Two new isospirostanol sapogenins from Reineckia carnea

说出的二新 isospirostanol sapogenins (25R )-5-spirostane-(1, 3 )-diol (1 ) 并且(25R )-5-spirostane-(1, 2， 3， 4 )-tetrol (2 ) 从 Reineckia carnea (Andr ) 的整个植物被孤立 Kunth。sapogenins 的结构被化学、光谱的方法阐明。

纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制

目的探讨吉祥草中纤细薯蓣皂苷(gracillin)诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的作用及机制。方法以A549细胞为对象,采用CCK-8法检测不同浓度(0.25、0.5、1、2、4μmol/L)gracillin作用不同时间(12、24、48 h)对细胞增殖的影响。与不加药物的对照组进行比较,采用生物透射电子显微镜观察gracillin(2μmol/L)作用24 h对细胞自噬小体形成的影响;通过GFP-LC3质粒转染实验检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后GFP-LC3在细胞自噬小体膜上的聚集情况;采用实时定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后A549细胞中序列相似性家族102成员A(FAM102A)mRNA和蛋白的表达水平,以及自噬相关蛋白[p62、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)]和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(又名Akt)信号通路相关蛋白的表达水平。结果gracillin对A549细胞具有一定的增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖趋势;其作用24 h的半数抑制浓度为2.55μmol/L。gracillin作用24 h后,细胞胞浆内可见含双层膜结构的自噬小体;自噬小体膜上可见明显的GFP-LC3绿色荧光斑点,且有随药物浓度升高而增多的趋势。与对照组比较,gracillin不同浓度组细胞中FAM102A mRNA和蛋白的表达水平(0.5、1、2μmol/L组)、Beclin-1蛋白的表达水平(1、2μmol/L组)和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(2μmol/L组)均显著升高,p62蛋白的表达水平(1、2μmol/L组)和Akt蛋白(1、2μmol/L组)、PI3K蛋白(2μmol/L组)的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论gracillin可能通过上调FAM102AmRNA和蛋白的表达、抑制PI3K/Akt信号通路来促进A549细胞发生自噬,从而发挥抑制细胞增殖的作用。

吉祥草多糖的单糖组成及抗氧化活性分析

优化吉祥草多糖(RCP)提取工艺,探讨RCP的单糖组成和体外抗氧化活性。以吉祥草全草为原料,经烘干、粉碎、脱脂、脱色等前处理,在单因素基础上,利用正交试验优化RCP的提取工艺,采用高效液相色谱仪(HPLC)测定单糖组成,并探讨RCP体外抗氧化活性。RCP提取最佳工艺为料液比1∶40(g∶mL),提取温度100℃,提取时间60 min,提取次数3次,此条件下RCP提取率为17.23%±0.78%。经HPLC分析表明,RCP主要由8种单糖组成,分别是半乳糖醛酸41.90%±0.01%、半乳糖9.14%±0.01%、阿拉伯糖4.20%±0.03%、鼠李糖1.99%±0.02%、葡萄糖1.98%±0.01%、甘露糖1.06%±0.01%、葡萄糖醛酸0.49%±0.01%。体外抗氧化活性分析表明,RCP具有较强的体外抗氧化能力,在1.0 mg/mL质量浓度时,DPPH自由基、羟自由基、O_(2)^(-)·自由基、模拟胃液NO_(2)^(-)自由基的清除率各为91.49%±2.76%,29.33%±2.09%,42.37%±2.65%,25.17%±1.06%,IC_(50)值分别为0.08,1.67,1.11,2.42 mg/mL。吉祥草有一定的抗氧化能力,本研究有利于吉祥草多糖在功能性食品、保健品和药物等领域的开发利用,为吉祥草的开发利用提供理论依据。

苗药吉祥草配伍余甘子抗Lewis肺癌细胞增殖组分的筛选

目的:探索吉祥草和余甘子配伍后治疗非小细胞肺癌的药效物质,为吉祥草配伍余甘子在抗肿瘤制剂开发方面的研究提供实验依据。方法:采用鲜药榨汁、传统水煎、渗漉为提取方法制得吉祥草配伍余甘子的不同提取物,以Lewis肺癌细胞体外实验模型作为评价手段,优选药材的最佳提取方法;通过膜分离技术,将最佳提取方法的提取物分段截留得到不同分子量区间段组分,以Lewis肺癌细胞体外实验模型作为评价手段优选最佳的分子量区间段。结果:吉祥草配伍余甘子对Lewis肺癌细胞增殖抑制作用的最佳提取方法为95%乙醇渗漉法。95%乙醇渗漉提取物对Lewis肺癌细胞增殖抑制作用的最佳分子量区间段组分为分子量10~30 KD与分子量≤1 KD组分。结论:苗药吉祥草配伍余甘子对Lewis肺癌细胞具有增殖抑制作用,抑制作用最佳组分为95%乙醇渗漉的分子量10~30 KD与分子量≤1 KD组分。

吉祥草配伍余甘子抗非小细胞肺癌的最佳提取物系统试验研究

研究苗药吉祥草配伍余甘子抗非小细胞肺癌最佳提取物中所含有的化学成分种类。采用化学成分系统试验研究方法,最佳提取物中有挥发油、油脂类、蒽醌类、黄酮类、多糖类、氨基酸、多肽、蛋白质类、有机酸类、皂苷类、鞣质及酚类的系统试验结果为阳性,因此,苗药吉祥草配伍余甘子抗非小细胞肺癌最佳提取物中所含有的化学成分主要为挥发油、油脂类、蒽醌类、黄酮类、多糖类、氨基酸、多肽、蛋白质类、有机酸类、皂苷类、鞣质以及酚类成分。

猕猴桃园套种吉祥草对土壤酶活性及果实产量、品质的影响

【目的】研究套种吉祥草和清耕对猕猴桃根际土壤微生物数量、酶活性和果实产量品质的影响及其相关性,为丰富猕猴桃生态学理论,猕猴桃优质生产及猕猴桃园套种吉祥草栽培模式的应用提供科学依据。【方法】在猕猴桃行间套种吉祥草,以清耕为对照,测定不同生长期猕猴桃根际土壤细菌、放线菌、真菌数量,脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性和含水量及果实的产量品质,并分析其相互关系。【结果】套种吉祥草可显著提高不同时期猕猴桃根际土壤微生物量和土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性,促进猕猴桃产量的增加和品质的改善,并随套种年限的延长趋于增加。连续4年套种吉祥草猕猴桃根际土壤细菌、放线菌和真菌数量比对照分别提高27.85%—54.34%、28.57%—96.05%和16.39%—148.38%,土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性和含水量分别为对照的0.20—0.61倍、0.30—0.87倍、0.41—0.65倍、0.23—0.32倍和0.05—0.16倍;果实单果体积和亩产量分别提高3.26%和4.88%;果实达食用时,维生素C、可溶性固形物、可溶性总糖、干物质和可滴定酸分别提高15.24%、5.46%、12.11%、5.63%和4.12%。相关性分析表明,套种吉祥草的猕猴桃树根际土壤微生物数量与脲酶和磷酸酶活性达极显著或显著正相关,与过氧化氢酶活性呈负相关;根际土壤微生物数量和土壤酶活性与猕猴桃果实单果重和品质间具有明显的相关性。【结论】套种吉祥草对提高猕猴桃根际土壤微生物数量和酶活性,增加果实产量和改善品质具有明显作用。

吉祥草化学成分研究

目的:研究吉祥草的化学成分。方法:利用溶剂提取,硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和MCI树脂等手段进行分离、纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果:从吉祥草中共分离鉴定了10个化合物,分别为β-胡萝卜苷(1),β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),肌-肌醇(3),潘托洛皂苷元(4),凯提皂苷元(5),凯提5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),新蜘蛛抱蛋苷(7),(1β,3β,16β,22S)-cholest-5-ene-1,3,16,22-tetrol 1,16-di-(β-D-glucopyrano-side)(8),万年青1-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1-2)-β-D-木吡喃糖苷(9),槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)。结论:化合物2,3,7,9,10为首次从该植物中分离得到。

吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的观察吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用传统方法分离鉴定RCE-4。将0.3 m L Caski(4×107/m L)细胞悬液接种于裸鼠右侧后腿背部皮下,建立宫颈癌移植瘤模型,然后按瘤体积大小随机分为模型组、紫杉醇(10 mg/kg)和RCE-4(25、50、100 mg/kg)组,1次/d给药,连续4周,末次给药的次日处死裸鼠,称量裸鼠体质量、瘤质量,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。光镜下观察移植瘤组织形态学变化,TUNEL染色测定细胞凋亡率,免疫组化检测肿瘤组织中COX-2表达,荧光定量PCR测定移植瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,计算Bcl-2/Bax值,Western blot检测移植瘤组织中Survivin蛋白表达。结果 RCE-4(25、50、100 mg/kg)可明显降低宫颈癌裸鼠移植瘤的体积和瘤质量(P<0.05,P<0.01),上调Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和COX-2、Survivin蛋白表达及Bcl-2/Bax值(P<0.05,P<0.01)。结论RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的生长具有显著抑制作用,其机制可能与其上调Bax、Caspase-9、Caspase-3的表达和下调Survivin、Bcl-2、COX-2的表达有关。

吉祥草药材抗炎、止咳作用及谱效关系

研究了吉祥草药材不同提取部位抗炎、止咳活性。分别采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、小鼠氨水引咳法,观察吉祥草药材不同提取部位抗炎、止咳作用。结果表明,吉祥草药材食用酒精提取物3个剂量给药组都有非常显著的抗炎作用(P<0.05),高、低剂量组明显延长咳嗽时间(P<0.05),高剂量组明显减少咳嗽次数(P<0.05);水提物3个剂量组同样具有明显抗炎作用(P<0.05),水提高剂量组能明显增多咳嗽次数(P<0.05),减少咳嗽时间(P<0.05);石油醚提取物各剂量组均没有显著抗炎及止咳作用。可见,吉祥草药材食用酒精提取物及水提物具有较好的抗炎、止咳活性。

吉祥草挥发油化学成分的研究

对贵州产吉祥草的挥发性化学成分进行分析。采取同时蒸馏萃取法提取吉祥草挥发油,用GC-MS分析吉祥草挥发油的化学成分。通过计算机检索,共鉴定出58个化合物,其峰面积相对含量占挥发油总量的81.75%,其主要化合物为反式-石竹烯(7.01%)、芳樟醇L(6.97%)、松油酮(5.45%)等。

民族药吉祥草的本草考证

为临床合理选择用药,进一步开发研究吉祥草[Reineckia carnea(Andr.)Kunth]资源,以“吉祥草”“Reineckia carnea(Andr.)Kunth”等为关键词查阅相关典籍和文献,对吉祥草的名称、产地、性能、功效、方药进行考证。结果表明,吉祥草别名主要有小青胆、小叶万年青、玉带草;其药用部位主要为全草,较少用到根茎;性能主要为甘、平、凉;功效主要有清肺止咳、凉血止血、解毒利咽;主治咳嗽、哮喘、疳积、腰痛、骨折等病症。后续可从药理作用方面入手研究吉祥草临床应用,进一步研究其药效基础和作用机制等,促进吉祥草资源开发与利用。

吉祥草化学成分的研究

为研究吉祥草(Reineckia carnea)的化学成分,运用柱色谱的方法从中分离得到7个化合物,经波谱解析和理化性质分别鉴定为假海马齿醇(1),角鲨烯(2),4′,5,7-三羟基-6,8-二甲基黄酮(3),(R-)-8-甲基柚皮素(4),N-香豆酰酪胺(5),N-香豆酰章鱼胺(6)和胡萝卜苷(7)。以上化合物均为首次从该植物中分离得到。

吉祥草化学成分的分离与鉴定

目的对吉祥草的化学成分进行分离与鉴定。方法采用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、高效液相制备等方法分离纯化,所得化合物通过理化常数测定及光谱分析等手段鉴定其化学结构。结果分离得到8个化合物,分别为diosphenol(1)、N-benzoyl-L-phenylalaninol(2)、大豆素(daidzein,3)3、'-羟基大豆苷元(3'-hydroxydaidzein,4)、bis(2-ethylhexyl)phthalate(5)、邻苯二酸二正丁基酯(1,2-Benzenedicarboxylic acid,dibuty ester,6)、丁香脂素(syringaresinol,7)、刺五加酮(ci-wujiatong,8)。结论化合物1为新的天然产物2,-8为首次从该属植物中分离得到。

吉祥草甾体类化学成分研究

目的研究吉祥草甾体类化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20等色谱技术进行分离纯化,通过理化方法和波谱数据进行分析和结构鉴定。结果从吉祥草中分离鉴定了9个甾体类化合物,分别为薯蓣皂苷元(1)、奇梯皂苷元(2)、潘托落皂苷元(3)、β-豆甾醇(4)、β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、kitigenin 5-O-β-D-glucopyrannoside(6)、pentologenin 5-O-β-D-glucopyrannoside(7)、薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、25(S)-5β-1β-3β-diol(9)。结论化合物8和9为首次从该属植物中分离得到。

吉祥草根茎中一个甾体皂苷的提取与含量测定

采用醇提、溶剂萃取和色谱分离等手段从吉祥草根茎中分离提取得到一个已知化合物甾体皂苷RCE-4,该化合物具有良好的诱导肿瘤细胞凋亡的作用.该文建立了高效液相色谱技术测定RCE-4含量测定方法,色谱条件为:Venusil XBPC18(250mm×4.6mm.id.,5μm)色谱柱,乙腈-水(45∶55)为流动相,恒定流速为0.8mL/min,检测波长为203nm,柱温25℃.测得吉祥草根茎中RCE-4的含量为0.1229%.RCE-4在0.0325～1.3mg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.99997,平均回收率为100.05%,RSD(n=5)为1.74%.该方法简便准确,重现性好,可以作为吉祥草中RCE-4的含量测定方法,并为吉祥草药材质量标准建立奠定基础.

吉祥草的化学成分研究

目的：对吉祥草的化学成分进行研究。方法：利用萃取，硅胶、凝胶和反相硅胶柱色谱以及高效液相色谱法进行分离和纯化，采用谱学技术（1D和2D NMR谱，MS，IR等）进行结构鉴定。结果：从吉祥草中分离鉴定了6个化合物，分别是1α，3β-dihydroxy-5β-pregn-16-en-20-one 3-O-β-D-glucopyranoside（1），syringaresinol-β-D-gluco-side（2），sophoraflavoneB（3），stigmast-5，22-dien-3-O-β-D-glucopyranoside（4），胡萝卜苷（5），α-D-glucose（6）。结论：化合物1为新化合物，化合物2～6为首次从该植物中分离得到。

不同产地吉祥草药材HPLC-ELSD指纹图谱的研究

目的:利用HPLC-ELSD技术建立不同产地吉祥草药材的指纹图谱,为评价其质量品质提供理论依据。方法:采用Diamonsil(R)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速0.8 mL/min;柱温25℃;ELSD检测器:漂移管温度85℃,氮气压力350 kPa,增益值为6。结果:建立不同产地吉祥草药材的HPLC-ELSD的指纹图谱,共找到6个共有峰。结论:该方法具有良好的重复性和稳定性,为有效控制吉祥草药材的质量提供了依据。

吉祥草根茎化学成分研究

目的:研究吉祥草根茎中化学成分,寻找抗肿瘤活性物质.方法:运用反相常压柱色谱和制备高效液相对其化学成分进行分离,通过理化性质和波谱分析方法鉴定结构.结果:从吉祥草根茎的乙醇提取物中分离得到3个甾体化合物及2个黄酮,经鉴定其结构分别为nicotianoside B(1),胡萝卜苷(2),β-ecdysone(2β,3β,14α,20R,22R,25-hexahydroxy-5β-cholest-7-en-6-one)(3),槲皮素(4),芦丁(5).结论:化合物3为首次从该属植物中分离获得.

苗药观音草提取物的体外抗氧化活性研究

采用羟基自由基体系和超氧阴离子自由基体系对观音草提取物的抗氧化性能进行了研究。结果表明,观音草提取物对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有较强的清除作用,其清除率随观音草提取物浓度的增大而升高,说明观音草具有较强的抗氧化活性,极可能是一种天然抗氧化剂的新资源。

高效液相色谱法测定吉祥草根茎中芦丁的含量

目的:建立吉祥草根茎中芦丁的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱技术测定芦丁的含量,色谱条件为:Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水(28:72)为流动相,恒定流速为1.0 mL/min,检测波长为350 nm,柱温25℃.结果:吉祥草根茎中芦丁的含量为0.26%.芦丁在0.13～0.65 mg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为99.87%,RSD(n=5)为1.41%.结论:该方法简便准确,重现性好,可以作为吉祥草中芦丁的含量测定方法.