晚期肺癌血清Ape1/Ref-1表达及其对阿帕替尼联合三线化疗疗效的预测价值

目的探讨晚期肺癌血清Ape1/Ref-1的表达及其对阿帕替尼联合三线化疗疗效的预测价值。方法收集70例晚期肺癌患者病例资料。采用随机数字表法进行分组,即对照组和研究组,均35例。对照组采用常规三线化疗治疗。研究组在对照组的基础上再予以阿帕替尼药物治疗。结果晚期肺癌组织Ape1/Ref-1蛋白阳性表达(91.43%)显著高于癌旁组织(χ^(2)=33.600,P=0.000)。化疗前,两组晚期肺癌患者Ape1/Ref-1蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);化疗后,两组Ape1/Ref-1蛋白相对表达量均明显低于化疗前,进一步组间比较,研究组Ape1/Ref-1蛋白相对表达量明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Ape1/Ref-1阴性组生存率(87.50%)显著高于Ape1/Ref-1阳性组(χ^(2)=3.949,P=0.047),研究组累积生存率(91.43%)显著高于对照组(χ^(2)=10.096,P=0.001)。结论Ape1/Ref-1在晚期肺癌组织中呈现高表达,其表达越低,阿帕替尼联合三线化疗疗效越好。

氧化/还原因子ref-1在肺癌组织中的细胞定位表达及与8-OH-dG的关系

目的 氧化 /还原因子 1(ref 1) ,也称为AP核酸内切酶 (APE) ,是氧化还原和DNA碱基切除修复途径中的重要一员。本研究旨在探讨ref 1在肺癌中的表达及其与氧化损伤标志 8 羟基 脱氧鸟苷 (8 OH dG)的关系。方法 用免疫组化法检测15 0例肺癌组织、12 0例癌旁肺组织、4 0例肺良性病变和 4 0例正常肺组织中氧化 /还原因子ref 1基因的蛋白质表达 ;分析有关暴露因素对ref 1表达的影响 ,探讨ref 1基因与 8 OH dG的关系。结果 肺癌和正常肺组织皆有ref 1的表达 ,但ref 1在细胞内的定位有所不同 ,70 .0 % (10 5 / 15 0 )的肺癌组织ref 1从通常的胞核定位移位到胞浆 ,仅 7.5 % (3/ 4 0 )的正常肺组织有ref 1移位胞浆的现象 ,两者差异显著 ,P <0 .0 1。未发现肺癌患者的性别、年龄、吸烟和肿瘤家族史等因素与ref 1细胞定位之间有联系。ref 1移位胞浆与肺组织中 8 OH dG的含量呈显著正相关 ,Spearman相关系数为 0 .70 2 ,P <0 .0 1。结论 ref 1的细胞定位对其氧化 /还原和修复功能有着重要影响 ,可作为监测细胞DNA修复功能的指标。

姜黄素对缺血/再灌注大鼠APE/Ref-1表达及细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对大鼠全脑缺血/再灌注损伤后海马神经元凋亡与DNA修复蛋白APE/Ref-1表达的影响,探讨其对脑缺血损伤后的保护作用。方法将144只雄性SD大鼠随机平均分为假手术组(SO组)、缺血/再灌注组(IR组)和姜黄素干预组(CU组)各48只。建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,CU组于再灌注后即刻经腹腔注射姜黄素。分别于再灌注后2、6、12、24、48、72 h处死大鼠,提取大鼠脑组织。原位末端标记法检测海马CA1区的细胞凋亡情况;免疫组化SABC法检测APE/Ref-1的表达。结果 SO组神经元细胞凋亡较少,IR组凋亡的神经元细胞于再灌注6 h开始增多,48 h细胞凋亡率达到最高。与SO组比较,IR组细胞凋亡率增高(P<0.01)。CU组在再灌注6 h后的各时点神经元细胞凋亡较IR组少(P均<0.01)。SO组APE/Ref-1阳性细胞在各时点较多;IR组于再灌注后2 h APE/Ref-1阳性细胞开始出现明显减少,一直持续至72 h,与SO组比较有统计学差异(P均<0.01);CU组APE/Ref-1阳性细胞率各时点与IR组比较均有统计学差异(P均<0.01)。结论姜黄素发挥脑保护作用的机制可能与减缓DNA修复蛋白APE/Ref-1表达的下降和阻止脑缺血/再灌注损伤区神经元细胞的凋亡有关。

PC12细胞APE/ref-1cDNA的克隆和表达

APE Ref 1是双功能核蛋白 ,它既能在碱基切除修复过程中切除脱嘌呤 脱嘌啶位点 ,又能促进包括AP 1、Myb和NF κB等受氧化还原调节的转录因子对DNA的结合 .从PC12细胞中抽提总RNA ,经逆转录PCR(RT PCR)扩增出APE ref 1cDNA并克隆到pQE3 1表达质粒上的BamHⅠ和PstⅠ位点间 .经测序表明 ,PC12细胞的APE ref 1cDNA以正确的阅读框架重组进入表达质粒 ,表达重组质粒pQE3 1 APE在宿主菌BL2 1中得到稳定表达 .SDS PAGE鉴定表明 ,带 6个组氨酸的融合蛋白分子量为 3 8kD ,并经Ni NTA琼脂糖亲和纯化得到电泳纯融合蛋白 .Western印迹证明重组蛋白为APE ref 1融合蛋白 .

吉西他滨对人胰腺癌Patu-8988细胞株APE/Ref-1的诱导作用

目的:研究人胰腺癌细胞株在吉西他滨化疗时APE/Ref-1基因表达的变化,并试图揭示其在胰腺癌化疗耐药中所起的作用.方法:不同浓度吉西他滨0、10、20、40及60μmol/L作用人胰腺癌Patu-8988细胞株24 h,分别以RT-PCR及Western blot方法测定作用后APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况.结果:吉西他滨作用人胰腺癌Patu-8988细胞株24h后,APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平明显上升,并与吉西他滨的浓度呈正相关(RT-PCR:r=0.645,P=0.012;Western blot:r= 0.598,P=0.020).结论:APE/Ref-1在胰腺癌化疗时表达明显增强,可能与化疗耐药性的产生有关,并提示针对APE/Ref-1的靶向干预可能有助于提高胰腺癌的化疗敏感性.

红景天苷对脑缺血再灌注大鼠脑神经元APE/Ref-1的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤后神经可塑性和DNA修复酶APE/Ref表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组,I/R模型组和红景天苷干预组,采用线栓法制造大鼠大脑局灶缺血(2h)/再灌注模型,于灌注后0.25、1、3、7d4个时间点断头取脑,HE和尼氏染色观察神经元形态学变化,免疫组化方法检测无嘌呤无嘧啶位点/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)的表达。结果与其他两组比较,红景天苷组梗死灶范围明显减小,梗死灶周围皮质神经元损伤明显减轻(P<0.05);APE/Ref-1阳性细胞数表达显著增高(P<0.05)。结论红景天可以易化脑I/R损伤后中枢神经系统神经再生和修复的可塑性,抑制APE/Ref-1降低可能是其在I/R早期发挥神经保护作用的一条重要途径。

APE1/Ref-1、EGR-1在食管鳞癌中的表达及相关性研究

目的本研究旨在明确APE1/Ref-1和EGR-1在食管鳞癌及癌旁组织中的表达情况,并结合临床资料评估其表达与组织分级和临床分期之间的关系,为进一步研究食管鳞癌的发生发展机制提供参考依据,并为食管鳞癌的预防、诊治提供临床指标。方法随机选取2009至2010年接受胸外科手术治疗的86例食管癌标本,术前均未经放化疗等任何抗癌治疗。采用免疫组织化学法(S-P法)测定APE1/Ref-1的蛋白、EGR-1的蛋白表达情况,对其相关性进行分析。结果 APE1/Ref-1在ESCC组织中细胞质和细胞核联合阳性表达率为68.6%明显高于癌旁组织的联合阳性表达率8.1%,差异有统计学意义(P<0.01)。APE1/Ref-1在癌旁组织中的细胞核阳性表达率为91.9%明显高于ESCC组织的24.4%,差异有统计学意义(P<0.01)。EGR-1在ESCC组织的阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.01)。结论在ESCC中,APE1/Ref-1胞核胞质联合表达率随着组织学分级降低和临床分期的升高有增强的趋势,EGR-1的阳性表达率随着组织学分级降低和临床分期的升高有降低的趋势。

视网膜缺血再灌注损伤中Ref-1的表达及bFGF对其的影响

目的研究缺血再灌注损伤视网膜组织中无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/Ref-1,Ref-1)表达的变化及玻璃体腔内注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响。方法建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤动物模型,于再灌注开始即刻玻璃体腔内注射bFGF2μg,利用SABC免疫组织化学法检测不同时段Ref-1蛋白在视网膜组织表达的变化,分析Ref-1蛋白与细胞凋亡的关系以及bFGF对其表达的影响。结果Ref-1蛋白在视网膜组织中的表达随着缺血再灌注时间的延长明显减少。bFGF治疗组Ref-1蛋白表达规律与缺血组相同,但其阳性表达率较同一时段缺血再灌注组有所增加。结论大鼠玻璃腔注射bFGF,可以上调Ref-1的表达,对视网膜缺血再灌注损伤起到修复的作用。

吉西他滨对人肺癌A549细胞株CN-Ⅱ，APE／Ref-1mRNA和蛋白表达的影响

【目的】研究人肺癌A549细胞株在吉西他滨化疗时CN-Ⅱ,APE/Ref-1基因表达的变化,并探讨其在肺癌化疗耐药中所起的作用。【方法】不同浓度吉西他滨0、10、20、40及60μmol/L作用人肺癌A549细胞株24h,分别以RT-PCR及Western blot方法测定用药后CN-Ⅱ和APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况。【结果】吉西他滨作用人肺癌A549细胞株24h后,CN-Ⅱ和APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平均明显上升,并与吉西他滨的浓度呈正相关(CN-ⅡRT-PCR:r=0.687,P=0.009;Western blot:r=0.594,P=0.021;APE/Ref-1RT-PCR:r=0.669,P=0.010;Western blot:r=0.562,P=0.029)。【结论】CN-Ⅱ和APE/Ref-1在肺癌化疗时表达明显增强,可能与化疗耐药性的产生有关,并提示针对CN-Ⅱ和APE/Ref-1的靶向干预可能有助于提高肺癌的化疗敏感性。

肾细胞癌中Ref-1/APE的表达特点及其意义

目的探讨Ref-1/APE蛋白表达与肾细胞癌生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学方法检测58例肾细胞癌和11例正常肾组织中Ref-1/APE的表达。结果所有肾细胞癌和正常肾组织均有Ref-1/APE的表达,但在细胞内的表达定位有所不同,肾细胞癌阳性颗粒表达部位以细胞核为主,并且Ref-1/APE的表达定位与肿瘤分级、分期密切相关,差异有显著性(P<0.01);11例正常肾组织中仅见肾小管上皮细胞表达。结论Ref-1/APE基因可能与肾细胞癌的发生、发展有关。检测Ref-1/APE的表达及移位于细胞质的情况可能为肾细胞癌的恶性程度判定、预后评估及进一步治疗提供依据。

APE1/Ref-1与肿瘤的研究进展

脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1又称氧化还原因子-1,是一种双功能酶,不仅具有核酸内切酶活性,发挥DNA修复功能,而且具有氧化还原功能,调控多种重要转录因子的活性。目前研究发现APE1/Ref-1在人体多种肿瘤中表达且与肿瘤的发生、发展及预后相关。APE1/Ref-1可能成为极具潜力的肿瘤基因治疗的新靶点。本文就APE1/Ref-1的结构、功能及在肿瘤研究方面的进展作了一系列的回顾与总结。

APE/Ref-1基因重组腺病毒的构建表达和鉴定

目的构建表达氧化还原因子-1(APE/Ref-1)基因的复制缺陷型重组腺病毒,为进一步研究APE/Ref-1在耳蜗螺旋神经节氧化损伤病理过程中的作用机制提供实验基础。方法应用RT-PCR技术从大鼠脑组织总RNA克隆出APE/Ref-1基因,将APE/Ref-1基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后,转染293细胞进行包装,并反复感染293细胞进行扩增。对其进行安全性、滴度以及活性等检测。采用Westernblot对APE/Ref-1蛋白表达进行检测和鉴定。结果克隆出大鼠APE/Ref-1基因,经测序证实结果正确;得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA证实含目的基因。结论成功构建了表达APE/Ref-1的复制缺陷型重组腺病毒。为进一步研究APE/Ref-1在耳蜗螺旋神经节的氧化损伤过程中作用机制奠定了实验基础。

Ref-1在阿尔茨海默病大鼠海马CA1区表达的研究

目的:探讨Ref-1在阿尔茨海默病(AD)大鼠发病中的变化及其可能机制。方法:采用Aβ25-35单次侧脑室注射诱导AD大鼠模型,Y迷宫测定大鼠行为学变化,免疫组化法检测建模后4d、7d和14d时痴呆组、对照组大鼠海马CA1区Ref-1的表达。结果:1Aβ注射7d、14d后,痴呆组大鼠达到学习标准的训练次数、错误次数和全天总反应时间较对照组均明显增加(P<0.05)。2痴呆组Aβ注射4d起,海马CA1区Ref-1表达开始增高(P<0.01),随着观察时点的延长,这种表达进一步增高(P<0.01)。结论:大鼠侧脑室注射Aβ7d可成功诱导AD大鼠模型;Ref-1的上调早于大鼠记忆障碍的发生,Ref-1可能参与了AD的发生发展。

APE1/Ref-1线粒体定位机制的研究

APE1/Ref-1是一种重要的多功能蛋白,主要功能是DNA修复和转录因子的氧化还原调控。目前认为,核编码基因的线粒体主动转运主要依靠线粒体外膜和内膜上一系列转运酶复合体,称为外膜转运酶（translocase of outer membrane,TOM）和内膜转运酶（translocase of inner membrane,TIM）。基本过．程为线粒体外膜TOM复合体中的受体亚基，包括TOM20、TOM22和TOM70识别前体蛋白上的线粒体定位信号，而后通过TOM40等亚基形成的共同转运通道（general import pore，G1P）进入线粒体。

APE1/Ref-1基因结构及功能的研究进展

APEl／Ref-1（又称APEXl或Ref-1，本文统称APEl），是大肠杆菌Xth（ExoⅢ）哺乳类同源物、细胞对氧化应激主要反应因子，DNA在各种内源性或外源性物质包括化疗药物引起损伤后，APEl通过DNA碱基切除修复通路中脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶发挥重要的作用。当受损的碱基去除后，APEl主要切断脱碱基位点以利于修复功能。

大鼠耳蜗缺血再灌注后APE/Ref-1表达研究

目的观察APE/Ref-1在正常成年SD大鼠内耳蜗缺血再灌注后的表达变化。方法成年SD大鼠24只,随机分成2组(n=12),分别为假手术对照组、缺血再灌注组。各组动物于再灌注24h取出左侧耳蜗,每组随机4个耳蜗,石蜡包埋切片,行免疫组织化学观察APE/Ref-1表达分布。各组余下耳蜗组织进行均浆,进行免疫印记实验,测定匀浆中APE/Ref-1蛋白表达。结果与假手术对照组相比,缺血再灌注组APE/Ref-1蛋白表达显著增加(P<0.05)。在假手术组大鼠耳蜗中,APE/Ref-1主要表达在正常螺旋神经节区,细胞内定位在细胞浆和细胞核,螺旋韧带和血管纹也可以见到表达。缺血再灌注组APE/Ref-1在耳蜗这些部位的表达显著增加。结论正常大鼠内耳表达APE/Ref-1,主要表达在螺旋神经节区。耳蜗缺血再灌注后,APE/Ref-1在内耳的表达显著增加,提示APE/Ref-1可能与耳蜗缺血再灌注氧化损伤密切相关。

过氧化氢对PC12细胞中硫氧还蛋白和APE/Ref-1基因表达的影响

目的观察过氧化氢(H2O2)对硫氧还蛋白和APE/Ref-1基因表达的影响,探讨H2O2预处理对神经细胞具有适应性保护的分子机制。方法以PC12细胞作为神经细胞模型,以200和400μmol/L浓度的H2O2处理PC12细胞,用MTT法检测细胞的损伤程度,以Western blot方法测定硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达水平。结果200μmol/LH2O2促进PC12细胞的硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达,400μmol/LH2O2也促进PC12细胞的APE/Ref-1表达,但使PC12细胞的硫氧还蛋白表达显著降低。结论促进硫氧还蛋白和APE/Ref-1表达可能是低浓度H2O2预处理对神经细胞具有适应性保护的分子机制。

放射性核素^32P对人胰腺癌Patu-8988细胞株APE／Ref-1的诱导作用

为研究人胰腺癌细胞株在放射性核素32P胶体内照射时APE/Ref-1基因表达的变化,并试图揭示其在胰腺癌放疗抵抗中所起的作用,用不同剂量的放射性核素32P胶体加入人胰腺癌Patu-8988细胞株培养液中,形成最终放射性活度分别为:0、0.11、0.22、0.45、0.90MBq/mL等5个放射照射剂量组,共孵育24h。然后分别以RT-PCR及Western-blot方法测定作用后APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况。32P胶体作用24h后发现,Patu-8988的APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平明显上升,并与32P胶体的放射照射剂量呈正相关。由此得出结论:APE/Ref-1在胰腺癌放射性核素32P胶体内照射时表达明显增强,可能与胰腺癌放疗抵抗的产生有关,并提示针对APE/Ref-1的靶向干预可能有助于提高胰腺癌的放疗敏感性。

人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株APE1/Ref-1表达升高

背景:吉西他滨是中晚期胰腺癌的主要化疗药物,但由于胰腺癌对吉西他滨存在高度先天性和获得性耐药,吉西他滨不能明显改善胰腺癌患者的预后。目的:探讨DNA损伤修复及其碱基切除修复途径中的关键酶人脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1/氧化还原因子-1(APE1/Ref-1)表达与胰腺癌吉西他滨耐药之间的关系。方法:应用前期研究建立的人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990-0.5(耐药指数9.32)及其亲本细胞株SW1990,以彗星实验评估两者经吉西他滨作用后的DNA损伤程度,real-time PCR和蛋白质印迹法检测APE1/Ref-1 mRNA和蛋白表达。结果:经吉西他滨作用24 h,SW1990-0.5和SW1990细胞的彗星实验OTM值分别为0.32±0.13和26.96±6.83,相对于SW1990细胞,SW1990-0.5细胞的APE1/Ref-1 mRNA表达量为2.48±0.49,两者APE1/Ref-1蛋白相对表达量分别为1.57±0.08和0.84±0.06,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:DNA损伤修复可能与胰腺癌吉西他滨耐药相关,APE1/Ref-1表达上调可能是通过修复DNA损伤参与胰腺癌对吉西他滨耐药。

APE/Ref-1蛋白与脑缺血/再灌注神经元损伤

Cerebral ischemia and the aftermath of reperfusion form a hypoxic/hyperoxic sequence of events that can trigger DNA damage in neurons of central nervous system. Neuronal apoptosis will happen without immediate DNA repair. APE/Ref-1 is a multifunctional protein involoved in DNA base excision repair pathway and in redox reguiation of DNA-binding activity of AP-1 family members, which may play an important role in protection of postischemic neuronal damage.