P58IPK基因在视网膜Müller细胞内质网应激PERK通道中的作用

目的：探讨P58^（IPK）在高糖诱导视网膜Müller细胞内质网应激（ERS）PERK通道中的作用。方法：体外培养Müller细胞株（rMC-1）,建立高糖模型,构建/P58^（IPK）基因敲除P58^（IPK）基因过表达质粒并转染到Müller细胞中,采用RT-PCR检测上游分子PERK的mRNA的表达、Western Blot检测Müller细胞p-PERK蛋白的表达,分析存在的差异,初步探讨P58^（IPK）在高糖诱导视网膜Müller细胞内质网应激PERK通道中的作用。结果：（1）荧光定量PCR检测结果显示：（1）未转入质粒组、转染P58^（IPK）基因敲除质粒组、转染P58^（IPK）基因过表达质粒组三组的细胞在5和25mmol/L糖浓度下培养时,各组内PERK mRNA的相对表达量相比,差异没有统计学差异（P〉0.05）。（2）未转入质粒组、转染P58^（IPK）基因敲除质粒组、转染P58^（IPK）基因过表达质粒组三组的细胞在5和25mmol/L糖浓度下培养时,各组之间PERK mRNA的相对表达量,差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）Western Blot检测结果显示：（1）未转入质粒组、转染P58^（IPK）基因敲除质粒组、转染P58^（IPK）基因过表达质粒组三组的细胞在5和25mmol/L糖浓度下培养时,各组内p-PERK蛋白的表达量相比,差异有统计学差异（P〈0.05）。（2）未转入质粒组、转染P58^（IPK）基因敲除质粒组、转染P58^（IPK）基因过表达质粒组三组的细胞在5和25mmol/L糖浓度下培养时,各组之间p-PERK蛋白的表达量,差异有统计学差异（P〈0.05）。结论：高浓度葡萄糖的刺激下,视网膜Müller细胞会出现内质网应激反应,P58^（IPK）可靶向结合PERK抑制通道激活,减少蛋白质的翻译和合成,减轻内质网的蛋白负荷,减少ERS对细胞的损伤。

促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用。方法传代培养大鼠视网膜Müller细胞,分为N组(正常对照)、C50、C100、C150、C200、C300组(氯化钴浓度50,100,150,200,300μmol/L),MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响,确定制作低氧损伤的氯化钴浓度。然后再分组为N组(正常对照),C组(200μmol/L氯化钴),E1C组(1×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),E2C组(2×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),E4C组(4×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),MTT比色法比较五组视网膜Müller细胞活力的改变。Western blot检测各组细胞谷氨酰胺合成酶蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时,细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始,细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。E1C、E2C、E4C组细胞活力均高于C组,E4C组高于E2C组和E1C组,C组低于N组。Western blot检测谷氨酰胺合成酶表达结果显示,C组低于N组,EPO干预各组蛋白表达均高于C组,并随EPO浓度增高表达增高,但均低于N组。结论 EPO对视网膜Müller细胞低氧损伤有保护作用。