蒲公英、忍冬藤抗菌活性组分及配伍研究

为了探寻蒲公英和忍冬藤高效抗菌活性组分及其配伍活性,试验以蒲公英和忍冬藤为研究对象,通过70%乙醇提取、大孔树脂D101柱层析和抗菌活性跟踪相结合的方式优选各自的高效抗菌活性组分,并对这些组分进行总黄酮、有机酸和多酚含量分析和活性配伍研究。结果表明蒲公英和忍冬藤的高效抗菌活性组分分离工艺为:先用70%乙醇回流提取,浓缩后用大孔树脂D101柱层析,70%或50%乙醇洗脱部位即为它们的高效抗菌活性组分。这些组分对9种供试病原菌都具有较强的广谱抗菌性,蒲公英的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别约为1.95 mg/mL和15.63 mg/mL,忍冬藤的MIC和MBC分别约为1.95 mg/mL和31.25 mg/mL。且含量分析显示,蒲公英高效抗菌活性组分黄酮和多酚含量相对较高,忍冬藤高效抗菌活性组分多酚含量相对较高。配伍研究发现,当蒲公英高效抗菌活性部位与少量忍冬藤水洗脱部位(16∶1~4∶1)或其高效抗菌部位(16∶1~1∶1)配伍使用时,对部分供试菌的抗菌活性存在一定的相加作用。说明所得的蒲公英和忍冬藤高效抗菌活性组分提取分离工艺简单、易得,广谱抗菌作用强,合适的配伍使用可以实现更好的抗菌作用。

忍冬不同部位提取液抑菌活性及其对酸土脂环酸芽孢杆菌的抑菌特性

本研究探究了忍冬(Lonicera japonica Thunb.)不同部位提取液的生物活性物质含量及其对12株供试菌株的抑菌活性。首先,分别测定了忍冬叶、金银花和忍冬藤中的总酚、总黄酮和绿原酸含量,并分析了它们的提取液对12株菌株的抑菌效果。然后,进一步研究了金银花和忍冬叶提取液对酸土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、生长曲线、生物膜形成和细胞形态的影响。结果显示,忍冬叶和金银花中的总酚、总黄酮和绿原酸含量均显著高于忍冬藤(P<0.05)。此外,忍冬叶的总黄酮含量显著高于金银花(P<0.05)。三种提取液对A.acidoterrestris、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、单增李斯特氏菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和沙门氏杆菌均具有一定的抑菌效果,且忍冬叶和金银花提取液的抑菌效果优于忍冬藤。忍冬叶和金银花提取液对A.acidoterrestris的抑菌效果最显著,MIC值均为3.91 mg/mL,MBC值均为31.25 mg/mL。此外,忍冬叶和金银花提取液能有效抑制A.acidoterrestris生长和生物膜的形成,破坏其菌体形态,抑菌效果随提取液浓度的增加而增强。本研究为阐明忍冬抑制A.acidoterrestris的机制奠定了坚实基础,同时也为开发安全高效的新型食品抑菌剂提供了新思路。

王济华运用角药治疗类风湿关节炎经验

王济华教授认为,类风湿关节炎早期多因外感风、寒、湿三邪,三者之间相互促进、互相转化,风寒表邪入里日久或郁而化热;病程日久多虚实夹杂,肝肾亏虚、气血不足,同时兼有寒湿痹阻、痰瘀互结。故王教授治疗痹证早期以祛邪散寒为主,兼顾清热利湿、化痰散结,中晚期则偏于滋养气血、补益肝肾。王济华教授运用角药治疗痹证颇有心得,组方精妙、配伍严谨,常用角药川芎-延胡索-白芍行气活血、柔筋止痛;忍冬藤-络石藤-青风藤清热通络、祛风除湿;半夏-陈皮-竹茹燥湿化痰、理气和中;白术-薏苡仁-茯苓益气健脾、利湿消肿;桑寄生-续断-杜仲滋补肝肾、强筋壮骨;酸枣仁-合欢皮-首乌藤宁心安神、解郁除烦。王教授临证时,追求阴阳调和平衡、气机升降有度,临床用药有药简力专、增效减负之功。

喷施铜和硼肥对忍冬生理生化及其茎藤指标成分的影响

以4年生忍冬为试验材料,采用盆栽和叶面喷施方式,设置不同质量浓度的铜肥(10,30,50 mg/L Cu^(2+),分别表示为Cu_(10)、Cu_(30)、Cu_(50))和硼肥(20,40,60 mg/L B_(4)O^(2-)_(7),分别表示为B_(20)、B_(40)、B_(60))及其配施组合处理,测定忍冬叶片的光合参数以及茎藤的营养物质、药效成分含量、矿质离子含量,探究施铜和硼肥对忍冬光合生理、营养物质、矿质离子及其茎藤品质的影响,为优化忍冬栽培技术和提高其药材品质提供理论参考。结果表明:(1)喷施一定质量浓度的铜硼肥有助于提高忍冬叶片的净光合速率,尤以B_(40)Cu_(50)配施处理最佳;适宜质量浓度的铜硼肥有利于增加总叶绿素含量,高质量浓度的铜硼肥则起抑制作用。(2)配施铜硼肥对忍冬藤中营养物质及药效成分含量的影响比单施铜、硼肥更显著,其中B_(40)Cu_(50)处理可显著提高忍冬藤中可溶性蛋白、淀粉、还原糖含量,B_(20)Cu_(10)处理可显著提高可溶性糖含量;有利于忍冬藤中绿原酸和马钱苷积累的最佳配施处理分别是B_(60)Cu_(50)和B_(20)Cu_(30)。(3)喷施铜硼肥对忍冬藤矿质离子的含量也具有显著的影响,单施与配施铜硼肥处理忍冬藤矿质离子含量均有增加,且配施铜硼肥比单施铜硼肥增加效果显著,尤以B_(20)Cu_(10)、B_(20)Cu_(30)、B_(20)Cu_(50)处理最佳。综合考虑,B_(40)Cu_(50)配施处理可有效增加忍冬藤的营养与药用指标成分含量,是忍冬叶面喷施铜和硼肥的最佳比例。

高效液相色谱法测定忍冬藤和叶中8种活性成分

建立了多波长分析忍冬藤和叶中化学成分含量的高效液相色谱分析方法,色谱柱为Aglient Zorbax80A,Extend-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为0.3%甲酸-乙腈,梯度洗脱;流速为1.5mL/min;检测波长为240、330、360nm;柱温38℃。各指标成分的检出限均低于0.29mg/L;精密度RSD均低于2.29%;标准加入的回收率为91.2%～103.6%。应用新建立的方法测定了7个不同产地忍冬藤和叶中8种活性成分的含量。该方法简单、快速、准确,可用于忍冬藤和叶的质量控制。

忍冬不同药用部位挥发油成分分析

目的:对忍冬不同药用部位挥发油成分进行分析比较。方法:GC-MS联用技术。结果:从金银花、忍冬藤中共分离鉴定了36种成分。其中从金银花中鉴定出28种,从忍冬藤中鉴定出26种,两者共有成分18种,分别占各自挥发油总量的85.23％、83.42％,相对含量最高的成分均为棕榈酸和亚油酸。结论:金银花、忍冬藤中挥发油成分具有高度相似性。

忍冬藤提取物对兔离体肠平滑肌的舒张作用及其机制

【目的】胃肠平滑肌过度收缩可引起腹痛腹泻等临床常见的疾病。目前,临床上对治疗胃肠平滑肌过度收缩的药物主要以西药为主,如钙离子通道阻断药硝苯地平和抗胆碱药阿托品等,硝苯地平长期使用可引起负性肌力和负性传导的现象,而阿托品由于其不良反应较大,在临床应用中受到一定的限制。因此,开发具有有效防治胃肠平滑肌痉挛、低毒、低残留的天然中草药意义重大。试验以兔离体小肠平滑肌为研究对象,利用丰富的忍冬藤资源,研究忍冬藤提取物对兔离体小肠平滑肌收缩的影响,并探讨其作用机制。【方法】采用兔离体小肠平滑肌试验,应用BL-420E生物机能实验系统,观察忍冬藤提取物对正常状态下兔离体小肠平滑肌自发性收缩的影响;进而使用工具药乙酰胆碱、组胺和氯化钡致兔小肠痉挛性收缩后,观察忍冬藤提取物对其痉挛性收缩的影响;为研究忍冬藤提取物抑制兔离体小肠平滑肌收缩的作用机制,应用IP_3受体阻断剂肝素(HP)、肌浆网ryanodine受体阻断剂钌红(RR)和一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME),探明忍冬藤提取物对兔离体小肠平滑肌作用的机制。【结果】忍冬藤提取物可浓度依赖性抑制兔离体小肠平滑肌自发性收缩,药物浓度在7.5 g·L^(-1)时可显著抑制兔离体小肠平滑肌收缩的频率(P<0.05),药物浓度在5g·L^(-1)时可极显著抑制兔离体小肠平滑肌收缩的振幅(P<0.05);工具药乙酰胆碱、组胺和氯化钡可显著诱导兔小肠平滑肌收缩的振幅,忍冬藤提取物可显著抑制由乙酰胆碱、组胺和氯化钡诱导的兔离体小肠平滑肌收缩的频率(P<0.05),可极显著抑制兔离体小肠平滑肌收缩的振幅(P<0.01)。IP_3受体阻断剂肝素能增强忍冬藤提取物舒张兔离体小肠平滑肌收缩的作用(P<0.01),而肌浆网ryanodine受体阻断剂钌红对忍冬藤提取物舒张兔小肠平滑肌的作用无明显影响(P>0.05)。左旋硝基精氨酸甲酯能够部分阻断忍冬藤提取物舒张兔离体小肠平滑肌收缩的作用(P<0.01)。【结论】忍冬藤提取物可显著抑制兔离体小肠平滑肌收缩的频率和振幅,其机制可能与增加一氧化氮浓度,抑制IP_3受体介导的内钙释放有关,但对肌浆网ryanodine受体途径引起的内钙释放无关。

金银花、山银花药理学研究现状

忍冬属植物在我国资源丰富,且多数具有药用价值,而金银花、山银花作为主要的药用植物,具有悠久的历史。随着现代科学技术的发展,对金银花和山银的研究日趋深入和广泛。文章旨在对金银花、忍冬藤、忍冬叶及山银花的药理作用的研究现状进行总结,为今后进一步开展对忍冬属其它药用植物的研究打下基础。

忍冬藤总黄酮超声辅助提取工艺及其体外抗氧化活性研究

本研究采用中心复合实验优化了超声辅助提取忍冬藤总黄酮的工艺;以1,1-二苯基-二苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2'-连氮基-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS+·)清除能力,Fe2+螯合力和铁离子还原抗氧化力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)为指标,研究了忍冬藤总黄酮的体外抗氧化活性。结果表明:超声辅助提取忍冬藤总黄酮的最佳提取工艺为:乙醇浓度70%、液固比31∶1(m L/g)、超声功率210 W,超声时间8 min,按此工艺提取忍冬藤总黄酮,得率达7.74%±0.10%。体外抗氧化活性的研究显示忍冬藤总黄酮清除DPPH自由基的IC50为48.1μg/m L、清除ABTS+自由基的IC50为66.1μg/m L、Fe2+螯合力的EC50为83.6μg/m L,在6.25~200μg/m L的浓度范围内,FRAP值与总黄酮的浓度呈线性关系:Y=0.0019x+0.1527(R2=0.9964)。此研究为忍冬藤总黄酮的进一步开发和利用提供了理论依据。

复方忍冬藤提取物促进骨折愈合及抗炎作用研究

试验旨在探讨复方忍冬藤提取物对骨折愈合和抗炎的作用。采用牙科电钻制备兔右侧桡骨骨折模型,通过测定血清中钙、磷和碱性磷酸酶的含量,探明其对骨折家兔血清生化指标的影响。利用LPS诱导的RAW 264.7细胞建立炎症模型,采用ELISA法测定复方忍冬藤提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放的炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和NO含量的变化。结果显示,利用牙科电钻可成功制备兔骨折模型,复方忍冬藤提取物可增加骨折家兔血清中钙和碱性磷酸酶的水平,降低血清中磷含量。与LPS组相比,50~200μg/mL复方忍冬藤提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的炎症因子TNF-α、IL-1β和NO的含量具有显著的抑制作用(P<0.05),对IL-6的含量无显著影响(P>0.05)。综上所述,复方忍冬藤提取物对骨折愈合有促进作用,并具有较好的抗炎效果。

HPLC法测定忍冬藤中当药苷和马钱苷的含量

目的:建立忍冬藤中当药苷、马钱苷的高效液相色谱测定方法。方法:采用 C_(18)色谱柱(5μm,4.6mm×250mm,流动相为乙腈-水(15:85),检测波长为240 nm,流速0.5 mL·min^(-1)。结果:当药苷和马钱苷的线性范围分别为0～8.1μg和0～10.4μg,相关系数均为0.9999;平均加样回收率分别为99.7%和98.8%,RSD 分别为1.2%和2.0%(n=6)。结论:本法简便、准确,可作为忍冬藤药材的质量控制方法。

高效液相色谱法同时测定忍冬藤中7个活性成分的含量

采用HPLC测定不同市售地、不同直径的忍冬藤药材中各活性成分的质量分数（新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、獐牙菜苷、马钱苷、3,5-二咖啡酰喹尼酸、4,5-二咖啡酰喹尼酸）。色谱柱为Shiseido C18（4.6 mm×250 mm×5μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸,并进行梯度洗脱,体积流量为1 m L/min,柱温为35℃,检测波长为238,326,350 nm。结果显示,上述成分的进样质量与峰面积之间线性关系良好（r〉0.999 5）,精密度RSD〈4.3%,重复性RSD〈4.1%,平均加样回收率在96.8%~104.1%。本方法简单、准确,适用于忍冬藤的质量控制。

一测多评法用于忍冬藤多成分含量测定的适用性研究

目的建立一测多评法同时测定忍冬藤中绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、马钱苷6种成分含量的方法,并验证该法在忍冬藤质量控制中应用的可行性与适用性。方法以绿原酸为内参物,采用Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸,梯度洗脱,流速为1 m L/min,绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C检测波长为327 nm,马钱苷检测波长为236 nm,柱温35℃。结果建立了忍冬藤中绿原酸与咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、马钱苷的相对校正因子;一测多评法的计算值与外标法实测值无明显差异。结论一测多评的质量控制模式可用于忍冬藤中6种不同成分的多指标同步质量评价。

忍冬藤中马钱素和当药苷提取分离及结构鉴定

目的对忍冬藤的化学成分进行研究。方法采用大孔吸附树脂法、硅胶柱色谱进行成分提取、分离,运用MS,1H-NMR,13C-NMR等波谱数据确定其结构。结果从忍冬藤中分离得到2个环烯醚萜苷化合物,分别是马钱素(I)和当药苷(II)。结论化合物I、II均为首次从该植物的茎枝中发现。

RP-HPLC法同时测定忍冬藤中绿原酸、马钱苷、当药苷含量的研究

采用RP-HPLC法建立了忍冬藤中绿原酸、马钱苷、当药苷三种成分的含量测定方法。色谱条件为：Aglient TC-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱;流动相：A为乙腈,B为0.4%磷酸溶液,进行梯度洗脱,流速为1.0 m L/min;检测波长为240 nm,柱温25℃。在该色谱条件下,所测定三种成分均达到基线分离,且各成分在线性范围内线性关系良好,精密度、重现性、稳定性均良好,回收率变化范围为98.65%~99.07%。该方法准确、简便、可行,可以用于忍冬藤的质量控制。

多因素正交试验法优化忍冬藤提取工艺研究

目的通过正交试验优选确定忍冬藤中有效成分绿原酸和咖啡酸水煎提取工艺条件。方法以加水量、提取次数和提取时间为考察因素,每个因数分别选取三个水平进行试验设计,以高效液相色谱测定绿原酸、咖啡酸提取含量为考察指标进行L9(34)正交试验。以直观分析法和方差分析法分析研究水提忍冬藤中绿原酸、咖啡酸的影响因素,确定最佳提取工艺。结果按提取忍冬藤中绿原酸、咖啡酸含量的影响因素大小顺序,依次为提取液用量、提取次数和提取时间。最佳提取工艺为A3B2C3组合,即15倍水煎煮3次,每次时间分别为30 min、60 min和30 min。结论正交试验优选新工艺条件稳定,快速简便,重现性较好,对忍冬藤中绿原酸和咖啡酸提取含量可提高近15%,为生产工艺改进提供指导。

分光光度法测定6种忍冬藤中绿原酸的含量

目的以绿原酸的含量为指标,测定评价川渝所产忍冬藤的质量。方法采用分光光度法测定。结果测定了川渝6种忍冬藤中绿原酸的含量。结论该方法简便、准确、重现性好。其结果可对川渝产忍冬藤的合理用药、质量控制及进一步开发提供参考。

配伍应用海风藤、络石藤、忍冬藤治疗顽固性过敏性紫癜经验

过敏性紫癜是多种因素引起的系统性血管炎病变,主要累及皮肤、胃肠道、关节和肾脏等多器官。丁樱教授在过敏性紫癜的治疗上善用藤类药物,取其疏风通络、活血养血之功效,配伍使用海风藤、络石藤、忍冬藤三药,临床上取得了显著疗效。

风湿通痹胶囊提取工艺的研究

目的研究复方风湿通痹胶囊最佳提取工艺。方法采用正交试验法进行优选,高效液相色谱法测定绿原酸的含量、薄层扫描法测定青藤碱的含量。结果金银花最佳提取工艺为加水6倍量,提取3次,每次0.5h;青风藤最佳提取工艺为70%乙醇7倍量,提取2次,每次1.5h。结论所选提取工艺各有效成分提取率高。

乌梅、金银花、忍冬藤对嗜麦芽窄食单胞菌的抑菌作用

目的探讨乌梅、金银花、忍冬藤体外抑制嗜麦芽窄食假单胞菌的作用。方法选用纸片扩散法筛选对环丙沙星等12种抗菌药物全耐药的嗜麦芽窄食假单胞菌菌株;选用MH琼脂稀释法测定乌梅、金银花、忍冬藤对嗜麦芽窄食假单胞菌的抗菌效果,比较3种中药的最低抑菌浓度(MIC)、抑制50%受试菌所需MIC(MIC 50)、抑制90%受试菌所需MIC(MIC 90)。结果本研究共筛选出对环丙沙星等12种抗菌药物全部耐药的嗜麦芽窄食假单胞菌菌株30株;乌梅、金银花、忍冬藤对耐药嗜麦芽窄食假单胞菌均有一定的抑菌作用,其中乌梅抑菌作用较强。结论乌梅、金银花、忍冬藤对嗜麦芽窄食假单胞菌均有不同程度的抑菌作用,其中乌梅的抑菌作用最强,提示中药在耐药菌治疗的研究价值值得进一步研究。