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饮食习惯与肥胖患儿性早熟的相关性分析 被引量:2
1
作者 连学刚 高兰平 《临床研究》 2024年第1期190-192,共3页
目的探讨饮食习惯与肥胖患儿性早熟的相关性分析。方法选取苏州市吴中人民医院2019年3月至2022年3月期间收治的72例性早熟肥胖患儿作为观察组,另选取同期体检的健康肥胖儿童71例作为常规组。采用实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qP... 目的探讨饮食习惯与肥胖患儿性早熟的相关性分析。方法选取苏州市吴中人民医院2019年3月至2022年3月期间收治的72例性早熟肥胖患儿作为观察组,另选取同期体检的健康肥胖儿童71例作为常规组。采用实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组外周血miR-125b水平,分析患儿饮食习惯。通过比较两组肥胖儿童的外周血miR-125b、饮食习惯,采用Logistic回归分析法分析外周血miR-125b、饮食习惯与肥胖患儿性早熟的关系。结果观察组外周血miR-125b表达水平高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组饮食没规律、荤多素少、高添加剂食品占比均高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组女性患儿、不良饮食习惯占比高于常规组,且经多因素分析显示外周血miR-125b表达水平、女性、不良饮食习惯是肥胖患儿性早熟的独立危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肥胖患儿性早熟外周血miR-125b表达水平高于健康肥胖儿童,不良饮食习惯高于健康肥胖儿童,外周血miR-125b表达水平偏高、不良饮食习惯偏低均为肥胖患儿性早熟的影响因素。 展开更多
关键词 肥胖儿童 不良饮食习惯 微小核糖核酸-125b 实时-逆转录荧光定量聚合酶链反应
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不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测
2
作者 徐凤霞 孙万里 +3 位作者 张亚文 常爽 王一新 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-17,共7页
为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感... 为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) 排毒规律 反转录PCR(RT-PCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) 间接免疫荧光试验(IFA)
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基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法的建立
3
作者 李浪 古莉冰 +6 位作者 朱丽 何建安 叶颖 张然 李华文 李福缘 顾大勇 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第3期358-364,共7页
目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果... 目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果5种样本检测限分别为血清103 PFU/mL,尿、咽拭子和唾液102 PFU/mL,全血104 PFU/mL,标准曲线的拟合优度的可决系数均在0.98以上,扩增效率均在90%~110%;寨卡病毒核酸成功扩增,非寨卡病毒核酸均未能扩增;尿、全血和唾液样本的重复性实验中106 PFU/mL和102 PFU/mL两个浓度的6个重复Ct值的变异系数均<5%。该研究建立的直扩RT-PCR技术的寨卡病毒检测方法与常规RT-PCR技术的检测结果一致,8个寨卡病毒样本,均只检测出2个血清样本,其余62个非寨卡病毒样本及12个阴性样本均未得到扩增。结论成功建立基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法,该方法简便快捷且灵敏度高、特异度强。 展开更多
关键词 寨卡病毒 直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术 DNA聚合酶
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Identification and Characterization of Genes Responsible for Drought Tolerance in Rice Mediated by Pseudomonas fluorescens 被引量:3
4
作者 Manjesh SAAKRE Thirthikar Meera BABURAO +4 位作者 Abida Puthenpeedikal SALIM Rose Mary FFANCIES Valasala Poothecty ACHUTHAN George THOMAS Sajeevan Radha SIVARAJAN 《Rice science》 SCIE CSCD 2017年第5期291-298,共8页
Drought is one of the major abiotic stresses which adversely affect crop plants limiting growth and yield potential.Structural and functional characterization of drought stress-induced genes has contributed to a bette... Drought is one of the major abiotic stresses which adversely affect crop plants limiting growth and yield potential.Structural and functional characterization of drought stress-induced genes has contributed to a better understanding of how plants respond and adapt to the drought stress.In the present study,differential display technique was employed to study the gene expression of rice plants at the reproductive stage that were subjected to drought stress by withholding water,Pseudomonas fluorescens strain(Pf1) treated plants subjected for drought stress by withholding water and control(well-watered).Differentially expressed c DNAs of six genes(COX1,PKDP,b ZIP1,AP2-EREBP,Hsp20 and COC1) were identified,cloned and sequenced.Real-time q PCR analysis showed that all the six genes were upregulated in drought-stressed plants treated with Pf1.This revealed that the remarkable influence of Pf1 colonization leads to drought tolerance at the reproductive stage.These results showed that high levels of gene expression in plants lacking adequate water can be remarkably influenced by Pf1 colonization,which might be a key element for induced systemic tolerance by microbes. 展开更多
关键词 RICE drought tolerance PSEUDOMONAS fluorescENS differential display reverse transcription POLYMERASE chain reaction quantitative real-time PCR transcript derived fragment
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樱桃病毒A实时荧光定量PCR检测技术的建立与应用 被引量:1
5
作者 刘欢 刘格 李锐 《湖北农业科学》 2023年第7期163-169,共7页
在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特... 在樱桃病毒A(CVA)mp基因保守区域设计了3对检测引物,经特异性筛选后,获得可用于病毒定量研究的引物。制备质粒标准品,建立标准曲线,同时验证该方法的灵敏度和特异性,并应用于田间果树样品CVA定量检测。最终成功筛选出1对检测效率高、特异性强的引物(CVA-dF2、CVA-dR2),基于SYBR Green I荧光染料建立反转录实时荧光定量PCR检测CVA的方法。该方法重复性好、灵敏度高,无需借助内参基因即可准确检测目的病毒载量,绝对定量标准曲线斜率为-3.5746,决定系数R2为0.9986,扩增效率为0.9044,比常规RT-PCR检测灵敏度高10倍。该方法的建立为CVA定量研究提供了有力工具,可用于果树中CVA批量检测或低丰度病毒样品检测。 展开更多
关键词 樱桃病毒A(CVA) 反转录实时荧光定量PCR 快速检测
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miRNA-647在乳腺癌中的作用研究
6
作者 高宇 金春明 +3 位作者 邓梦 丁鑫哲 张航 徐春艳 《中国医药科学》 2023年第9期42-45,共4页
目的探讨miRNA-647(miR-647)在乳腺癌(BC)发展中的作用。通过对BC组织和BC细胞两方面验证miR-647在BC中表达情况和作用研究。方法运用实时荧光定量聚合酶反应(qRT-PCR)对miR-647在BC组织及其细胞系中的表达水平进行测定分析。然后为进... 目的探讨miRNA-647(miR-647)在乳腺癌(BC)发展中的作用。通过对BC组织和BC细胞两方面验证miR-647在BC中表达情况和作用研究。方法运用实时荧光定量聚合酶反应(qRT-PCR)对miR-647在BC组织及其细胞系中的表达水平进行测定分析。然后为进一步研究miR-647对BC细胞生物学作用,通过细胞计数试剂盒-8实验(CCK-8)、细胞划痕实验对细胞增殖和迁移能力进行分析,同时采用流式细胞术对过表达的miR-647影响细胞增殖和凋亡程度进行测定。结果BC组织中miR-647表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-647在BC细胞系中表达水平显著低于正常细胞系,并且在MCF-7中表达最少,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-647过表达显著抑制了BC细胞增殖能力、迁移能力,并且促进凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-647在乳腺癌中异常表达并且抑制BC细胞的恶性特征,在BC进程中发挥作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 miR-647 实时荧光定量聚合酶反应 凋亡
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实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义 被引量:8
7
作者 张冬雷 施健 +5 位作者 崔之础 王惠民 鞠少卿 李立人 倪红兵 苏建友 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期39-43,共5页
目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’... 目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’非编码区(5’UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的套式RT-PCR进行定性分析. 结果:本法检测HCV RNA含量的线性范围为1012-104copies/L,批内和批间重复性测定的v分别为1.68-5.97%和6.40-10.58%.在HCV抗体阳性患者中, 肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(7.75±0.29,7.86±0.32 vs 4.67±0.41,P<0.05), 而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.89, t=8.29,P<0.05). 结论:RFQ-RT-PCR检测HCV RNA含量具有较好的灵敏度和特异性,其含量与丙型肝炎患者的病情变化及严重程度有一定相关性. 展开更多
关键词 HCV抗体 RNA 含量 实时荧光定量 患者 阳性 慢性肝炎 RT—PCR 基因组 体外转录
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肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA转录水平的相关性 被引量:12
8
作者 孙培明 刘雨田 +2 位作者 赵永刚 鲍恩东 王志亮 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期2536-2541,共6页
通过分光光度计、组织病理学和荧光定量反转录PCR检测技术,研究肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA变化的相关性。试验结果显示,热应激过程中肌酸激酶和谷丙转氨酶的活性呈现波动性变化,肌酸激酶的变化更明显;心脏的组织病理学变化主... 通过分光光度计、组织病理学和荧光定量反转录PCR检测技术,研究肉鸡心脏热应激损伤和热休克蛋白mRNA变化的相关性。试验结果显示,热应激过程中肌酸激酶和谷丙转氨酶的活性呈现波动性变化,肌酸激酶的变化更明显;心脏的组织病理学变化主要表现为心肌纤维变性和坏死;热应激过程中HSC70mRNA也呈现波动性变化,而HSP70mRNA水平呈现上升趋势。结果提示,HSC70mRNA与肌酸激酶活性变化呈现一定负相关,HSC70有可能作为心脏热应激损伤的标志物。 展开更多
关键词 肉鸡 热休克蛋白 荧光定量反转录PCR 心脏 热应激
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‘琯溪蜜柚’荧光定量PCR内参基因的筛选 被引量:15
9
作者 王梨嬛 潘永娟 +2 位作者 杨莉 蔡盛华 黄新忠 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-54,共7页
【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin ... 【目的】为了克隆‘琯溪蜜柚’的管家基因,并筛选合适的管家基因作为内参,【方法】以‘琯溪蜜柚’盛花期后5个不同时期的果实汁胞,以及根﹑茎﹑叶为材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析actin1﹑β-tubulin﹑18S rRNA﹑EF1-α和Ubiquitin 5个管家基因在不同材料中的表达情况,并结合geNorm、NormFinder﹑comparative Delta-CT和BestKeeper 4种评估方法进行稳定性分析。【结果】结果表明,actin1和β-tubulin是‘琯溪蜜柚’果实发育进程中较为稳定的内参基因,而EF1-α和β-tubulin则是研究不同组织特定靶基因表达中稳定的内参基因。【结论】筛选出了‘琯溪蜜柚’最佳的内参基因β-tubulin,为今后目的基因的表达分析奠定了基础。 展开更多
关键词 '琯溪蜜柚’ 荧光定量PCR 内参基因
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碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵和外膜孔蛋白表达水平的研究 被引量:12
10
作者 李红玲 廖康 +2 位作者 陈亚岗 俞云松 李兰娟 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2008年第6期414-418,共5页
目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株,琼脂稀释法测定该菌加入外... 目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株,琼脂稀释法测定该菌加入外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙(CCCP)前后对亚胺培南和美罗培南的MIC;RT-PCR检测外排泵MexAB-OprM和孔蛋白OprD2的表达水平;十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western-blot)检测外膜孔蛋白OprD2。结果收集到的655株铜绿假单胞菌菌株对亚胺培南和美罗培南敏感率分别为52.5%和59.2%,加入CCCP前后其对亚胺培南和美罗培南的敏感率无明显变化;52.0%(51/98)美罗培南耐药株MexAB-OprM显著高表达(P<0.05),43.7%(59/135)亚胺培南耐药株OprD2显著低表达(P<0.05),14.8%(20/135)亚胺培南耐药株OprD2表达缺失;SDS-PAGE和Western-blot显示与标准菌株PAO1相比,OprD2表达水平减低菌株ZZ20显影减低,表达缺失菌株BJ1不显影。结论MexAB-OprM表达升高和OprD2表达降低甚至缺失是我国铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南耐药的重要机制。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外排泵 外膜孔蛋白 羟基氰氯苯腙 实时荧光定量反转录聚合酶链反应
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“荧光定量PCR溶解曲线法”监测人TCRβ链CDR3谱系漂移技术的建立 被引量:9
11
作者 马锐 罗荣 +1 位作者 孙万邦 姚新生 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期446-451,共6页
目的建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以2... 目的建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果正常人外周血T细胞TCRβ链26个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"(melting curve spectratyping)呈现溶点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布;9例大肠癌患者的外周血TCRβ链CDR3谱系的26个家族CDR3表达频率不一致,有的患者部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论"荧光定量PCR溶解曲线分析TCR CDR3谱系漂移技术",方法稳定简便,能较好的监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。 展开更多
关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 荧光定量PCR 溶解曲线
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SALL4在肝癌中的表达及其对预后的影响 被引量:5
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作者 王亚婷 何彩霞 +3 位作者 卢振辉 王琦 杨少奇 李洋 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期113-117,共5页
目的 检测人类婆罗双树样基因4(SALL4)在肝癌中的表达情况,探讨SALL4表达与原发性肝细胞癌(HCC)患者预后的相关性。方法 应用免疫组织化学法检测60例石蜡HCC标本及其中32例癌旁组织标本SALL4蛋白的表达,分析其与HCC患者临床病理学... 目的 检测人类婆罗双树样基因4(SALL4)在肝癌中的表达情况,探讨SALL4表达与原发性肝细胞癌(HCC)患者预后的相关性。方法 应用免疫组织化学法检测60例石蜡HCC标本及其中32例癌旁组织标本SALL4蛋白的表达,分析其与HCC患者临床病理学资料及预后的关系;采用荧光定量RT-PCR、Western blot法,分别检测23例新鲜HCC及癌旁肝组织中SALL4mRNA和蛋白的相对含量。结果 HCC组织中SALL4蛋白的表达率(81.67%,49/60)显著高于癌旁组织(6.25%,2/32),差异有统计学意义(χ~2=48.047,P〈0.01);SALL4蛋白在HCC中的表达与甲胎蛋白水平有关(P〈0.05);SALL4高表达和低表达组患者的平均生存时间分别为(26.20±2.37、34.05±1.26)个月,SALL4高表达组患者的1、3年生存率(75.9%、55.2%)显著低于SALL4低表达组1、3年生存率(95.0%、85.0%,χ~2=5.044,P〈0.05)。肝癌及癌旁组织的SALL4mRNA的相对量分别为14.80±8.62、0.17±0.13,两组比较差异有统计学意义(t=8.14,P〈0.01)。Western blot检测结果显示,SALL4蛋白在HCC中的相对量为0.354±0.103。癌旁组织中几乎不表达。结论 SALL4表达与肝癌患者预后密切相关,可作为肝癌患者判断预后的预测指标。 展开更多
关键词 肝癌 SALL4基因 免疫组织化学 WESTERN BLOT 实时荧光定量PCR
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实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中广泛型线粒体肌酸激酶基因的表达 被引量:4
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作者 钱琤 于嘉屏 +3 位作者 王爱华 顾鹏飞 邓安梅 仲人前 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第2期6-8,共3页
目的建立检测人广泛型线粒体肌酸激酶(ubiquitous mitochondrial creatine kinase,uMtCk)mRNA荧光定量的方法,并检测了结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织中uMtCk基因表达的水平。方法基于TaqMan荧光探针技术,以GAPDH作为内参,建... 目的建立检测人广泛型线粒体肌酸激酶(ubiquitous mitochondrial creatine kinase,uMtCk)mRNA荧光定量的方法,并检测了结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织中uMtCk基因表达的水平。方法基于TaqMan荧光探针技术,以GAPDH作为内参,建立实时荧光定量RT-PCR方法,并检测了30名结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织uMtCk mRNA的表达。结果30倒结直肠肿瘤患者肿瘤组织中有uMtCk mRNA的表达,范围为7.4×10^5-5.3×10^8拷见/μg RNA,均值为(9.4±5.7)×10^6拷贝/μg RNA;30例癌旁组织uMtCk表达为4.5×10^3-6.9×10^5拷贝/μg RNA,均值为(8.6±3.4)×10^4拷贝/μg RNA。结论成功地建立了人uMtCk基因表达含量的荧光定量检测方法,检测结果可用绝对拷贝数表示,定量准确可靠。且结直肠腺癌病人肿瘤组织uMtCk mRNA的含量是升高的,提示uMtCk mRNA含量的检测有助于结直肠腺癌病人临床诊断。 展开更多
关键词 广泛型线粒体肌酸激酶 荧光定量反转录 聚合酶链反应 结直肠腺癌
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实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测结肠癌中Syndecan-1 mRNA和HPA-1 mRNA的表达及临床意义 被引量:3
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作者 王贺 司君利 +3 位作者 张修振 亓玉琴 钮自宇 周长宏 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期310-315,共6页
背景与目的:侵袭转移是导致结肠癌死亡率增加的主要原因,如何阻断肿瘤的侵袭转移成为目前研究的热点。本研究旨在检测Syndecan-1基因和HPA-1基因在结肠癌组织中的表达水平,探讨二者与结肠癌侵袭转移及预后的关系。方法:用实时荧光定量... 背景与目的:侵袭转移是导致结肠癌死亡率增加的主要原因,如何阻断肿瘤的侵袭转移成为目前研究的热点。本研究旨在检测Syndecan-1基因和HPA-1基因在结肠癌组织中的表达水平,探讨二者与结肠癌侵袭转移及预后的关系。方法:用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测49例结肠癌、49例配对的癌旁组织(距癌2cm)和49例配对远离结肠癌的手术切缘正常组织(距癌5cm以上)的Syndecan-1和HPA-1基因的表达水平,分析二者与结肠癌临床病理特征的关系。结果:结肠癌中HPA-1mRNA的表达水平(40.56±11.75)显著高于癌旁组织(18.28±11.33)和正常组织(10.80±10.20)(P均<0.001),癌旁组织明显高于正常组织(P<0.05);正常结肠组织中Syndecan-1mRNA表达水平(61.21±12.96)显著高于癌旁组织(14.35±11.06)和结肠癌组织(10.12±8.58)(P均<0.001),癌旁组织明显高于结肠癌组织(P<0.05)。Syndecan-1mRNA的表达减弱和HPA-1的表达增强与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(P均<0.05)。Spearman等级相关分析证明了Syndecan-1mRNA和HPA-1的表达呈明显负相关(r=-0.405,P<0.05)。结论:Syndecan-1mRNA在结肠癌组织中呈低表达,HPA-1mRNA在结肠癌组织中呈高表达,且Syndecan-1mRNA的表达减弱与HPA-1的表达增强可促进结肠癌的侵袭转移。联合检测Syndecan-1mRNA及HPA-1mRNA对于指导结肠癌临床治疗及判断预后有重要价值。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 肿瘤侵袭转移 预后 SYNDECAN-1 HPA-1 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应
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产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究 被引量:12
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作者 李小燕 吴爱武 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2008年第6期423-428,共6页
目的研究产AmpC酶的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法2003—2007年从临床标本中分离到铜绿假单胞菌220株,采用三维试验筛选产β内酰胺酶(包括AmpC酶)的铜绿假单胞菌,应用多重PCR检测产AmpC酶的铜绿假单胞菌质粒携带的AmpC耐... 目的研究产AmpC酶的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法2003—2007年从临床标本中分离到铜绿假单胞菌220株,采用三维试验筛选产β内酰胺酶(包括AmpC酶)的铜绿假单胞菌,应用多重PCR检测产AmpC酶的铜绿假单胞菌质粒携带的AmpC耐药基因,应用荧光定量RT-PCR的方法检测染色体AmpC酶基因和oprD2基因的表达情况。结果共检出40株产β内酰胺酶的菌株,其中产AmpC酶、ESBLs、金属酶(MBL)和未知酶型铜绿假单胞菌的构成比分别是62.5%(25/40)、20%(8/40)、7.5%(3/40)和10%(4/40)。25株产AmpC酶菌株均有不同程度AmpC酶基因表达量升高,其中,仅1株细菌携带DHA质粒型AmpC酶基因,12株菌oprD2基因表达量减低,这些菌株均对亚胺培南耐药,13株菌oprD2基因表达量正常,其中仅5株菌对亚胺培南耐药;7株菌(占产AmpC酶菌株的28%,不产金属酶)的酶粗提物能微弱水解IPM,这7株菌AmpC酶基因的表达量均有明显升高,其中5株菌同时伴有oprD2基因表达量降低。结论铜绿假单胞菌产生的AmpC酶可微弱水解亚胺培南,且其水解亚胺培南可能与AmpC酶产生量有一定关系;产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因可能是细菌AmpC酶表达量增加和oprD2表达量减低两者共同作用的结果。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 AMPC酶 OprD2蛋白 荧光定量反转录聚合酶链反应
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采用荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCR alpha链CDR3谱系漂移技术的初步探讨 被引量:6
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作者 汤贤英 孙永苹 +4 位作者 马锐 朱红倩 田祖国 孙万邦 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期727-730,共4页
目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上... 目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRalpha胚系链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果:正常人外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的溶解曲线谱型图(melting curve spectratyping)呈现熔点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布,2例淋巴瘤型白血病患者外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论:荧光定量PCR溶解曲线分析TCRalpha链CDR3谱系漂移技术方法稳定简便,能较好地监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。 展开更多
关键词 T淋巴细胞受体 互补决定区3 荧光定量PCR 溶解曲线
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FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性 被引量:4
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作者 刘爱群 葛莲英 +2 位作者 罗小玲 罗元 林思彤 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第23期2422-2426,共5页
目的:探讨FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达水平及其临床意义以及与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染的相关性.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者及相应正常胃黏膜组织中的FAF1mRNA进行定量检... 目的:探讨FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达水平及其临床意义以及与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染的相关性.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者及相应正常胃黏膜组织中的FAF1mRNA进行定量检测,以β-actin为内参照.H.pylori采用HE染色、甲苯胺蓝染色和Warthin-Starry银染法进行检测.结果:胃癌组织中FAF1 mRNA的表达明显低于相应正常胃黏膜组织(0.27±0.12vs0.48±0.08,P<0.05).高、中分化的胃癌组织FAF1mRNA表达值明显高于低、未分化的胃癌组织(0.39±0.06vs0.19±0.06,t=9.966,P<0.01).有远处转移的胃癌组织FAF1 mRNA表达值低于无远处转移的胃癌组织(0.25±0.11vs0.34±0.14,t=-2.753,P<0.01),而FAF1 mRNA表达水平在浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤大小及临床分期不同的胃癌组织中无显著性差异.FAF1 mRNA表达量在H.pylori阳性胃癌组织中明显低于H.pylori阴性(0.18±0.06vs0.29±0.12,P<0.05).FAF1表达量在H.pylori阳性正常胃黏膜组织中与H.pylori阴性比较无显著差异(0.49±0.08vs0.47±0.11,t=0.6515,P>0.05).结论:FAF1基因的表达异常可能与胃癌的发生发展有关,H.pylori感染可能通过下调FAF1基因的表达而发挥致癌作用. 展开更多
关键词 胃癌 Fas相关因子1mRNA 适时荧光定量逆转录聚合酶链反应 幽门螺杆菌
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全脑缺血-再灌注鼠STAT3基因的表达 被引量:3
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作者 方舒东 姜虹 朱也森 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期52-54,共3页
目的研究鼠海马组织中信号转导与转录激活子-3(STAT3)mRNA在短暂性全脑缺血-再灌注过程中的表达变化。方法将健康雄性SD大鼠25只,随机均分为全脑缺血-再灌注4、24、48、72h组和假手术组。以"双侧颈总动脉阻断加全身低血压法"... 目的研究鼠海马组织中信号转导与转录激活子-3(STAT3)mRNA在短暂性全脑缺血-再灌注过程中的表达变化。方法将健康雄性SD大鼠25只,随机均分为全脑缺血-再灌注4、24、48、72h组和假手术组。以"双侧颈总动脉阻断加全身低血压法"建立大鼠短暂性全脑缺血模型,采用实时荧光定量PCR技术观察大鼠缺血性脑损伤海马组织中STAT3 mRNA的变化。结果短暂性全脑缺血后海马组织STAT3 mRNA的表达增强,再灌注24h达高峰。结论短暂性全脑缺血-再灌注后STAT3 mRNA的活化及超量表达可能介导了缺血神经细胞信号传导过程,并参与了脑神经细胞损伤的病理生理过程。 展开更多
关键词 脑缺血-再灌注 信号转导与转录激活子-3 逆转录聚合酶链反应 荧光定量
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持家基因作为相对定量内标物的稳定性比较 被引量:25
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作者 朱芷葳 董常生 《生物技术通讯》 CAS 2006年第5期807-809,共3页
定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,定量检测时常用编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶、β-肌动蛋白、28S和18SrRNA等的持家基因作为内部参照,这些基因被认为在某些类型细胞中的表达是恒定的。近年来,很多研究者发现上述持家... 定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,定量检测时常用编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶、β-肌动蛋白、28S和18SrRNA等的持家基因作为内部参照,这些基因被认为在某些类型细胞中的表达是恒定的。近年来,很多研究者发现上述持家基因的表达水平并不稳定,利用它们作为内标来定量并不准确。因此,在进行定量实验时应选择适当的2种或2种以上的内参基因,以减少检测标本间的差异。 展开更多
关键词 实时荧光定量反转录PCR 持家基因 定量检测
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糖皮质激素受体在类风湿关节炎外周血单个核细胞中表达水平的研究 被引量:5
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作者 李薇 于孟学 +4 位作者 王国锋 曹金 张红宇 杨玲 刘利成 《北京医学》 CAS 2008年第4期208-211,共4页
目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中糖皮质激素受体(GR)α、βmRNA的表达水平及其与RA发病机制、活动性的关系。方法从44例RA患者(活动期24例、缓解期20例)、20例健康对照人群外周血单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,并逆转录... 目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中糖皮质激素受体(GR)α、βmRNA的表达水平及其与RA发病机制、活动性的关系。方法从44例RA患者(活动期24例、缓解期20例)、20例健康对照人群外周血单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)检测GRα和GRβmRNA的表达水平,并研究其与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)的相关性。结果RA患者GRα和GRβmRNA的表达水平均明显高于健康对照人群(P﹤0.01);活动期RA患者GRβmRNA表达水平(-3.5442±0.8017)明显高于缓解期RA患者(1.2175±1.5969)(P﹤0.01);活动期RA患者GRαmRNA表达水平(4.2333±2.1775)与缓解期RA患者(4.2985±1.6109)比较无显著性差异(P﹥0.05);RA患者GRβ表达水平与CRP呈正相关(P=0.01),与ESR、RF均无关;RA患者GRα表达水平与CRP、ESR、RF均无关。结论GRα和GRβ的表达异常可能参与了RA的发病;GRβ表达水平与CRP呈明显正相关,提示其可能与RA疾病活动性相关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 糖皮质激素受体 逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应
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