益气祛风通络饮对阿霉素大鼠肾脏纤维化的拮抗作用和对肾组织细胞自噬的调节作用

目的观察益气祛风通络饮对肾脏纤维化相关指标纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达的影响。方法健康雄性SD大鼠40只,其中以30只为造模组,采用单次尾静脉注射阿霉素造模,造模成功后随机分为模型组、替米沙坦组及益气祛风通络饮组,每组各10只,分别予生理盐水、替米沙坦混悬液及益气祛风通络饮水煎剂灌胃治疗;以10只为空白组,予生理盐水灌胃。实验结束后于光镜下行肾组织病理学观察,采用免疫组化法检测FN、LN、LC3和Beclin-1的表达及分布。结果 (1)与模型组比较,益气祛风通络饮组大鼠在第4~8周24 h尿蛋白定量均明显下降(P<0.05);与替米沙坦组比较,两组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)肾组织病理:与模型组比较,益气祛风通络饮组及替米沙坦组肾脏组织损伤均有不同程度的减轻。(3)肾组织中FN、LN的表达:与空白组比较,模型组肾组织中FN、LN表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,益气祛风通络饮组肾组织中FN、LN表达水平显著降低(P<0.05);益气祛风通络饮组与替米沙坦组比较,肾组织中FN、LN表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。(4)肾组织中LC3、Beclin-1的表达:与空白组比较,模型组肾组织中LC3、Beclin-1表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,益气祛风通络饮组肾组织中LC3、Beclin-1表达水平显著降低(P<0.05);益气祛风通络饮与替米沙坦组比较,肾组织中LC3、Beclin-1表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气祛风通络饮能够降低阿霉素大鼠蛋白尿,其对肾脏病理具有改善作用,可能是通过下调肾组织中FN、LN的表达水平和拮抗自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的过度表达而实现。

阿霉素肾病大鼠不同病理时期自噬体的形成及自噬相关蛋白的表达及分布情况及其与肾组织损伤、肾脏疾病进展的关系分析

目的探讨阿霉素肾病(AN)大鼠自噬体在不同病理时期的形成和自噬相关蛋白表达、分布及其与大鼠肾脏疾病进展、肾组织损伤程度的相关性。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(于鼠尾静脉注入生理盐水)与实验组(于鼠尾静脉注入阿霉素6. 5 mg/kg),两组各20只。密切监测并比较两组大鼠15 d、30 d、45 d、60 d时血清尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、总胆固醇(TC)、白蛋白(Alb)及24 h尿蛋白定量(24 h UPQ)水平的变化情况,观察两组大鼠足细胞结构和自噬体的形成及肾脏组织病理学变化情况。采用免疫荧光染色法对自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ在两组大鼠肾组织中的分布情况进行检测,并用Western蛋白印迹法对三种蛋白表达水平进行检测。结果实验组第15天时血清Alb明显降低,24 h UPQ显著增高,第30天时TC显著增高,与对照组相比存在显著性差异(P <0. 05);实验组第30天时血清BUN和SCr出现轻度增高,第45天时肾功能损伤加重,且出现进行性加重,与对照组相比存在显著性差异(P <0. 05)。光镜下观察实验组大鼠肾脏组织病理改变可见早期由微小病变肾病逐渐进展为局灶节段性肾小球硬化。透射电镜下观察大鼠早期存在系膜细胞增生,细胞器(如溶酶体等)分布和形态异常改变,足突增宽且出现弥漫性融合的现象,晚期观察可见足突消失和核固缩现象。免疫荧光染色结果可见对照组大鼠肾组织自噬能力较差,但在实验组中,随着肾脏疾病的进展,大鼠自噬能力进一步提高,且保持在较高水平。经Western蛋白印迹法检测结果所示,随着肾脏疾病的进展,实验组大鼠自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达明显提高,且与对照组相比存在显著性差异(P <0. 05)。结论随着AN病情程度的进展,大鼠肾功能损伤加重,且出现进行性加重,同时自噬能力进一步提高,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达明显增高。提示自噬在AN大鼠肾组织损伤和蛋白尿的产生过程中可能起到重要作用,且与AN大鼠肾脏疾病进展程度可能存在密切关系。