改良型富血小板纤维蛋白与β⁃磷酸三钙复合物诱导成骨作用与机制

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(advanced platelet⁃rich fibrin,A⁃PRF)与β⁃磷酸三钙(β⁃tricalcium phosphate,β⁃TCP)构成比例对兔股骨缺损模型骨形成的作用及机制,为临床治疗骨缺损提供新思路。方法24只新西兰大白兔构建骨缺损模型并分为模型组、1∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=1∶1)、2∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1)与4∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=4∶1),每组6只。复合物组在骨缺损处填充复合材料,模型组不充填材料,8周后安乐法处死动物采标本。采用micro⁃CT测定股骨缺损区新生骨的骨密度(bone mineral densi⁃ty,BMD)、骨体积分数(bone volume fraction,BV/TV)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation/spacing,Tb.Sp)。HE染色观察新骨及新生血管形成情况;扫描电镜观察新生骨组织的形态变化;酶联免疫法检测新生股骨组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(phospho⁃p38 mitogen activated pro⁃tein kinase,p⁃p38MAPK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer⁃binding protein homologous pro⁃tein,CHOP)、磷酸化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(phospho⁃cysteine aspartic protease⁃3,p⁃Caspase3)含量;实时定量PCR检测新生骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨形态发生蛋白⁃2(bone morphogenetic protein⁃2,BMP⁃2)、核因子κ⁃B配体受体致活剂(receptor activator of nuclear factor kappa⁃B ligand,RANKL)、p38MAPK的mRNA表达量;免疫组织化学法观察新生骨组织中OPG、BMP⁃2、RANKL、p⁃p38MAPK、p⁃Caspase3蛋白表达情况;荧光Tunel染色观察新生股骨组织中细胞凋亡情况。结果模型组股骨缺损区域骨形成缓慢,成骨质量差。与模型组相比,复合物组动物股骨缺损区域成骨情况良好,BMD、BV.TV、Tb.Th、Tb.N升高,Tb.Sp下降,新生股骨组织中见新生毛细血管形成;p⁃p38MAPK、CHOP、p⁃Caspase3蛋白表达降低,OPG、BMP⁃2的mRNA与蛋白表达升高,RANKL与p38MAPK的mRNA表达降低(P<0.05);各组新生骨组织中的凋亡检测表明2:1复合物组样本中细胞凋亡率最低(P<0.05);A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1的配比成骨效果最佳。结论由A⁃PRF与β⁃TCP组成复合物能促进OPG表达,抑制RANKL表达和p38MAPK磷酸化,减少新生骨组织细胞凋亡,促进成骨分化。

周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞RANKL/OPG的变化

目的:对周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞(h PDLSCs)RANKL、OPG及RANKL/OPG比值的变化进行初步探讨。方法:用3 000μstrain,0.5 Hz的周期性张、压应力对h PDLSCs分别加载0(对照组)、3、6、12、24 h。Western blotting检测RANKL和OPG的变化,计算RANKL/OPG比值的变化。结果:周期性张应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到最低点(0.902±0.196),显著低于对照组水平(P=0.000),此后开始上升,但直到24 h,仍低于对照组水平。周期性压应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到最高点(1.058±0.147),显著高于对照组水平(P=0.000),6 h(0.996±0.103)回落到对照组水平(P=0.152),此后直到24 h(0.8449±0.041),显著低于对照组水平(P=0.000)。结论:周期性张、压应力都可以上调h PDLSCs的RANKL和OPG表达。在周期性张应力加载的最初24 h,h PDLSCs不能促进破骨细胞分化;而周期性压应力加载的最初6 h,h PDLSCs可以促进破骨细胞分化,此后转而抑制破骨细胞分化。

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的探讨酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(casein kinase 2 interacting protein-1,CKIP-1)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力的影响。方法收集正常人牙周膜组织,通过组织块培养法分离培养hPDLSCs,将P4代细胞分为空白对照组、阴性对照组(感染对照载体)、CKIP-1 siRNA慢病毒组(感染CKIP-1 siRNA慢病毒)以及CKIP-1组(感染CKIP-1过表达慢病毒)。对各组细胞进行成骨诱导培养21 d,茜素红染色观察细胞矿化结节形成情况,并用分光光度计法对矿化结节进行定量分析,同时利用qPCR技术检测各组Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、碱性磷酸酶(alka-line phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)等,以及骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)信号通路成骨相关调控因子的转录水平。结果阴性对照组与空白对照组各指标间无统计学差异(P>0.05);与阴性对照组比较,CKIP-1 siRNA慢病毒组出现更多的矿化结节(P<0.05),矿化沉积量明显增多(P<0.05),Runx2、ALP、OCN、RANKL等,以及BMP信号通路的转录水平不同程度升高(P<0.05)。结论CKIP-1下调可促进hP-DLSCs成骨分化能力,这与成骨相关调控因子转录水平有关。

血清白细胞介素-34在银屑病关节炎骨破坏中的作用研究

目的 探讨血清IL-34水平与PsA骨破坏的相关性.方法 以40例PsA患者为实验组,以20例银屑病患者（银屑病组）及20名健康志愿者为健康对照组,检测3组研究对象外周血IL-34及破骨细胞相关细胞因子,包括TNF-α、细胞NF-κB受体活化因子配体（RANKL）和骨保护素（OPG）的水平,分析IL-34与外周血破骨前体细胞（OCP）的数量、疾病活动度及影像学评分间的相关性.所有数据均采用GraphPad Prism 6软件进行分析.采用多因素方差分析进行多组比较,两两比较采用q检验,采用Spearman相关分析评估各指标间的相关性.结果 PsA组患者血清IL-34的水平[（328±476） pg/ml]高于银屑病组[（33±52）pg/ml,q=3.92,P＜0.01]及健康对照组[（32±32） pg/ml,q=3.93,P＜0.01],侵蚀性PsA组高于非侵蚀性PsA组[（449±527） pghrd与（47±24） pg/ml,q=4.04,P＜0.01].PsA组患者外周血TNF-α、RANKL水平及OCP计数[（125±79） pg/ml、（488±475） pg/ml及17.7±4.8（5个视野）]均高于银屑病组[（40±22） pg/rnl、（26±3） pg/ml及5.2±0.8（5个视野）,q=7.32、6.14及2.94,P均＜0.01]及健康对照组[（41±19） pg/ml、（65±8） pg/ml及6.2±1.8（5个视野）,q=6.67、5.62及2.71,P均＜0.01],PsA组的OPG/RANKL比值（0.5±0.4）显著低于银屑病组（4.3±2.7,q=-3.30,P＜0.01]及健康对照组（1.8±0.6,q=-1.72,P＜0.01）,IL-34、TNF-α及RANKL的水平均与OCP呈正相关（r=0.10,P＜0.05;r=0.12,P＜0.05;r=0.13,P＜0.05）.结论 PsA患者尤其是侵蚀性PsA患者外周血中存在较高水平的IL-34,与OCP数量呈正相关,IL-34参与了OCP及破骨细胞的分化,进而促进骨破坏过程.因此,IL-34有望成为治疗PsA的新靶点.