度显著性差异 (P <0 .0 1) ,EP组与SHAM组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。骨组织形态计量学检测 ,OVX组骨体积、骨小梁数目均比SHAM组显著减少 ,而骨小梁间隔显著增大。与OVX组比较 ,EP组骨体积、骨小梁厚度增加 ,骨小梁间隔稍有减小 ,无统计学意义。EP对骨小梁数目无明显影响。结论 :雌激素通过增强松质骨中OPGmRNA的表达 ,抑制破骨细胞性骨吸收 ,从而对去卵巢大鼠的骨质疏松有明显的预防作用。

辛伐他汀对去卵巢大鼠骨痂骨保护素表达的影响

目的:研究去卵巢及辛伐他汀(simvastatin,SVS)对大鼠骨痂骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:2月龄雌性SD大鼠采用去卵巢(ovariectomy,OVX)方法模拟人绝经后骨质疏松症,造模成功后进一步建立胫骨骨折髓内钉内固定模型。大鼠分为3组:假手术组(sham+vehicle)、空白组(OVX+vehicle)及实验组(OVX+SVS)。OVX+SVS组于骨折端皮下注射辛伐他汀(10 mg.kg-1.d-1×5 d),sham+vehicle及OVX+ve-hicle组仅注射无辛伐他汀的空白溶剂。骨折后1、2、4周取骨痂标本,切片免疫组化染色,分析骨痂中的增殖细胞核抗原(PCNA)、OPG表达情况。结果:结果显示OVX+vehicle组骨折后1、2、4周PCNA阳性率较sham+vehicle组分别下降17.3%、32.1%和26.1%(P<0.01);OVX+SVS组骨折后1、2、4周PCNA阳性率较OVX+vehicle组分别增加60.1%、67.7%和67.7%(P<0.01);半定量结果显示OVX+vehicle组OPG表达水平最低,sham+vehicle组最高,而OVX+SVS组的OPG表达水平介于2组之间,OVX+SVS组与OVX+vehicle组间差异显著(P<0.01)。结论:本实验显示去势可明显减少骨痂OPG的表达,而辛伐他汀可刺激骨痂分泌OPG,提示他汀类药物具有间接抑制破骨细胞的作用。

骨保护素在雌性去势大鼠不同时期骨组织的表达

目的观察骨保护素(OPG)在雌性大鼠去势前后骨组织的变化及与相关指标的关系,探讨其在骨质疏松发病机制中的作用。方法SD雌性大鼠随机分为生长期组、成年组、去卵巢(OVX)后1,2,3月组和对照组。测定血清碱性磷酸酶(AKP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP);双能X线吸收法测定骨密度(BMD)。取胫骨进行骨组织计量学测定及免疫组织化学方法结合图像分析进行OPG半定量分析。结果去势大鼠术后1月骨质疏松模型成功。对照组OPG随月龄逐渐增加,去卵巢后表达下降。单位骨小梁面积中OPG与TRAP存在正相关;骨组织总OPG与BMD正相关,与AKP负相关。结论去势引起OPG骨组织表达下降。OPG在骨质疏松发病机制中发挥重要作用。

胰岛素治疗对糖尿病大鼠牙槽骨中OPGmRNA水平的影响

目的:研究胰岛素治疗对糖尿病大鼠牙槽骨中骨保护素(OPG)mRNA水平的影响,探讨血糖水平的变化在牙槽骨改建中的意义。方法:将12只大鼠采用静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,随机分为治疗组和对照组。治疗组给予胰岛素皮下注射,对照组未作干预。8周后处死大鼠,提取其左下磨牙区牙槽骨组织总mRNA,应用RT-PCR检测OPGmRNA表达水平。结果:胰岛素治疗组较对照组血糖明显降低(P<0.05),治疗组的OPGmRNA表达水平高于对照组(P<0.01)。结论:胰岛素治疗在使糖尿病大鼠血糖降低的同时,可使牙槽骨OPGmRNA表达水平升高,提示良好地控制血糖可使糖尿病大鼠的牙槽骨吸收减慢。

锁阳多糖对去卵巢大鼠骨质疏松的改善作用

目的观察锁阳多糖对去卵巢大鼠骨质疏松的作用并探讨其机制。方法雌性SD大鼠分为假手术组、造模组。术后2个月造模组分为模型组、阳性对照组、锁阳多糖治疗组,每组10只。治疗组灌胃给予锁阳多糖(20、40、80 mg/kg),阳性药组灌胃给予尼尔雌醇(1.5 mg/kg),每日1次,连续给药12周。ELISA法检测血清雌二醇(E2)、骨钙素(BGP)、降钙素(CT)及尿液脱氧吡啶啉(DPD)的含量,双能X线骨密度检测仪检测腰椎及股骨的骨矿物密度(BMD),三点弯曲法测定胫骨生物力学,Western blot检测大鼠股骨组织中骨保护素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白的表达。结果摘除卵巢后模型组大鼠血清中E2、CT显著下降(P<0.05,P<0.01),血清BGP及尿液DPD含量则显著升高(P<0.01),中、高剂量锁阳多糖及尼尔雌醇能够显著升高血清E2、CT含量(P<0.05),降低血清BGP及尿液DPD含量(P<0.01);锁阳多糖及尼尔雌醇能够逆转去卵巢大鼠腰椎和股骨BMD的降低(P<0.01),改善胫骨生物学特性中的最大载荷及最大应力降低的趋势(P<0.05,P<0.01),并能增强OPG蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低RANKL蛋白表达(P<0.01),升高OPG/RANKL比值(P<0.01)。结论锁阳多糖有明显抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用,其机制可能与其调节E2,CT、BGP和DPD水平,激活OPG/RANK/RANKL信号系统有关。