精神分裂症患者外周血液中Reelin蛋白的表达

目的探讨Reelin蛋白与精神分裂症的关系。方法将89例精神分裂症患者作为精神分裂症组,89例健康者作为对照组,采用Western blot检测其外周血Reelin蛋白的表达。结果精神分裂症组患者外周血Reelin蛋白表达水平(0.66±0.27)显著低于对照组(1.01±0.23)(P<0.05)。精神分裂症组男、女性患者Reelin蛋白表达水平分别为0.66±0.22、0.66±0.26,二者差异无统计学意义(t=0.181,P>0.05),对照组男、女性受检者Reelin蛋白表达水平分别为1.01±0.25、1.02±0.26,二者差异无统计学意义(t=0.201,P>0.05)。结论 Reelin蛋白表达的降低与精神分裂症有关。

摇晃蛋白(Reelin)的剪切蛋白预测

【目的】探索生物信息学方法在Reelin剪切蛋白查找中的应用,并筛选大脑皮质中可能对Reelin有剪切作用的蛋白。【方法】以ADAMTS-4蛋白为基准,利用生物信息学方法,以功能域查找相似功能蛋白,并结合同源性比对方法从中筛选出剪切Reelin的候选蛋白,并对候选蛋白的理化性质、亚细胞定位、功能域、二级结构和组织定位进行分析。【结果】ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16与ADAMTS-4有相似的理化性质,且均属于分泌蛋白,在大脑皮质中可能有分布。ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10、ADAMTS-16包含ADAMTS-4的功能域,且功能域内的二级结构相似。【结论】筛选到了可能对Reelin有剪切作用的蛋白ADAMTS-2、ADAMTS-3、ADAMTS-10和ADAMTS-16。

Reelin在阿尔茨海默病小鼠发病中的作用

目的探讨阿尔茨海默病(AD)小鼠病理改变、Reelin和Notch1的表达变化及DNA甲基化状态的改变,为深入了解阿尔茨海默病的发病机制提供理论依据。方法以淀粉样蛋白前体(APP)/早老素-1(PS1)双转基因小鼠为AD模型、同窝野生型小鼠为对照组,两组小鼠共计184只,利用高尔基染色、透射电子显微镜、免疫荧光染色、免疫印迹等技术检测AD模型鼠病理改变、Reelin和Notch1的表达变化及DNA甲基化状态的改变。结果AD小鼠在约6个月时开始出现淀粉样斑沉积、神经元纤维出现缠结等病理改变;AD小鼠发病后,星形胶质细胞和小胶质细胞在淀粉样斑周围聚集增多,随病情加重逐渐增加;Reelin在淀粉样斑周围聚积形成斑块,随病情加重逐渐增多;全长Notch1受体和其活性Notch细胞内片段(NICD)在AD鼠脑部表达减少;AD小鼠脑部甲基化状态减弱,淀粉样斑中有DNA片段,但甲基化状态消失,DNA甲基转移酶1(Dnmt1)和Dnmt3a在AD小鼠中表达减少。结论 AD小鼠脑内淀粉样斑沉积,促使胶质细胞聚集、Reelin聚积形成斑块、Notch1受体表达下降及甲基化状态减弱,进一步加剧AD神经功能紊乱。

甲状腺功能减退孕鼠的仔鼠学习记忆能力及海马Reelin蛋白表达

目的:观察甲状腺功能减退(甲减)孕鼠的仔鼠学习记忆能力及海马Reelin蛋白表达。方法:选取交配成功孕鼠随机分为对照组、甲减组、治疗组,各15只;甲减组和治疗组孕鼠于妊娠第6天(GD6)~GD14时给予含有20 mg/L丙基硫氧嘧啶(PTU)的自来水建立妊娠期甲减模型至仔鼠出生;治疗组在GD15时,皮下注射注射左旋甲状腺激素0.02μg/g;对照组孕鼠喂养正常食物和自来水;所有仔鼠出生后正常喂养至第7天(PN7),每组保留仔鼠30只;分别测量所有GD6、GD15孕鼠体质量和仔鼠PN0体质量,GD15时每组取5只孕鼠测定血清总甲状腺素(TT4)和促甲状腺激素(TSH)值;每组选取15只PN7仔鼠进行Morris水迷宫定位航行和空间探索实验测试仔鼠学习记忆能力,每组15只仔鼠采用免疫组化方法检测海马组织Reelin蛋白的表达情况。结果:甲减组、治疗组孕鼠TT4明显低于对照组,TSH明显高于对照组,提示妊娠期甲减造模成功;GD15时甲减组、治疗组孕鼠体质量明显低于对照组(P<0.05),PN0时甲减组、治疗组仔鼠体质量明显低于对照组(P<0.05);仔鼠定位航行实验,同一天甲减组潜伏期明显长于治疗组(P<0.05),甲减组穿越站台次数明显少于治疗组(P<0.05);甲减组PN7仔鼠Reelin蛋白表达明显低于对照组和治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:妊娠期甲减影响子代学习记忆能力,其机制可能与妊娠期甲减可降低仔鼠海马Reelin蛋白表达。

分泌型糖蛋白Reelin对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的探讨分泌型糖蛋白Reelin对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的抑制作用。方法将大鼠RGC-5分为对照组、NMDA组、Reelin类似物组、Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组。对照组细胞用含双抗的氨基酸双抗培养基培养,NMDA组在对照组细胞培养基中添加100μmol·L^(-1) NMDA后进行细胞培养,Reelin类似物组、Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组在NMDA组细胞培养基的基础上利用Lipofectamine 2000将Reelin类似物、阴性对照和抑制物转染RGC-5,共同孵育24 h。用Annexin V FITC/碘化丙啶联合流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内Reelin、磷酸化-Tau蛋白(p-Tau)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)表达情况。结果对照组RGC-5细胞凋亡率为(9.30±0.74)%,NMDA组为(25.40±1.13)%,NMDA组高于对照组,差异有统计学意义(t=6.311,P<0.001)。NMDA组RGC-5内Reelin蛋白表达水平低于对照组,p-Tau、GSK-3β和CDK5蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。Reelin类似物组细胞凋亡率为(9.23±0.24)%,低于Reelin阴性对照组(14.33±1.02)%和Reelin抑制物组(26.81±1.15)%,各组细胞凋亡率差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Reelin类似物组RGC-5内p-Tau、GSK-3β蛋白表达水平均低于Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组,Reelin抑制物组RGC-5内p-Tau、GSK-3β蛋白表达水平均高于Reelin阴性对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);CDK5蛋白表达水平在3组中基本一致,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Reelin对NMDA诱导损伤的RGC具有保护作用,这种作用是通过下调GSK-3β表达抑制Tau蛋白磷酸化,进一步抑制细胞凋亡而实现的。

恐伤孕鼠对其仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1表达的影响

目的:研究恐伤孕鼠对其仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1表达的影响。方法:将受孕后雌鼠用随机分为正常组、模型组、补肾组,每组各10只。运用恐吓为主的复合应激法刺激造模,正常组不予刺激,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠。补肾组灌胃中药左归丸浓缩剂,2m L/100g体质量/d,正常组及模型组则根据雌鼠体质量予以等量0.9%氯化钠溶液灌胃。仔鼠出生当天每窝随机取1-2只仔鼠断头取全脑,后将全脑固定,切取包含皮质的脑片。结果:模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变。与正常组比较,补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1的蛋白表达均下调(P<0.01);与模型组比较,补肾组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1的蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论:恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过调节Reelin信号通路可阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生。

Reelin蛋白的表达量与首发精神分裂患者注意执行功能的相关性

目的:探讨Reelin蛋白的表达量与首发精神分裂患者注意执行功能的相关性。方法:选择2013年12月至2014年12月来我院精神科进行治疗的首发精神分裂患者89例,作为实验组;同时选择同一时间在我院住院部进行社会实践的89例健康志愿者,作为对照组。检测两组样本外周血液中Reelin蛋白的表达水平,同时采用持续操作测验(CPT)和威斯康星卡片分类(WCST)测验来分别测定两组患者的注意功能和执行功能。结果:实验组患者Reelin蛋白的表达水平显著低于对照组(P<0.05),实验组男性患者和女性患者的Reelin蛋白表达水平之间没有差异(P>0.05),实验组中有64例低Reelin蛋白水平患者,25例正常Reelin蛋白水平患者;实验组患者的注意和执行功能评分均低于对照组(P<0.05),低Reelin蛋白水平患者的注意和执行功能得分低于正常Reelin患者(P<0.05);实验组患者外周血液中Reelin蛋白表达水平与CPT正确个数、WCST正确个数、WCST分类完成数呈正相关(r值分别为0.69、0.75、0.81,均P<0.01);而与CPT正确反应时间、CPT错误个数、WCST随机错误个数和WCST连续错误个数呈负相关(r值分别为-0.69、-0.72、-0.74、-0.85,均P<0.01)。结论:Reelin蛋白表达水平在首发精神分裂患者体内显著降低,低Reelin蛋白表达提示首发精神分裂患者注意和执行功能受损严重。

恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达影响

目的观察恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质组织形态学影响及对大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表达影响。方法将受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组、补肾组,每组各10只。运用恐吓为主的复合应激法刺激模型组和补肾组孕鼠,正常组不予刺激。同时补肾组每日以中药左归丸浓缩剂2ml/100g体重灌胃,正常组及模型组则根据雌鼠体重予以等量生理盐水灌胃,造模时间为自分组第1天直至产下仔鼠。雌鼠分娩后,仔鼠出生当天每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑,固定,染色,切片,在光镜和电镜观察其组织结构和超微病理改变。另每窝随机取1~2只仔鼠断头取全脑匀浆做定量PCR,观察各组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达变化。结果模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少;电镜下可见到多数神经细胞出现细胞器结构异常,如线粒体肿胀,高尔基复合体肥大,部分伴有细胞核固缩。补肾组与正常组比较,仔鼠大脑皮质在形态学上无明显改变。补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达均低于正常组(P<0.01),模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达低于补肾组(P<0.01)。结论恐伤孕鼠可以引起仔鼠大脑皮质发育异常,而左归丸通过补肾填精法调节Reelin信号通路从而阻断或降低仔鼠大脑皮质发育障碍损伤的发生。

RELN基因启动子区甲基化及其多态性改变与精神分裂症的相关性研究进展

精神分裂症的发病机制至今尚未明确。研究表明,精神分裂症的发生、发展与大脑神经系统功能异常相关。RELN编码的Reelin可通过分子信号通路调节神经元的正确定位和突触的可塑性参与精神分裂症的发生、发展。本文综述了RELN基因和Reelin蛋白的结构及在神经系统中的作用以及RELN基因与精神分裂症的关系,以期为深入研究精神分裂症的发病机制及临床治疗提供更多思路。