抗虫植物基因工程研究进展

虫害是造成农业减产的主要原因之一。据不完全统计,全世界每年因虫害引起的作物减产达总产量的15％,损失高达数千亿美元。在我国,因虫害水稻减产在lO％以上;小麦减产近20％;

表达鸡新城疫病毒HN蛋白的生物学活性

以重组ＮＤＶ ＨＮ 基因禽痘病毒（ｒＦＰＶ）为研究对象，观察重组病毒在鸡胚成纤维细胞上表达的动态变化，并对表达蛋白生物学活性进行了检测。结果表明：重组病毒感染鸡胚成纤维细胞１２ ｈ 即可检测到表达蛋白，７２ ｈ 左右表达量明显增多；利用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ可检测到６８ ｋＤ和７４ ｋＤ两种分子量的蛋白，与ＮＤＶ ＨＮ蛋白糖基化和非糖基化蛋白形式的分子量一致。表达蛋白具有红细胞吸附活性和神经氨酸酶活性，该活性可被ＮＤＶ ＨＮ单抗所抑制。由此进一步证明重组ＮＤＶ ＨＮ表达蛋白具有与天然ＮＤＶ ＨＮ 蛋白相似的生物学活性，可作为研制ＮＤＶ 生物工程疫苗目的基因。

重组人生长激素治疗大面积烧伤的临床评价

目的探讨重组人生长激素(rhGH)治疗大面积烧伤的有效性和安全性。方法将伤后3d内入院的大面积烧伤患者随机分为治疗组和对照组,每组12例。治疗组从伤后第3天开始每日给予rhGH0.3IU/kg皮下注射,持续14d。对照组则每日给予安慰剂。治疗期间定期检测患者的一般情况、蛋白质代谢变化、肿瘤坏死因子(TNF-α),C反应蛋白(CRP)、血糖及尿钾、钠、氯,并进行组间比较。结果治疗组血清白蛋白、前白蛋白及转铁蛋白逐渐升高;TNF-α和C反应蛋白明显下降;血糖升高;尿钾、钠、氯的排出量减少。结论rhGH能有效促进蛋白质合成,提高机体免疫功能,缩短住院时间,但要正确选择用药时机和剂量。

基于重组蛛丝蛋白的多层级瞬态衍射光学传感元件

针对传统衍射光学元件(DOE)与MEMS加工工艺难以兼容、传感应用方面灵敏度低的问题,提出了一种基于基因重组蛛丝蛋白材料、利用热纳米压印工艺制成的多层级瞬态可溶DOE。重组蛛丝蛋白性能可按需定制,重复性高,具有极佳的生物相容性,高精度、高效率、低成本的纳米压印工艺可实现DOE的快速制备,同时控制其降解速率。纳米压印工艺制备的重组蛛丝蛋白DOE最小特征尺寸可达2μm,衍射图案强度为杂散光强度的12倍。随着元件的降解,DOE的衍射图案效率降低,说明了DOE所携带信息随其可控溶解而溶毁,从而可以实现信息的多层级溶毁及生物传感领域的多层级药物实时释放监测。

胸部创伤合并心功能和心肌细胞损害的早期监测与临床观察

目的:探讨血清N末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)和心脏型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)在胸部创伤所致心肌挫伤的早期监测价值,并观察重组人生长激素(rhGH)的治疗效果。方法:选择82例胸部创伤合并心肌挫伤患者(挫伤组)和50例健康人(对照组)为研究对象,挫伤组采用rhGH治疗。血清NT-proBNP检测采用电化学发光免疫分析(ECLIA)法,血清h-FABP检测采用双抗体夹心酶联免疫(ELISA)一步法。结果:治疗前血清h-FABP阳性率(41.4%)显著高于NT-proBNP(29.8%)及心电图(ECG)(17.7%)(P<0.01)。治疗前,胸部创伤合并心肌挫伤患者血清NT-proBNP和h-FABP水平分别与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);治疗后,两者水平均显著低于治疗前(P<0.01),与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。胸部创伤合并心肌挫伤患者血清NT-proBNP与h-FABP呈显著正相关(r=0.719,P<0.01),相关性良好。胸部创伤合并心肌挫伤的82例患者经rhGH治疗后,血清NT-proBNP和h-FABP水平达正常,ECG也无异常表现,无一例死亡病例。结论:rhGH对胸部创伤合并心肌挫伤具有临床治疗作用,血清NT-proBNP和h-FABP的联合检测可早期诊断胸部创伤合并心功能及心肌细胞损害,也可观察临床疗效。

重组水蛭素与喉癌细胞Hep-2中PAR1、VEGF、MMP-2表达的相关性研究

目的检测喉癌及癌旁组织中蛋白酶活化受体1(PAR-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白-2(MMP-2)的表达,及重组水蛭素(Recombinant hirudin)对喉癌细胞Hep-2中PAR-1、VEGF、MMP-2表达的影响,探讨PAR-1、VEGF、MMP-2在喉癌侵袭及转移中的作用及重组水蛭素的抗肿瘤机制。方法采用免疫组化方法检测喉癌组织及癌旁组织中PAR-1、VEGF、MMP-2的表达;用免疫细胞化学方法检测重组水蛭素共培养和不加入重组水蛭素培养的喉癌细胞中PAR-1、VEGF、MMP-2的表达。结果 PAR-1、VEGF、MMP-2在喉癌组织及有淋巴结转移的癌旁组织中呈高表达,差异有统计学意义;PAR-1、VEGF、MMP-2在重组水蛭素共培养和不加入重组水蛭素培养的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论证实PAR-1、VEGF、MMP-2参与了喉癌的侵袭及转移;重组水蛭素的抗肿瘤及抑制肿瘤转移作用可能与其降低喉癌细胞中PAR-1、VEGF、MMP-2表达有关。

活动性肺结核患者诊断指征与抗体水平观察

目的:调查痰结核菌培养阳性、培养阴性、有空洞和无空洞活动性肺结核患者(TB)血清抗PPD抗体和抗38KDa抗原抗体阳性率和特异度。方法:采用SPA-ABC ELISA检测各组TB和健康人血清PPD抗体和抗38KDa抗体。结果:培阳TB、培阴TB与健康人血清PPD抗体和38KDa蛋白抗体检测阳性率分别为70.6%、36%、3.8%和84.7%、76%、0.96%,38KDa和PPD特异度分别为91%和87.8%;空洞TB、无空洞TB和健康人PPD抗体和38KDa蛋白抗体的阳性率分别为79%、51.2%、4.95%和85.5%、73.2%、1.98%,38KDa抗原和PPD用于空洞结核病血清学诊断的特异度分别为93%和91.9%。结论:38KDa抗原用于血清学诊断对活动性肺结核有很高的阳性率和特异度。

E型肉毒神经毒素重组Hc-C亚单位疫苗免疫原性研究

目的利用大肠杆菌高效表达并纯化E型肉毒神经毒素(BoNT/E)受体结合区Hc的亚结构域EHc C蛋白,并进行免疫原性研究。方法利用PCR技术扩增出EHc C基因,克隆于载体pTIG Trx His tag中得到重组质粒pTIG Trx EHc C,转入表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,超声破碎菌体,收集上清,经镍柱亲和纯化获得重组抗原EHc C蛋白,通过SDS PAGE和Western印迹检测纯化效果,之后免疫BALB/c小鼠,评价其免疫原性。结果通过原核表达纯化获得了纯度>90%的重组抗原EHc C蛋白,该重组抗原作为亚单位疫苗免疫小鼠产生了特异性抗体反应,10μg剂量抗原蛋白3次免疫小鼠即可抵抗104 LD50E型肉毒毒素攻击,血清中和抗体效价可达1.00 U/ml。结论获得的重组EHc C抗原免疫原性良好,免疫小鼠后能抵抗E型肉毒毒素的攻击,产生强烈保护作用,可作为亚单位候选疫苗预防E型肉毒毒素中毒或用于研究肉毒毒素疫苗和抗体的功能表位。