耐甲硝唑幽门螺杆菌cagA基因检测与rdxA基因突变研究

目的研究cagA基因、rdxA基因变异与幽门螺杆菌(Hp)甲硝唑耐药的关系。方法收集临床分离Hp 180株,用E-test法检测对甲硝唑的最低抑菌浓度(MIC),PCR扩增cagA、rdxA基因,并对rdxA基因进行测序。结果幽门螺杆菌对甲硝唑的耐药率为43.3%,其中甲硝唑高水平耐药菌54株,占69.2%;rdxA基因突变率为56.7%;cagA阳性菌中高耐药菌所占的比例和rdxA基因的突变率均明显高于cagA阴性菌。结论本地区幽门螺杆菌感染以高毒力菌株为主,rdxA基因突变在cagA基因阳性菌对甲硝唑产生高水平耐药可能起一定作用。

幽门螺杆菌rdxA基因突变与耐药性关系的研究

目的 :探讨幽门螺杆菌 (Hp)临床菌株 rdx A基因变异与甲硝唑耐药性的关系。方法 :从患者胃粘膜活检标本中分离培养 Hp。采用纸片扩散法初筛和二倍平皿稀释法确定 Hp菌株对甲硝唑的耐药性。提取 2 1株 Hp基因组 DNA进行 PCR扩增 ,T- A克隆后测序 ,与文献报道的 Hp 2 6695株及 134株临床分离株 rdx A基因序列进行比较。结果 :76.1% (15 / 2 1)的 Hp菌株对甲硝唑耐药。 PCR可扩增出 886bp的 rdx A基因目的片段。与 Hp 2 6695株rdx A基因序列比较 ,扩增产物核苷酸序列的同源性为 90 .1%～ 95 .1%。甲硝唑耐药菌株 rdx A基因出现碱基插入/缺失及碱基替换而引起的突变。结论 :rdx A基因突变是 Hp对甲硝唑耐药的重要因素。

甲硝唑耐药幽门螺杆菌的rdxA基因突变特征与影响因素

目的探讨甲硝唑耐药幽门螺杆菌(Hp)的rdx A基因突变的分子特征,分析疾病及细菌毒力基因变异对耐药的影响。方法从胃窦粘膜标本分离培养Hp,用琼脂稀释法药敏实验检测Hp对甲硝唑的敏感性;用PCR扩增Hp甲硝唑耐药基因rdx A、毒力基因cag A和vac A,PCR产物直接测序后进行序列比对分析。结果共分离出101株Hp,耐药株占43.6%,胃癌相关Hp菌株甲硝唑耐药率(33.3%)显著低于胃炎相关菌株(55.3%),差异有统计学意义(χ2=4.94,P=0.029);Hp毒力基因分型(cag A+/-、vac A各亚型)在敏感株和耐药株中的分布差异无统计学意义;序列分析表明,95.5%的Hp甲硝唑耐药株由插入/缺失核苷酸序列导致移码突变造成rdx A基因失活,59.1%的插入/缺失突变发生在单核苷酸重复序列位置。结论 rdx A的单核苷酸串联重复序列区域发生插入/缺失是引起基因突变失活,导致Hp甲硝唑耐药的主要机制。

幽门螺杆菌rdxA基因的DNA序列分析

目的研究(Hp)耐药菌株与敏感菌株之间rdxA基因的DNA差异。方法取胃镜活检标本,微需氧环境培养,收集Hp菌株。进行甲硝唑药敏试验,筛选出12株耐药菌株(MTZR菌株)和9株敏感菌株(MTZS菌株)。从MTZR菌株、MTZS菌株和Hp11637中扩增rdxA基因;将PCR产物进行DNA测序,测序结果采用DNA Star和NCBI Blast分析,探讨临床菌株和标准菌株的DNA序列差异。结果临床分离菌株与Hp标准菌株26695比较rdxA基因同源性,MTZR菌株为93.25%±1.93%;MTZS菌株93.79%±1.14%,P>0.05;Hp MTZR菌株的rdxA基因突变数高于MTZS菌株;Hp MTZR菌株与MTZS菌株之间点突变的形式没有显著性差异,也缺乏明确的突变规律和突变热点,MTZR菌株与MTZS菌株之间的突变形式无统计学意义。结论rdxA基因突变(改变)以点突变为主,rdxA基因点突变与Hp耐药有关,但具体的rdxA点突变形式与耐药表型的关系尚有待进一步研究。

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药与rdxA基因分型及cagA基因的关系

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori H.pylori)甲硝唑耐药菌株相关基因的突变与甲硝唑耐药性的关系。方法:将贵阳医学院附属医院胃镜室分离H.pylori采用E-Test法对甲硝唑进行药敏试验后,PCR扩增rdxA、frxA、fdxB和cagA并对该基因进行测序。采用限制性内切酶片段长度多态性分型方法(RFLP)对rdxA基因进行分型。结果:313株H.pylori对甲硝唑耐药率为87.2%。其与NCBI已登录的国际标准菌株H.pylori 26695相应基因序列比对,cagA基因阳性率为100%,cagA基因在某些位点存在共同突变,还存在大量其他位点的随机散在突变,rdxA基因除了存在4个位点共同突变外,还有其他位点的散在突变。rdxA基因可分为两型,Ⅰ型与Ⅱ型的比例为293∶20,Ⅰ型耐药率为86.3%,Ⅱ型耐药率为100%。同时发现fdxB、frxA基因突变呈现出一定的规律性,具有碱基替换、插入和缺失3种类型的突变。结论:我院幽门螺杆菌甲硝唑耐药率较高,rdxA基因以Ⅰ型为主,而rdxA基因Ⅱ型的H.pylori均产生甲硝唑耐药,与H.pylori甲硝唑耐药性密切相关。rdxA基因突变及cagA基因阳性是耐甲硝唑的主要原因。

幽门螺杆菌rdxA和cagA基因突变与甲硝唑耐药的相关性研究

目的:研究幽门螺杆菌(Hp)编码基因(rdxA)和细胞毒素相关基因A(cagA)突变与Hp对甲硝唑耐药的关系。方法:从贵阳某医院60例消化内科患者胃黏膜标本中分离出Hp临床分离株11株,体外微需氧条件下培养,用E试验(E-test)检测各株Hp临床分离株对甲硝唑的最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链式反应(PCR)方法扩增Hp的rdxA和cagA基因并测序,再将耐药株与标准株Hp26695PCR产物进行碱基序列分析。结果:11株Hp临床分离株的MIC均≥256μg·mL-1,rdxA和cagA基因的扩增率均为100%。与标准株Hp26695相应基因序列对比,11株临床分离株的rdxA基因同源性为95%～98%,cagA基因同源性低于94%,rdxA、cagA基因分别有4、10个规律性突变点。结论:贵阳地区Hp对甲硝唑的耐药性可能与rdxA和cagA基因突变有关,其中高耐药性可能与cagA基因有关。

对甲硝唑耐药幽门螺杆菌中rdxA基因的表达

目的 探讨对甲硝唑耐药幽门螺杆菌(Hp)株中rdxA基因表达的差异。方法 随机收集51例快速尿素酶试验阳性患者的胃窦部黏膜,体外微需氧培养。甲硝唑耐药率检测分别用E试验和临界点药敏法。选取对甲硝唑高度耐药菌株(MIC值>256 mg/L),在含16 mr/L甲硝唑及不含甲硝唑培养基中分组培养,半定量RT-PCR法检测rdxA基因的表达,用galE基因作外参照。结果 共分离出Hp临床分离菌47株。E试验法甲硝唑耐药率为34％(16/47),临界点药敏法为32％(15/47),其中15株(包括5株高度耐药菌株)2种方法均耐药。5株高度耐药菌中rdxA基因在甲硝唑存在的情况下表达量减少,而参照galE基因表达均不变。结论rdxA基因的表达减少在Hp对甲硝唑高度耐药形成中起了一定的作用。