热休克蛋白60及重组热休克蛋白60对U937细胞IL-6分泌量的影响

目的观察重组热休克蛋白60(hsp60)对U937细胞分泌细胞因子IL-6的影响。方法对幽门螺杆菌标准株26695的基因进行定点突变,利用重叠延伸PCR法使1398和1399位点的AG突变为GC,获得重组hsp60基因片段并构建原核表达质粒pEASY-E1-rhsp60,经IPTG诱导在大肠杆菌表达突变型rhsp60,将50、100、200μg/mL的rhsp60(rhsp60组)、hsp60(hsp60组)分别与U937细胞共培养,于12、18、24 h收集上清液,ELISA法检测上清中细胞因子IL-6水平,设PBS对照组。结果 rhsp60组、hsp60组IL-6分泌水平均明显高于对照组(P均<0.05),且同时点同浓度下rhsp60组IL-6分泌水平明显高于hsp60组(P均<0.05),IL-6的分泌随着蛋白刺激浓度的升高而增高。结论 rhsp60与hsp60皆可促进U937细胞分泌IL-6,胃癌来源的rhsp60使IL-6分泌量更多。

沙眼衣原体热休克蛋白60基因的克隆和表达

目的探讨克隆和表达沙眼衣原体热休克蛋白60（hsp60）基因。方法PCR分离扩增hsp60的基因片段，纯化后双酶切，克隆到原核表达载体pET-28a，构建重组表达载体pET-28a—hsp60，PCR、双酶切及测序鉴定。转染大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS—PAGE、Western印迹检测。结果PCR与双酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆hsp60基因，测序结果与基因库公布的一致。SDS—PAGE检测表达产物，在相对分子量60000处有表达条带。Western印迹鉴定是表达目的蛋白。纯化后纯度达90％以上，产量为17．85mg／L。结论构建pET-28a—hsp60重组体并成功表达可溶性hsp60蛋白。

盆腔炎衣原体热休克蛋白60抗体和人类白细胞抗原DQ基因关系

目的探讨衣原体引起的盆腔炎与衣原体热休克蛋白60(CHSP60)抗体和人类白细胞抗原DQ(HLA-DQ)基因的相关性,为盆腔炎发病机制提供依据。方法选择2017年1月-2019年1月海南省妇幼保健院收治的沙眼衣原体感染盆腔炎患者142例作为盆腔炎组,再随机抽取医院健康体检的健康妇女103名作为对照组,检测并比较两组受试者CHSP60抗体表达情况及HLA-DQA、B等位基因分型分布。结果盆腔炎组患者CHSP60抗体阳性率、HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301等位基因阳性率均高于对照组(P<0.05),而其余HLA-DQA、B等位基因分布上两组无统计学差异。在盆腔炎患者中,HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301等位基因阳性患者CHSP60抗体阳性率高于HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301等位基因阴性患者(P<0.05)。结论 HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301可能是衣原体引起盆腔炎发生的易感基因,且盆腔炎患者HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301与CHSP60抗体表达密切相关,提示衣原体引起盆腔炎免疫反应受遗传因素的调控。