腺相关病毒主要调控蛋白Rep78的表达及其与HBV-X基因启动子的体外结合

目的对腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)Rep78蛋白对乙肝病毒X启动子(HBV-X promoter)的可能作用进行初步研究。方法利用pMAL-Rep78(含有Rep78全长基因的表达质粒)在大肠杆菌中表达并纯化得到带有AAVRep78蛋白的MBP-rep78融合蛋白;通过SDS-电泳及免疫印迹(Western blot)鉴定蛋白表达。合成地高辛标记的X启动子3段探针;以非放射性凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测Rep78与HBV-X启动子的结合。结果得到纯化的MBP-rep78融合蛋白;EMSA结果显示Rep78蛋白在体外能够与HBV-X启动子DNA结合,并有剂量依赖关系。结论AAVRep78可以与HBV-X启动子结合。

腺相关病毒Rep78蛋白抑制乙型肝炎病毒复制的体外研究

目的研究腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)Rep78蛋白对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用及机制。方法将土拨鼠肝炎病毒(WHV)全基因组DNA从质粒中酶切回收,线状DNA重新连接呈环状。用脂质体Fugene6体外转染至HepG2细胞,同时共同转染含有Rep78的质粒AAVdl52-91。5d后收获细胞DNA,Southernblot检测WHVDNA复制。以含有HBV全长的质粒为模板,PCR法分别扩增出HBV-S、C和X基因全长。以凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测Rep78与HBV-S、C和X的结合。结果Southernblot结果表明,AAV-Rep78可以明显抑制WHV病毒在HepG2细胞中的复制,并呈剂量依赖关系。EMSA结果显示,Rep78蛋白在体外能够与HBV-S、C和X的DNA结合,其中与HBV-C的结合最强而且有剂量依赖关系。此外,这种Rep78蛋白与HBV-CDNA结合可以被特异性的Rep78抗体阻滞,形成超结合带。结论AAV-Rep78可以抑制HBVDNA的复制,其机制可能在于Rep78蛋白结合并抑制了HBV-C基因。

腺相关病毒Rep78/68蛋白

腺相关病毒(AAV)编码的非结构蛋白Rep78/68具有抑制病毒和肿瘤转化的作用,并且对宿主细胞的增殖及代谢产生广泛地影响。本文将对此蛋白的最新研究进展进行综述。

腺相关病毒Rep78/68蛋白功能的研究进展

Rep78/68是腺相关病毒(AAV)基因组编码的具有多种调控功能的非结构蛋白。主要参与了AAV DNA定点整合到人类19号染色体,抑制病毒的生物活性,如腺病毒、类猿病毒SV40等,调节AAV DNA的复制和转录等。重点阐述了定点整合的作用机制,Rep78/AAV ITR/ICP8复合物的形成机制以及Rep68蛋白的寡聚化特性,Rep78蛋白对p53核输出的限制,AAV Rep78蛋白与人乳头瘤病毒(HPV)E1蛋白相互作用从而促使Rep78和ITR DNA的结合,Rep78对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制。这些作用的详细机制仍需完善和充实,对Rep78/68蛋白的相关作用机制的深入研究有助于rAAV基因药物的研发。