Optimal Method of Extraction Process of Flavonoids from Ginkgo biloba

[Objectives] To optimize the extraction of total flavone in folium Ginkgo biloba leaves.[Methods] Using the ultrasonic extraction method, the three levels of maximum impact were selected by each factor selection, and the optimal extraction technology was obtained by box-benhnken test design analysis.[Results] After analyzing the results, the optimal process was as follows: a time of 28.89 min and liquid/material ratio of 31.38∶ 1, the temperature was 40.74℃. In this way, NaNO 2-Al (NO 3) 3-NaOH was used as color developing agent, and the theoretical extraction of flavone in ginkgo leaf can reach 11.74 mg/g.[Conclusions] This method can be used to extract total flavonoids from G. biloba leaves with simple operation, low cost and good repeatability.

近红外光谱法同时测定银杏提取液中总黄酮和总内酯含量

采用傅里叶变换近红外透射光谱和偏最小二乘法 ,对银杏提取液中总黄酮和总内酯的含量进行了定量测定。所建立的数学模型对校正集样本的银杏总黄酮和总内酯复相关系数 (MR)分别为 0 .998和 0 986 ;对预测集样本的银杏总黄酮和总内酯复相关系数分别为 0 .983和 0 .971 ,标准回收率分别为 95 71 %～ 1 0 3.3%和95 2 9%～ 1 0 4 .6 % ,相对标准偏差 (RSD)分别为 2 .4 4 %和 3.1 9%。结果表明 ,近红外光谱测定银杏提取液中总黄酮和总内酯含量具有快速、准确的优点 。

银杏叶总黄酮闪式提取工艺的正交设计法优化

目的优选银杏叶总黄酮的最佳闪式提取工艺。方法采用闪式提取技术,以黄酮提取率为指标,以乙醇体积分数、提取时间、料液比为主要考察因素,采用L9(33)正交实验法优选银杏叶总黄酮的闪式提取工艺。结果当乙醇体积分数为60%,闪式提取时间30 s,料液比1∶20时,银杏叶总黄酮的提取率最高,为1.99%。结论闪式提取法适合于银杏叶总黄酮的提取,该工艺具有稳定、快速、便捷的优点。

银杏叶提取物各组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的抑制作用

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)不同组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)积聚的作用,阐明其作用机制。方法:高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、3.125、6.250、12.500、25.000和50.000mg·L-1,同时设低糖对照组,MTT法检测各组系膜细胞增殖情况。高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、0.05、0.50、5.00和50.00mg·L-1,同时设低糖对照组,ELISA法检测条件培养基中Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维连接蛋白(FN)水平。结果:MTT检测,与高糖对照组比较,50.000mg·L-1 GBE组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),25.000和50.000 mg·L-1总黄酮组细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01),总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚和异鼠李素各浓度组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01),50.000mg·L-1内脂C组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);其他各组细胞增殖活性与高糖对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测,与高糖对照组比较,5.00和50.00mg·L-1 GBE组ColⅣ和FN水平均明显降低(P<0.01),0.50mg·L-1 GBE组FN水平明显降低(P<0.05),0.50、5.00和50.00mg·L-1总黄酮组ColⅣ水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00mg·L-1总内脂组ColⅣ和FN水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00mg·L-1内脂C组FN水平降低(P<0.05)。结论:GBE在高浓度时(50.000mg·L-1)抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖而低浓度(自0.500mg·L-1起)时抑制系膜细胞ECM积聚;GBE中总黄酮在抑制细胞增殖和ECM积聚方面起主要作用,总内脂无明显效果;苷元抑制系膜细胞增殖的作用远远强于糖苷。

纤维素酶Umcel9y-1在银杏叶总黄酮提取中的增效作用

选取银杏叶片为试验材料,研究纤维素酶Umcel9y-1在银杏叶片总黄酮提取中的应用价值。试验结果表明,0.08 mg·mL^(-1)纤维素酶Umcel9y-1,在其最适反应条件下(pH7.0,37oC),处理银杏叶片1 h、2 h、4 h和过夜(12 h),总黄酮的提取量较对照组分别提高了20.3%、20.7%、16.8%和15.0%。纤维素酶试验组处理2 h,总黄酮的提取量可以达到对照组12 h提取所得总黄酮量的97.0%,纤维素酶Umcel9y-1显著缩短了银杏叶总黄酮提取时间。采用超高效液相色谱对2种提取方法获得的提取液进行药用成分检测,发现添加纤维素酶Umcel9y-1对中药提取液活性成分没有显著的影响。

HPLC测定银杏叶片中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量

目的测定银杏叶片中总黄酮醇苷和银杏萜类内酯的含量。方法采用HPLC法,色谱柱为YMC-Pack ODS-A(150mm×6.0 mm含量,5μm);流动相分别为甲醇-0.4%磷酸溶液(55:45)、水-甲醇-四氢呋喃(75:25:12);流速1.0 m.lmin-1;检测波长360 nm;进样量10μl。结果槲皮素、山柰素和异鼠李素等3种黄酮苷元、白果内酯及银杏内酯A、B、C等4种银杏萜类内酯均能得到良好分离,标准曲线线性关系良好。结论所建方法准确、灵敏、稳定、可靠,可满足定量分析的需要。

注射用银杏叶提取物的工艺研究

目的:优化供注射用银杏叶提取物的生产工艺。方法:采用直接比较法,以HPLC法测定个样品中银杏总黄酮和总内酯的含量为考察指标,对银杏叶提取的水沉淀工艺、柱分离纯化工艺和除鞣质工艺进行优化。结果:对银杏叶醇提液浓缩后,加4倍量水,可去除相应杂质(叶绿素、树脂);大孔吸附树脂吸附量为银杏叶重的2.5倍,用15%乙醇洗脱能够除杂;聚酰胺除鞣质的用量为粗品的1/4。用此工艺中试10批样品质量合格。结论:该工艺稳定、可行,适合于工业化。

指纹图谱技术在中药对照物质标定中的应用

目的探讨指纹图谱技术在中药对照物质标定中的应用。方法采用HPLC法建立了银杏叶对照药材和银杏叶对照提取物的指纹图谱测定方法。结果样品指纹图谱相似度均大于0.90。结论所建方法可全面客观地反映银杏叶对照药材和银杏叶对照提取物的化学特征,保证其质量稳定可控。

复合酶预处理法对银杏叶总萜内酯提取率的影响

为研究复合酶预处理法对银杏叶总萜内酯浸出率的影响。本文采用单因素实验对银杏叶酶解预处理过程中的酶种类、酶用量、酶解时间、酶解温度、p H值五个关键因素进行探索,酶解后用20%乙醇-水溶液对银杏叶酶解液进行回流提取,LX-5型大孔吸附树脂对提取液进行纯化,浓缩干燥得银杏叶提取物产品。高效液相色谱法检测其总萜内酯含量。结果表明,银杏叶酶解预处理法的最佳工艺为:复合酶(纤维素酶∶果胶酶=1∶1),用量为银杏叶的1/300、酶解时间4.0 h、酶解温度50℃、初始p H值4.0。在该工艺条件下获得的银杏叶总萜内酯提取率为0.55%,银杏叶提取物中总萜内酯含量为8.96%,高于银杏叶提取物国际商务标准(总内酯含量≥6%)。说明复合酶预处理条件下银杏叶总萜内酯提取率高,研究为工业化生产高质量银杏叶提取物提供了理论依据。

响应面法优化超声辅助离子液体提取银杏叶总黄酮

以离子液体浓度、提取时间、提取温度、料液比为考察因素,以银杏叶总黄酮提取率为评价指标,采用响应面法优化超声辅助离子液体提取银杏叶总黄酮。结果表明,在料液比为1∶40(g∶mL)、提取时间为22min、离子液体浓度为1.1mol·L^(-1)、提取温度为54℃的最优条件下,银杏叶总黄酮提取率可达到26.48mg·g^(-1),与预测值(26.98mg·g^(-1))接近。该方法稳定可行,重复性好,可用于提取银杏叶总黄酮。

通络降脂胶囊质量标准的研究

目的制定通络降脂胶囊的质量控制标准。方法采用TLC法对通络降脂胶囊中的银杏叶提取物和绞股蓝总皂苷进行定性鉴别;采用HPLC法测定通络降脂胶囊中总黄酮醇苷的含量。结果薄层色谱斑点显色清晰,分离良好。槲皮素、山柰素、异鼠李素进样量分别在77.88~1558、59.40~188、16.34~326.7 ng范围内呈良好的线性关系（n=6）,平均加样回收率分别为98.3%、98.0%、96.0%,RSD分别为1.4%、1.6%、1.8%。结论所建立的方法简便、准确、专属性强,可用于通络降脂胶囊的质量控制。

银杏叶总黄酮苷和萜内酯类化合物最佳提取工艺研究

目的研究银杏叶黄酮苷和萜内酯的最佳浸提工艺。方法用正交试验确定银杏叶总黄酮苷和萜内酯的浸提工艺。结果最佳浸提工艺为乙醇浓度50%,溶剂比8∶1,提取3次,每次lh。结论该工艺提取的黄酮苷和萜内酯含量最高,成本最低,操作简单。

银杏叶总内酯超声提取工艺优化

以初冬银杏叶为试验材料,考察超声浸提时间、乙醇浓度、水浴温度、浸提次数对银杏叶总内酯浸提的影响,并对试验结果进行验证。结果表明,初冬银杏叶总内酯超声提取的最佳工艺为:料液比1∶20,55℃水浴中45%的乙醇超声浸提20min,浸提1次,浸提液中总内酯含量达10.86mg/g。验证性试验结果表明,此工艺稳定,仪器精密度良好、回收率高、省时、节能,可以为工厂化浸提初冬银杏叶总内酯提供一定的技术参考。

Box-Behnken效应面法优化银杏达莫注射液的配伍条件

目的:利用Box-Behnken效应面法优化银杏达莫注射液的配伍条件。方法:选择放置时间、溶媒种类、溶媒体积、剂量4个因素为自变量,以不溶性微粒和总黄酮醇苷含量的总评归一值为评价指标,拟合二次项方程,绘制三维效应面图,选取最佳配伍条件。结果:最佳配伍条件为10 ml样品与400 ml的0.9%氯化钠注射液配伍,宜在1 h内静滴完毕。结论:Box-Behnken效应面法优化银杏达莫注射液的配伍条件预测性好,为临床用药提供了科学依据。

RP-HPLC法测定银杏叶提取物类脂质体中黄酮和萜类内酯含量的优化方法

建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）,测定银杏叶提取物类脂质体（EGBN）中银杏3种黄酮化合物（槲皮素、山奈素、异鼠李素）和4种萜类内酯（银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯）的含量,及银杏总黄酮醇苷的饱和溶解度。采用透析法提取出EGBN中的银杏黄酮。黄酮应用Agilent HC-C18色谱柱（4.6mm×250.0mm,5μm）,以V（乙腈）∶V（0.4%磷酸）=28∶72为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长360 nm,柱温40℃。萜类内酯应用Agilent HC-C18色谱柱（4.6mm×250.0 mm,5μm）,以V（甲醇）∶V（四氢呋喃）∶V（水）=46∶7∶47为流动相,流速0.8 mL/min,NEB温度60℃,EVA温度105℃。结果表明：透析法可以将EGBN中有效成分很好的分离,从而易于测定其中药物含量。在此色谱条件下,槲皮素、山奈素、异鼠李素分别在2.01~100.50,1.01~50.3,0.26~12.8 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系;银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯采用外标两点测定;平均加样回收率（n=6）均在（100±2）%范围内;精密度试验的RSD（n=6）均〈2.0%。并将该法应用于银杏总黄酮醇苷的饱和溶解度的测定。该法灵敏、准确、重复性好,结合透析法可以准确的测定EGBN中黄酮、萜类内酯的含量,适合于银杏叶提取物类脂质体的质量控制。

银杏达莫注射液中总银杏酸HPLC检测法的建立及其含量分析

采用高效液相色谱仪检测银杏达莫注射液中总银杏酸,建立了检查方法并对含量进行了分析。通过对白果新酸(C13∶0)在11.0~88.0μg·mL^(-1)呈良好线性关系,回归方程为:Y=8558.8X+8.5854(R^2=0.999 8),平均添加回收率为103.02%(RSD=0.72%),精密度的RSD为0.89%,稳定性的RSD为1.09%,银杏达莫注射液中银杏酸的最低检出量为2.2 ng·mL^(-1),银杏达莫注射液中未检测到总银杏酸,表明样品符合银杏达莫注射液质量标准。所建立的以白果新酸为标准品测定总银杏酸的HPLC法具有较好的精密度和重现性,可用于银杏达莫注射液的质量控制,为银杏达莫注射液现行质量标准的提高提供可靠的理论依据。

银杏叶提取工艺研究

目的优选银杏叶总黄酮醇苷和总内酯的提取方法。方法以提取后银杏叶总黄酮醇苷和总内酯的含量为评价指标,通过正交试验优选最佳提取工艺,即选择不同提取时间、乙醇量和乙醇浓度作为相关因素,初步优化了提取工艺。结果及结论结果表明,银杏叶最佳提取工艺为:加药材15倍量(9,6)60%乙醇,回流2次,每次1.5h。

闪式硅胶柱层析法分离银杏黄酮和萜类内酯的工艺研究

目的研究银杏叶提取物中总黄酮醇苷和萜类内酯的分离纯化方法。方法采用闪式硅胶柱层析分离法,用不同极性的有机溶剂洗脱并跟踪检测,筛选出能有效分离银杏叶提取物中的银杏黄酮和萜类内酯的洗脱剂及用量。结果此方法可以很好地将银杏黄酮和萜类内酯分离,并且分离过程含量损失极小。结论此方法为银杏黄酮和萜类内酯的进一步单独纯化提供了一种新途径。

对照提取物在银杏叶制剂特征图谱中的应用

目的建立银杏叶片、胶囊、滴丸特征图谱的评价方法。方法以对照提取物为参照,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法,色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18(150 mm×4.6 mm,2.7μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,流速为0.8 mL·min^(-1);ELSD检测器:漂移管温度105℃;氮气(N2)流速:2.5 L·min^(-1)。结果以银杏叶对照提取物和银杏叶总内酯对照提取物为参照,确立12个共有峰作为银杏叶制剂的特征峰,建立了银杏叶制剂的特征图谱。结论该方法简单、重复性良好,可为银杏叶制剂的质量控制提供有效鉴别方法。

银杏叶总内酯对照提取物在银杏叶含量测定中的应用

目的探讨选择银杏叶总内酯对照提取物替代单体成分对照品测定银杏叶中萜内酯类成分含量的可行性。方法以定值的银杏叶总内酯对照提取物为对照,采用高效液相-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法,色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(-1),ELSD检测器:漂移管温度105℃;氮气(N2):3.0 L·min-1。结果银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯的进样量与峰面积分别在0.735~5.879μg(r=0.999 6)、0.404~6.060μg(r=0.999 6)、0.296~4.439μg(r=0.999 6)、1.001~6.006μg(r=0.999 7)范围内呈良好的对数线性关系;平均回收率分别为95.5%,97.4%,99.3%,100.4%,RSD依次分别为4.0%,4.5%,5.0%,2.1%。结论银杏叶总内酯对照提取物可以替代相应的单体对照品用于银杏叶中萜内酯类成分的定量测定。