ROS对糖尿病大鼠血脂代谢及肾脏组织中VEGF的影响

目的探讨地黄寡糖(ROS)对糖尿病大鼠血脂代谢及肾脏组织中血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法将40只SPF级大鼠按照随机数字表法分为健康组、DM组、ROS组及药物对照组,每组10只。DM组、ROS组及药物对照组大鼠均建立糖尿病模型。ROS组及药物对照组分别采用200 mg/(kg·d)的ROS及二甲双胍灌胃,剩余两组灌胃等体积生理盐水,治疗22 d。治疗结束后,检测血脂代谢指标、肾脏重量、肾脏病理组织切片、肾脏组织中VEGF阳性率及蛋白。结果与健康组比较,DM组、ROS组、药物对照组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低,经药物干预后,ROS组、药物对照组TC、TG明显低于DM组,HDL-C明显高于DM组,且ROS组TG明显低于药物对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与健康组比较,ROS组、药物对照组大鼠肾脏重量及肾脏指数均明显增加,药物干预后,与DM组比较,ROS组及药物对照组肾脏重量及肾脏指数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。健康组大鼠肾脏结构完整,肾小球基质分布清晰,未见增生及肥大;DM组大鼠肾小球基质模糊,毛细血管增厚,炎性反应浸润严重,肾小球出现肥大;经药物干预的ROS组及药物对照组上述病理情况均好转,症状减轻。健康组、DM组、ROS组及药物对照组大鼠肾脏组织中VEGF蛋白相对表达量分别为1.00±0.15、3.03±0.33、1.45±0.27、1.50±0.30,组间比较,差异有统计学意义(F=109.100,P<0.001)。DM组VEGF蛋白相对表达量明显高于健康组,差异有统计学意义(t=17.880,P<0.001)。ROS组及药物对照组VEGF蛋白相对表达量明显低于DM组,差异有统计学意义(t=11.870、10.990,P<0.001)。结论灌胃ROS能够改善糖尿病大鼠血脂代谢指标,降低肾脏重量,这与抑制VEGF表达具有相关性。

生地低聚糖雾化吸入后小鼠体内药动学研究

目的 考察生地低聚糖雾化吸入后小鼠体内药动学。方法 66只小鼠随机分为11组,雾化吸入药液,于0、0.16、0.33、0.67、1、2、4、8、12、18、24 h采血,取出肺组织。LC-MS/MS分析采用Shodex Asahipak NH2P-50 4E色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm)和Asahipak NH2P-50G 4A保护柱(10 mm×4.6 mm);流动相水-乙腈,梯度洗脱;体积流量900μL/min;柱温25℃;电喷雾离子源;负离子扫描;多反应监测模式,计算主要药动学参数。结果 生地低聚糖在50~36 000 ng/mL范围内线性关系良好(r>0.999 0),定量限为50 ng/mL。血浆、肺组织中AUC_(0~t)分别为14 726.56 ng/mL·h、18 544.11 ng/g·h,T_(max)分别为0.16、0 h,t_(1/2z)分别为0.838、3.739 h。结论 生地低聚糖可通过雾化吸入迅速分布到小鼠肺组织,并维持一段时间。

地黄低聚糖对6种益生菌体外增殖的影响

为了解地黄低聚糖对6种益生菌体外增殖的影响,试验将嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、短双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌6种益生菌分别用含0.5%、1%、2%、4%地黄低聚糖(作为碳源)的培养基培养,以不含葡萄糖的MRS肉汤培养基为阴性对照,以含2%葡萄糖的MRS肉汤培养基为阳性对照,测定地黄低聚糖培养6种益生菌的生长曲线、pH值,根据生长情况选取其中一个发酵效果最好的地黄低聚糖浓度检测发酵液中短链脂肪酸(乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、戊酸和异戊酸)生成情况与糖类成分(果糖、蔗糖、葡萄糖、棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖)的变化。结果表明:6种益生菌均可利用不同浓度地黄低聚糖进行增殖,与2%葡萄糖培养基相比,各菌种可优先利用地黄低聚糖进行增殖,其中2%、4%地黄低聚糖增殖效果优于其他浓度,6种益生菌对短双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌增殖效果较好,优于其他益生菌;以经济适用原则选取2%地黄低聚糖进行后续试验,2%地黄低聚糖发酵液中短链脂肪酸生成均以乙酸为主,但糖类成分的含量存在差异,短双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌发酵液中主要为葡萄糖,而其他4种发酵液中除葡萄糖外还含有较多的棉籽糖、蔗糖。说明地黄低聚糖可促进6种益生菌增殖,但增殖效果不同,其中短双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌增殖效果最佳。

地黄薄层色谱鉴别方法开发研究

目的:建立地黄药材、地黄饮片中寡糖类成分的薄层色谱鉴别方法。方法:以水苏糖和地黄对照药材为对照品,对供试品溶液的制备方法、展开剂(乙酸乙酯-乙醇-水-乙酸,乙酸乙酯-乙醇-水-氨水及其不同配比)、显色检视方法(日光和紫外366nm)进行薄层色谱鉴别方法的考察优化,并对温度、湿度、不同品牌预制板分别进行了方法耐用性考察,确定地黄的供试品溶液制备方法和最佳薄层色谱条件。结果:采用硅胶G板,以乙酸乙酯-乙醇-水-氨水(2∶5∶4∶0.5)为展开剂,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。地黄药材、地黄饮片供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照相同位置无干扰。结论:新建方法简便快捷、专属性强、灵敏度高,可同时应用于地黄药材和地黄饮片,为地黄提供了快速定性鉴别方法和依据。

地黄寡糖在2型糖尿病大鼠模型上的降血糖作用及机制

目的研究地黄寡糖(ROS)在2型糖尿病(T2DM)动物模型和正常大鼠高血糖模型上对血糖的影响及机制。方法采用长期高脂肪饲料饲养加小剂量链脲佐菌素(STZ,30mg·kg-1,ip)诱导♀大鼠2型糖尿病动物模型;采用葡萄糖(2·5g·kg-1,ip)和肾上腺素(300μg·kg-1,ip)诱导正常♂大鼠高血糖模型。动物分为正常对照组、2型糖尿病模型组或高血糖模型组、ROS给药组及阳性对照二甲双胍组,以上各组均为灌胃给药。结果与2型糖尿病模型组比较,ROS高、低剂量组均可降低糖尿病大鼠的血糖值,以高剂量组最为明显;ROS对血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量有降低趋势,对高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量有升高趋势;ROS可使肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性降低,使肝糖原和胰岛素含量呈增加趋势;对正常大鼠肾上腺素性高血糖模型,ROS给药6d后,血糖峰值比高血糖模型组低。结论ROS灌胃给药对2型糖尿病大鼠的血糖有降低作用,其机制与降低肝葡萄糖-6-磷酸酶的活性有关,也可能与增加大鼠肝糖原合成和促进胰岛素分泌有关。ROS亦有降低大鼠肾上腺素性高血糖的作用。

地黄寡糖对SAMP8小鼠造血祖细胞增殖的作用

采用造血祖细胞体外克隆培养等实验血液学技术，研究了地黄寡糖对快速老化模型Ｐ系小鼠（ＳＡＭＰ８）骨髓造血祖细胞增殖作用的影响．结果表明地黄寡糖可促进ＳＡＭＰ８小鼠骨髓粒系巨噬系祖细胞，早期和晚期红系祖细胞的增殖，其脾细胞条件液也可使造血祖细胞克隆集落数明显增加，地黄寡糖还可使其基质细胞层上粒系巨噬系祖细胞集落的产率明显增多．提示地黄寡糖可能通过多种途径激活机体组织，特别是造血微环境中的某些细胞，促进其分泌多种造血生长因子而增强造血祖细胞的增殖．

地黄寡糖对3T3-L1脂肪细胞增殖及胰岛素抵抗的作用

目的:探讨地黄寡糖对脂肪细胞增殖和胰岛素抵抗的影响。方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞的增殖情况,同时采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型,检测地黄寡糖对细胞培养基中葡萄糖浓度的影响。结果:在DMEM高糖培养基中,地黄寡糖可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,抑制3T3-L1脂肪细胞增殖,作用呈明显量效关系;使3T3-L1前脂肪细胞及3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量增加,呈明显量效关系;地黄寡糖能明显增加胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖消耗量,增强对胰岛素的敏感性。结论:地黄寡糖可以促进前脂肪细胞的增殖,抑制脂肪细胞的增殖,地黄寡糖对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用。

地黄寡糖对HepG2胞细增殖及胰岛素抵抗的作用

目的：探讨地黄寡糖对HepG2细胞增殖和胰岛素抵抗的影响。方法：将HepG2细胞分为空白组、罗格列酮组（剂量3.4 mg·L^-1）和地黄寡糖组（剂量分别为0.1～30 mg·L^-1）,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测HepG2细胞的增殖,同时采用高胰岛素诱发HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,研究地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。结果：在中剂量葡萄糖培养基中,高剂量的地黄寡糖促进HepG2细胞的增殖,低剂量则抑制HepG2细胞的增殖,作用呈明显的量效关系;地黄寡糖可促进HepG2细胞的葡萄糖消耗,最佳剂量为10 mg·L^-1;地黄寡糖能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗,增强对胰岛素的敏感性。结论：高剂量地黄寡糖促进HepG2增殖,低剂量则抑制其增殖,地黄寡糖对高胰岛素诱发的HepG2细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用。

地黄低聚糖对实验性糖尿病与高血糖大鼠糖代谢的调节作用

地黄低聚糖（１００ｍｇ／ｋｇ×１５ｄｉｐ）可明显降低四氧嘧啶糖尿病大鼠高血糖水平，增加肝糖原含量，减低肝葡萄糖－６－磷酸酶活性。地黄低聚糖对正常大鼠血糖无明显影响，但可部分预防葡萄糖及肾上腺素引起之高血糖症。切除肾上腺后，地黄低聚糖对葡萄糖性高血糖的预防作用消失。上述结果表明地黄低聚糖不仅可以调节实验性糖尿病的糖代谢紊乱，亦可调节生理性高血糖状态。

地黄寡糖对2型糖尿病大鼠外周血像、激素水平和胰岛病理学的影响

目的:研究地黄寡糖(ROS)对2型糖尿病大鼠的外周血像、糖代谢激素水平和胰岛病理学的影响,以阐明ROS的降血糖作用机制。方法:采用长期高脂肪饲料饲养加小剂量链脲佐菌素诱导雌性大鼠2型糖尿病动物模型;动物分为正常对照组、2型糖尿病模型组、ROS给药组及阳性对照二甲双胍组,均为灌胃给药。检测给药22 d后各组大鼠体重、脾重、外周血像变化,测定血浆胰岛素、胰高血糖素及皮质酮水平,同时进行胰岛病理学检查。结果:与2型糖尿病模型组比较,ROS高剂量组可增加大鼠体重和脾脏重量;ROS高、低剂量组均可增加外周血白细胞和淋巴细胞数量,以高剂量组最为明显;并有增加血小板和单核细胞数量的趋势。ROS可增加血浆胰岛素水平,可促进2型糖尿病大鼠胰岛细胞形态恢复。结论:ROS灌胃给药可影响2型糖尿病大鼠的体重和脾脏重量,促进外周血细胞和胰岛恢复,提高胰岛素水平。

地黄低聚糖诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的观察地黄低聚糖(RGOs)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为心肌样细胞的作用。方法采用贴壁培养法分离大鼠MSCs,反复传代及纯化后,取第8代MSCs进行分组诱导:RGOs组(RGOs终浓度100μg/ml)、5-氮胞苷(5-Aza)组(5-Aza终浓度10μmol/L)、RGOs+5-Aza组和空白对照组。诱导后继续培养4周。采用Access化学发光法和干化学法分别检测诱导后MSCs内心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)和心肌酶CK、CK-MB的表达,免疫荧光法和Western blotting法检测诱导后MSCs内cTnI、缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达。结果诱导后各组MSCs均表达cTnI、CK和CK-MB,RGOs+5-Aza组中CK、CK-MB的表达水平较RGOs组、5-Aza组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示:在未诱导MSCs的空白对照组中未发现cTnI、Cx43阳性细胞,各诱导组MSCs均可见cTnI阳性细胞和Cx43阳性细胞,且RGOs+5-Aza组cTnI、Cx43荧光强度较RGOs组、5-Aza组增高。Westernblotting结果显示空白对照组无阳性条带出现,各诱导组均出现cTnI和Cx43阳性条带,且RGOs+5-Aza组cTnI和Cx43表达量较RGOs组、5-Aza组增高。结论RGOs可以在体外诱导大鼠MSCs分化为心肌样细胞,与5-Aza联合应用后其诱导MSCs内心肌特异性物质表达的作用较单药更强。

地黄低聚糖对小鼠免疫和造血功能的作用

采用免疫学和实验血液学方法，研究和探讨了地黄低聚糖对小鼠免疫功能和造血功能的作用。结果表明：地黄低聚糖４０ｍｇ／ｋｇ可增强正常小鼠的ＰＦＣ反应，而２０、４０ｍｇ／ｋｇ，可提高Ｃｙ抑制小鼠和荷瘤小鼠的ＰＦＣ数及增强荷瘤小鼠的淋巴细胞增殖反应。同时地黄低聚糖１０～４０ｍｇ／ｋｇ可促进骨髓造血祖细胞的增殖与分化。结果提示地黄低聚糖可明显增强免疫抑制小鼠的体液免疫和细胞免疫反应，同时可促进小鼠骨髓造血祖细胞的增殖分化。

地黄寡糖对脑缺血再灌注所致痴呆大鼠学习记忆功能的影响

目的研究地黄寡糖对脑缺血再灌注致痴呆大鼠学习记忆功能的影响及其可能机制。方法采用ip硝普钠及双侧颈总动脉夹闭10min-再灌10min-夹闭10min的方式制备脑损伤模型。地黄寡糖6.4,32.0或160.0mg.kg-1于造模前3d至造模后7dip给药,每日1次,共10d。于术后d7开始进行水迷宫实验测定大鼠学习记忆能力;术后d10取海马,HPLC异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定海马谷氨酸(Glu)含量;Western蛋白印迹法测定海马磷酸化细胞外信号调节激酶2(p-ERK2)含量。结果模型组大鼠学习记忆能力明显下降,海马Glu含量明显升高,p-ERK2含量降低。地黄寡糖可剂量依赖性地增强缺血再灌注损伤大鼠的学习记忆能力,降低海马Glu含量,提高海马p-ERK2含量。结论地黄寡糖可以改善脑缺血再灌注致痴呆大鼠的学习记忆能力,这种作用可能与抑制Glu过量释放、进而使ERK2信号途径正常发挥有关。

地黄寡糖灌胃对糖尿病大鼠的降糖作用及对肠道菌群的影响

目的 :观察地黄寡糖灌胃给药对四氧嘧啶 (ALX)糖尿病大鼠的降糖作用和对肠道菌群的影响。方法 :以AL× (1 50mg·kg- 1 ,ip)诱发糖尿病大鼠模型 ,灌胃给予地黄寡糖 2 0 0mg·kg- 1 ·d- 1 ,检测给药前、给药 7d及给药 1 4d后大鼠血糖、血浆胰岛素、肝糖原的变化及给药 1 4d肠道菌群的变化。结果 :给药组大鼠血糖降低、血清胰岛素浓度及肝糖原含量增加 ,肠道菌群中双歧杆菌类杆菌、乳杆菌等优势菌群的数量明显增加 ,与糖尿病模型组比较差异有显著性 (P <0 .0 5)。结论 :地黄寡糖具有降低ALX糖尿病大鼠血糖及调节肠道菌群功能的作用 ,调节机体微生态平衡可能是地黄寡糖降血糖机制之一。

超滤和纳滤分离技术提取纯化地黄低聚糖的研究

目的通过不同截留相对分子质量的超滤膜对地黄多糖分离纯化,再利用纳滤膜对超滤液进行浓缩纯化。方法采用不同截留相对分子质量超滤再纳滤的工艺流程。结果两次超滤得到低聚糖,最佳操作条件为:料液质量浓度为13～132mg/mL,操作压力为0.25～0.275MPa,温度20～40℃。然后采用纳滤膜对超滤液进行浓缩纯化,适宜工艺条件为:料温为20～40℃,操作压力0.59～0.79MPa,浓缩倍数可达3倍。应用超滤-纳滤技术,低聚糖得率为46.63%,质量分数达到93.3%,凝胶过滤法验证低聚糖制品的相对分子质量低于6000。结论该工艺能有效分离纯化地黄低聚糖,简单可行,操作简便。

地黄寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制研究

目的研究地黄寡糖改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子机制。方法运用RT-PCR技术,检测地黄寡糖对胰岛素抵抗HepG2细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)、胰岛素受体(IR)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和2(GLUT2)基因表达的影响。结果地黄寡糖能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞中PPAR-α、IR、GLUT4 mRNA的表达;能够明显降低GLUT2基因mRNA的表达。结论地黄寡糖对HepG2胰岛素抵抗具有明显的改善作用,其机制可能与激活PPAR-α、调节HepG2内IR及GLUT2 mRNA的表达有关。

高脂饲料加STZ联合诱导的大鼠糖尿病模型HPA轴功能变化与糖脂代谢的关系

目的研究高脂饲料加小剂量STZ联合诱导的糖尿病大鼠HPA轴功能变化与糖脂代谢的关系。方法采用长期高脂饲料加STZ(30mg·kg-1ip)联合诱导的糖尿病模型,将其分为4组,即正常对照组、模型组、地黄寡糖(ROS)组和二甲双胍组,ROS组灌胃地黄寡糖(200mg·kg-1.d-1),二甲双胍组灌胃盐酸二甲双胍(200mg·kg-1.d-1);每周测定1次大鼠血糖和体重,给药4wk后收集24h尿液并断头处死,测定血浆中血脂(TC、TG、HDL-C)、胰岛素、CRH、ACTH、皮质酮及下丘脑中CRH、垂体中ACTH、24h尿液中尿糖及皮质酮(CORT)含量。结果与正常对照组相比,模型组血糖、尿糖、TC、TG均明显升高,肝糖原、HDL-C含量下降,地黄寡糖能逆转这些改变。同时模型与正常对照组相比,胰岛素和下丘脑中CRH下降明显,血浆中ACTH、CORT及垂体中ACTH、24h尿液中CORT总量都有所升高,ROS对其有一定的改善作用。结论高脂饲料加STZ诱导的糖尿病模型糖脂代谢紊乱可能与HPA的活性升高有关,中药地黄寡糖的降血糖作用可能与改善HPA功能有一定关系。

地黄中寡糖的提取分离工艺研究

目的 研究地黄 (Rehmanniaglutinosa )中寡糖的提取分离工艺。方法 建立水苏糖的HPLC测定法 ;以水苏糖含量为指标 ,采用正交试验优化地黄水提取物的提取工艺 ,对水提物进一步用离子交换树脂进一步纯化 ,再进行活性炭柱层析 ,以不同浓度梯度乙醇洗脱 ,分得寡糖的不同部位。结果 地黄水提取的最佳工艺为A2 B3 C2 ,即溶剂 (水 )体积 10倍 ,提取 3次 ,每次提取 1h。水提物经活性炭柱层析得到 4个部位 ,部位 Ⅰ～Ⅳ ,其中部位 Ⅱ及部位 Ⅲ 中水苏糖的含量分别为 2 0 .99%及 6 0 .5 1%。结论 地黄水提取的较佳工艺条件为A2 B3 C2 ,活性炭柱层析可以较好地将地黄中寡糖进行分离 ,其中水苏糖的HPLC测定法简便、稳定。

地黄寡糖对妊娠期糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平的影响

目的:研究地黄寡糖对妊娠糖尿病大鼠血糖和血浆胰岛素水平的影响。方法:以四氧嘧啶(150 mg/kg,ip)诱发妊娠大鼠糖尿病模型,灌胃给予地黄寡糖200 mg/(kg/d),检测给药前、给药7 d及给药14 d后大鼠血糖和血浆胰岛素的变化。结果:地黄寡糖口服可降低四氧嘧啶诱发之妊娠糖尿病模型大鼠的空腹血糖,增加血浆胰岛素水平。结论:地黄寡糖具有降低妊娠糖尿病大鼠血糖和改善胰岛素释放的作用。

地黄低聚糖对快速老化模型小鼠造血功能的影响

目的：研究地黄低聚糖（ＲＧＯＳ）对快速老化模型小鼠（ＳＡＭＰ８）造血功能的影响。方法：采用造血祖细胞体外克隆培养等实验血液学方法。结果：ＲＧＯＳ１０，２０ｍｇ·ｋｇ－１可使ＳＡＭＰ８小鼠的ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ明显增多，并可使外周血中降低的ＷＢＣ数明显增加。提示ＲＧＯＳ可刺激ＳＡＭＰ８小鼠造血干细胞、祖细胞的增殖分化。集落刺激活性实验显示ＲＧＯＳ可使小鼠体内的集落刺激因子产生明显增多。小鼠骨髓组织学研究结果也进一步证实了ＲＧＯＳ增强ＳＡＭＰ８小鼠造血功能的作用。结论：ＲＧＯＳ可以增强ＳＡＭＰ８小鼠的造血功能。