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维甲酸诱导基因Ⅰ信号通路在西尼罗病毒感染中的作用研究 被引量:2
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作者 秦成峰 赵慧 +5 位作者 张强 姜涛 邓永强 陈水平 于曼 秦鄂德 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期719-721,共3页
目的探讨维甲酸诱导基因I(RIG-I)信号通路在西尼罗病毒感染过程中的作用。方法用西尼罗病毒Chin-01株感染A549细胞,分别通过RT-PCR和Western blotting检测病毒感染对RIG-I及干扰素β(IFN-β)启动子刺激因子-1(IPS-1)表达的影响,通过含CA... 目的探讨维甲酸诱导基因I(RIG-I)信号通路在西尼罗病毒感染过程中的作用。方法用西尼罗病毒Chin-01株感染A549细胞,分别通过RT-PCR和Western blotting检测病毒感染对RIG-I及干扰素β(IFN-β)启动子刺激因子-1(IPS-1)表达的影响,通过含CAT报告基因的重组质粒观察病毒感染对干扰素调控因子-3(IRF-3)和IFN-β启动子活性的影响,并用ELISA法检测IFN-β的表达水平,明确西尼罗病毒感染对RIG-I信号通路下游信号分子的激活作用。通过瞬时转染法在A549细胞中过表达RIG-I,观察其对西尼罗病毒感染的影响。结果西尼罗病毒感染能够上调RIG-I的表达,激活IPS-1、IRF-3等下游信号分子,诱导I型IFN的产生。同时,RIG-I的过表达能够抑制西尼罗病毒的增殖。结论RIG-I信号通路介导的固有免疫反应可能在西尼罗病毒感染过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 西尼罗病毒 干扰素类 信号通路 维甲酸诱导基因I
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RIG-Ⅰ与干扰素信号通路的关系 被引量:1
2
作者 孙岳平 肖家祁 +1 位作者 邹嫣琼 王铸钢 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1210-1214,共5页
目的研究干扰素(IFNs)对维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)的调控作用,同时探讨RIG-Ⅰ对IFNs生物学效应的介导作用。方法Northern杂交和半定量RT-PCR检测小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、在IFNs作用前后RIG-Ⅰ基因的表达。MTT比色法和细胞病变抑制... 目的研究干扰素(IFNs)对维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)的调控作用,同时探讨RIG-Ⅰ对IFNs生物学效应的介导作用。方法Northern杂交和半定量RT-PCR检测小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、在IFNs作用前后RIG-Ⅰ基因的表达。MTT比色法和细胞病变抑制法比较野生型和RIG-基因剔除(RIG-Ⅰ-/-)小鼠的MEFs在IFNs作用前后的生长情况和抗病毒活性。结果IFN-γ、IFN-β均能上调小鼠MEFs中RIG-Ⅰ的表达;100 U/mL IFN-γ处理后,野生型小鼠MEFs的生长抑制较RIG-Ⅰ-/-小鼠的MEFs明显;RIG-Ⅰ缺失后,IFN-β对细胞病毒感染的保护作用较野生型明显减弱。结论RIG-Ⅰ是一新发现的介导干扰素细胞效应的基因,它可能通过调节细胞因子的产生参与干扰素介导的炎症反应。 展开更多
关键词 维甲酸诱导型基因 干扰素 炎症反应
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维甲酸诱导基因Ⅰ研究进展 被引量:2
3
作者 崔映宇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第4期380-386,共7页
维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ),能在多种细胞中被不同的刺激诱导表达,是RNA病毒致天然免疫的重要调控因子.概述其发现、诱导、结构、功能、机理及同源蛋白等的研究现状,并展望相关动向.
关键词 维甲酸诱导基因 RNA解旋酶 诱导表达 天然免疫 自调控
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小鼠Rig-Ⅰ蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备
4
作者 陈磊 李成洋 奚绪光 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第8期6-12,共7页
【目的】进一步研究小鼠维甲酸诱导基因Ⅰ(Rig-Ⅰ)蛋白的细胞信号传导、结构与功能。【方法】利用已经构建好的逆转录病毒载体MigRI-Rig-Ⅰ,用PCR方法扩增出小鼠Rig-Ⅰ基因氨基端100 bp长度的片断(Rig-Ⅰ-N),将此片段定向克隆到原核表... 【目的】进一步研究小鼠维甲酸诱导基因Ⅰ(Rig-Ⅰ)蛋白的细胞信号传导、结构与功能。【方法】利用已经构建好的逆转录病毒载体MigRI-Rig-Ⅰ,用PCR方法扩增出小鼠Rig-Ⅰ基因氨基端100 bp长度的片断(Rig-Ⅰ-N),将此片段定向克隆到原核表达载体pGEX-4T2中,构建pGEX-4T2-Rig-Ⅰ-N,再将Rig-Ⅰ基因剩余部分克隆到已构建有Rig-Ⅰ-N部分片段的pGEX-4T2-Rig-Ⅰ-N中,构建融合表达载体pGEX-4T2-Rig-Ⅰ,将其转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,对表达产物GST-Rig-Ⅰ融合蛋白进行纯化,制备抗体,并对抗体效价进行ELISA检测及抗体特异性的Western blot分析。【结果】重组蛋白GST-Rig-Ⅰ能在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白GST-Rig-Ⅰ纯化和洗脱后分子质量为130 ku,纯度>90%,制备的抗体效价达到1∶625 000,并且能够识别在原核表达系统以及真核细胞内表达的小鼠Rig-Ⅰ蛋白。【结论】建立的表达系统能够表达重组蛋白GST-Rig-Ⅰ,制备的抗体具有良好的免疫特异性。 展开更多
关键词 小鼠 维甲酸诱导基因(Rig-) 原核表达 抗体制备
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RIG-I基因剔除小鼠表型的初步分析 被引量:2
5
作者 孙岳平 张丽君 +6 位作者 张梅 金月娥 柳子星 张洪信 陆顺元 孔辉 王铸钢 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期836-840,共5页
目的通过对视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-I基因)剔除小鼠表型的分析,在整体动物水平揭示RIG-Ⅰ的生物学功能。方法Northern blotting和半定量RT-PCR检测小鼠组织中RIG-I基因的表达;对小鼠的表型分析包括体质量的测量、外周血细胞分类计数、代... 目的通过对视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-I基因)剔除小鼠表型的分析,在整体动物水平揭示RIG-Ⅰ的生物学功能。方法Northern blotting和半定量RT-PCR检测小鼠组织中RIG-I基因的表达;对小鼠的表型分析包括体质量的测量、外周血细胞分类计数、代谢指标测定及病理组织学检查。结果RIG-Ⅰ在小鼠多种组织中广泛表达,但表达水平存在一定差异。RIG-Ⅰ基因剔除后,小鼠未见明显发育异常;无明显预期的粒系分化受阻表现;但RIG-Ⅰ基因剔除小鼠外周血相中的粒/淋比明显倒置,且对条件性致病菌易感。结论RIG-Ⅰ在小鼠抗细菌免疫过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 视黄酸诱导基因 细菌感染 基因剔除小鼠
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维甲酸诱导基因I在DSS诱导的慢性肠炎小鼠结肠组织中的表达 被引量:2
6
作者 吴玉丹 戴发亮 +4 位作者 董仕桢 郭腾飞 高磊 常永超 高强 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2018年第5期575-579,共5页
目的:探讨维甲酸诱导基因I(RIG-I)在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性结肠炎中的表达及意义。方法:选择健康清洁级8~10周龄C57BL/6雌性小鼠,随机分为对照组(n=8,正常饮用无菌蒸馏水)和慢性炎症组(n=8),先给予10 g/L DSS溶液自由饮用7 d... 目的:探讨维甲酸诱导基因I(RIG-I)在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性结肠炎中的表达及意义。方法:选择健康清洁级8~10周龄C57BL/6雌性小鼠,随机分为对照组(n=8,正常饮用无菌蒸馏水)和慢性炎症组(n=8),先给予10 g/L DSS溶液自由饮用7 d,然后正常饮用无菌蒸馏水14 d作为1个周期,循环3个周期后建立小鼠慢性结肠炎模型,于第70天用颈椎脱臼法处死小鼠并取结肠组织标本。肠道炎症程度通过测定结肠长度、HE染色和疾病活动指数评分等方法评估。采用荧光定量PCR技术检测小鼠结肠组织中炎性因子(IL-6、IL-8和TNF-α),IRE1α和RIG-I mRNA表达水平,免疫组化法和蛋白印迹法检测小鼠结肠组织中RIG-I、磷酸化(p)-IRE1α蛋白的表达。结果:对照组小鼠无肠炎表现,而慢性炎症组小鼠结肠出现炎症表现。与对照组相比,慢性炎症组中IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达量增加,IRE1α和RIG-I mRNA表达量降低(P<0.01)。免疫组化结果显示RIG-I蛋白主要表达于小鼠结肠上皮细胞胞质及间质细胞胞质中,p-IRE1α主要在结肠上皮细胞刷状缘、浆细胞等细胞的胞质中表达,蛋白定量结果显示慢性炎症组RIG-I、p-IRE1α蛋白低于对照组(P均<0.001)。结论:RIG-I可能通过减低IRE1-RIDD-RIG-I在小鼠结肠炎的发生和发展中起重要作用。 展开更多
关键词 结肠炎 维甲酸诱导基因-I 肌醇需求酶1α 小鼠
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慢性丙型肝炎患者外周血RIG-Ⅰ基因表达与丙型肝炎病毒载量及Ⅰ型干扰素基因的相关性 被引量:1
7
作者 王方平 张平安 牛志立 《中华临床感染病杂志》 2016年第1期19-23,共5页
目的:研究慢性丙型肝炎( CHC)患者外周血单个核细胞( PBMC)中维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)mRNA表达量及其与丙型肝炎病毒(HCV)载量及Ⅰ型干扰素(IFN)基因之间的关系。方法选择2014年7月至2015年7月武汉大学人民医院收治初入院... 目的:研究慢性丙型肝炎( CHC)患者外周血单个核细胞( PBMC)中维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)mRNA表达量及其与丙型肝炎病毒(HCV)载量及Ⅰ型干扰素(IFN)基因之间的关系。方法选择2014年7月至2015年7月武汉大学人民医院收治初入院未治疗的101例CHC患者,并选择同期的健康体检者69名作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测RIG-Ⅰ、IFNα、IFNβmRNA表达和HCV载量,并采用Pearson法分析RIG-ⅠmRNA表达量与IFNα和IFNβmRNA表达量以及HCV载量的相关性。结果设健康对照组mRNA表达量为1,CHC组RIG-Ⅰ、IFNα和IFNβ基因mRNA表达量分别为0.082、0.022和0.156,两组比较差异具有统计学意义( t=7.83、3.65和2.13,P值均<0.05);HCV RNA载量<(1&#215;106) IU/mL 组RIG-Ⅰ基因表达量为HCV RNA载量≥(1&#215;106) IU/mL组的1.79倍,差异具有统计学意义(t=2.60, P<0.05);CHC患者RIG-ⅠmRNA表达量与IFNα、IFNβmRNA表达量呈正相关(r=0.247和0.489, P<0.05),与HCV载量无相关性(r=0.187, P>0.05)。结论与健康人群相比,CHC患者RIG-ⅠmRNA表达量降低,且与IFNα和IFNβmRNA表达量呈正相关。 展开更多
关键词 肝炎 丙型 慢性 维甲酸诱导基因 干扰素 聚合酶链反应
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呼吸道合胞病毒激活RIG-Ⅰ/TLR3信号通路及对SOCS1/3 mRNA表达的影响
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作者 杨坤 汪霞 +3 位作者 魏聪 黄媛 付学东 赵东赤 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第5期571-575,共5页
目的:探讨视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)和Toll样受体3(TLR3)两受体在呼吸道合胞病毒(RSV)感染A549细胞后诱导的炎症和抗病毒反应中的作用。方法:应用Real-timePCR方法检测RSV感染A549细胞后0,2,4,8,24hRIG-Ⅰ,TLR3及细胞因子信号转导抑制因... 目的:探讨视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)和Toll样受体3(TLR3)两受体在呼吸道合胞病毒(RSV)感染A549细胞后诱导的炎症和抗病毒反应中的作用。方法:应用Real-timePCR方法检测RSV感染A549细胞后0,2,4,8,24hRIG-Ⅰ,TLR3及细胞因子信号转导抑制因子1/3(SOCS1/3)的mRNA的表达水平;用特异性的si-RNA分别抑制RIG-Ⅰ和TLR3两个受体基因的表达,应用Real-timePCR方法检测RSV感染抑制后的A549细胞不同时间点SOCS1/3的mRNA的表达水平。结果:RSV上调RIG-Ⅰ/TLR3两受体及SOCS1/3mRNA的表达(P<0.05);抑制RIG-Ⅰ及TLR3后,SOCS1/3mRNA的表达与对照组相比无差异性(P>0.05)。结论:RSV感染A549细胞后上调负性调节因子SOCS1/3的表达,其表达不依赖RIG-Ⅰ及TLR3受体途径,可能由病毒复制直接诱导。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 A549细胞 视黄酸诱导基因I TOLL样受体3 细胞因子信号转导抑制因子
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酵母双杂交技术筛选与RIG-Ⅰ相互作用蛋白
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作者 郑子瑞 侯宁波 +4 位作者 何湘 赵帆 魏从文 戴玲 钟辉 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2009年第1期10-13,共4页
目的:筛选人脾细胞cDNA文库中与维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)所编码蛋白具有相互作用的蛋白基因。方法:通过聚合酶链反应(PCR),以HEK293T细胞RNA为模板扩增RIG-Ⅰ基因的2CARD结构域部分,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒pGBKT7-R... 目的:筛选人脾细胞cDNA文库中与维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)所编码蛋白具有相互作用的蛋白基因。方法:通过聚合酶链反应(PCR),以HEK293T细胞RNA为模板扩增RIG-Ⅰ基因的2CARD结构域部分,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒pGBKT7-RIG-Ⅰ2CARD,转化到酵母细胞AH109感受态中,得到阳性克隆AH109[RIG-Ⅰ2CARD]。然后将人脾细胞cDNA文库转化进AH109[RIG-Ⅰ2CARD],在含有X-α-半乳糖(X-α-Ga1)四缺营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5α大肠杆菌并经氨苄青霉素抗性筛选,挑取单克隆菌落抽提质粒,并进行测序,再进行生物信息学分析。结果:成功构建酵母诱饵蛋白表达质粒pG-BKT7-RIG-Ⅰ2CARD,并能在酵母中表达。筛选出阳性菌落59个,经生物信息学分析,最后从脾细胞cDNA文库中筛选出12个与RIG-Ⅰ2CARD有相互作用的蛋白基因。结论:成功克隆出RIG-Ⅰ2CARD基因,并从脾细胞cDNA文库中筛选出12种能与RIG-Ⅰ2CARD具有相互作用的蛋白基因。 展开更多
关键词 维甲酸诱导型基因 酵母菌 人类脾脏cDNA文库 双杂交技术 蛋白质相互作用
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敲除RIG-I基因的PK-15细胞系的建立及RIG-I对猪圆环病毒2型感染的作用 被引量:4
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作者 许曼 黄立平 +8 位作者 邵玉乐 夏德利 曾为俊 王辉 鲁国涛 刘长明 陈洪岩 王金泉 孟庆文 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期14-21,共8页
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除RIG-I基因的PK-15细胞,初步探究视黄酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene-I,RIG-I)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染的作用。本研究根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计了... 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除RIG-I基因的PK-15细胞,初步探究视黄酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene-I,RIG-I)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染的作用。本研究根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计了针对猪RIG-I基因的2条sgRNA,构建重组载体pUC19-RIG-I-sgRNA1和pUC19-RIG-I-sgRNA2,转染PK-15细胞,通过流式细胞仪分选单细胞、测序、Western blot检测RIG-I敲除情况。PCV2感染细胞后,通过荧光定量PCR分析RIG-I及其下游分子mRNA水平,IPMA方法及TaqMan定量PCR检测病毒增殖水平。结果显示,筛选出的1株RIG-I基因缺失37 bp的PK-15细胞,Western blot检测RIG-I蛋白不表达。PCV2感染正常PK-15细胞48 h和72 h后,RIG-I mRNA水平上调,表明PCV2可激活RIG-I。敲除RIG-I基因,可下调MAVS、STING、IRF3、IFN-β的mRNA水平,抑制PCV2在PK-15细胞中复制,初步表明RIG-I信号通路促进PCV2在PK-15细胞中复制。本研究为PCV2感染的天然免疫机制研究提供了良好的细胞模型。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9基因编辑 视黄酸诱导基因信号通路 PK-15 猪圆环病毒2型
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视黄酸诱导基因-Ⅰ在特发性炎症性肌病肌肉组织中的表达及意义 被引量:1
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作者 吕晶玮 戴廷军 +3 位作者 李玲 李伟 纪坤乾 焉传祝 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期1823-1828,共6页
目的 明确视黄酸诱导基因-Ⅰ (RIG-Ⅰ)在特发性炎症性肌病(IIMs)中的表达特点,并探讨其在IIMs免疫病理机制中的作用.方法 回顾性选取2010年2月至2014年4月期间在山东大学齐鲁医院行肌活检检查的20例皮肌炎(DM)和20例多发性肌炎(P... 目的 明确视黄酸诱导基因-Ⅰ (RIG-Ⅰ)在特发性炎症性肌病(IIMs)中的表达特点,并探讨其在IIMs免疫病理机制中的作用.方法 回顾性选取2010年2月至2014年4月期间在山东大学齐鲁医院行肌活检检查的20例皮肌炎(DM)和20例多发性肌炎(PM)患者的肌肉活检标本,同时选取4例面肩肱型肌营养不良(FSHD)和4例正常肌组织作为对照.所有肌肉标本均进行HE染色及RIG-Ⅰ免疫组织化学染色.应用Western印迹定量检测RIG-Ⅰ的表达含量,并用双重免疫荧光方法检测DM/PM肌肉标本中RIG-Ⅰ与浆细胞样树突状细胞(pDCs)的特异性表面标记分子CD303的共表达.结果 RIG-Ⅰ在正常肌肉组织中无阳性表达,而在DM和PM中可见明显阳性表达,以炎症细胞、血管内皮细胞的特异性阳性表达以及坏死和再生肌纤维胞质处的非特异性弱阳性表达为主,另外在伴有束周萎缩的DM中尚可见RIG-Ⅰ在束周肌纤维胞质中的强阳性表达,而在FSHD中则仅见坏死和再生肌纤维胞质处RIG-Ⅰ的非特异性表达.在DM/PM肌肉标本中,未检测到RIG-Ⅰ与CD303的共表达.与对照组相比(包括FSHD和正常对照)DM/PM组肌肉组织中的RIG-Ⅰ表达含量显著上调(平均灰度值:正常对照组0.003±0.003;FSHD组0.019±0.013;DM组0.901±0.470;PM组0.630±0.444),两组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 RIG-Ⅰ可能参与了调节Th1细胞因子诱导的趋化因子表达,表明其在一定程度上参与了IIMs免疫病理机制过程,但其在Ⅰ型干扰素介导的固有免疫病理机制中可能不起主要作用. 展开更多
关键词 皮肌炎 多发性肌炎 视黄酸诱导基因- 型干扰素 CD303
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线粒体抗病毒蛋白对先天免疫的影响 被引量:1
12
作者 倪才飞 黄蓓 钟辉 《生物技术通讯》 CAS 2008年第5期734-736,共3页
病毒感染启动宿主先天免疫反应是通过激活转录因子NF-κB和干扰素调节因子3(IRF-3),它们协同调控Ⅰ型干扰素的表达。病毒在复制过程中产生的复制中间体双链RNA作为一个病原相关分子模式,被细胞内具有RNA解旋酶活性的维甲酸诱导基因Ⅰ(RI... 病毒感染启动宿主先天免疫反应是通过激活转录因子NF-κB和干扰素调节因子3(IRF-3),它们协同调控Ⅰ型干扰素的表达。病毒在复制过程中产生的复制中间体双链RNA作为一个病原相关分子模式,被细胞内具有RNA解旋酶活性的维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-1)编码蛋白检测到。线粒体抗病毒蛋白(MAVS)作为一个接头蛋白,在RIG-1信号通路的下游和NF-κB、IRF-3信号通路的上游扮演着重要的角色。MAVS通过其疏水跨膜结构域定位在线粒体外膜上,是线粒体中发现的第一个与先天免疫相关的蛋白质,将线粒体和先天免疫联系在一起。 展开更多
关键词 线粒体抗病毒蛋白 先天免疫 维甲酸诱导基因 病原相关分子模武
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Between Scylla and Charybdis:The role of the human immune system in the pathogenesis of hepatitis C
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作者 Ulrich Spengler Hans Dieter Nischalke +1 位作者 Jacob Nattermann Christian P Strassburg 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2013年第44期7852-7866,共15页
Hepatitis C virus(HCV)frequently elicits only mild immune responses so that it can often establish chronic infection.In this case HCV antigens persist and continue to stimulate the immune system.Antigen persistence th... Hepatitis C virus(HCV)frequently elicits only mild immune responses so that it can often establish chronic infection.In this case HCV antigens persist and continue to stimulate the immune system.Antigen persistence then leads to profound changes in the infected host’s immune responsiveness,and eventually contributes to the pathology of chronic hepatitis.This topic highlight summarizes changes associated with chronic hepatitis C concerning innate immunity(interferons,natural killer cells),adaptive immune responses(immunoglobulins,T cells,and mechanisms of immune regulation(regulatory T cells).Our overview clarifies that a strong anti-HCV immune response is frequently associated with acute severe tissue damage.In chronic hepatitis C,however,the effector arms of the immune system either become refractory to activation or take over regulatory functions.Taken together these changes in immunity may lead to persistent liver damage and cirrhosis.Consequently,effector arms of the immune system will not only be considered with respect to antiviral defence but also as pivotal mechanisms of inflammation,necrosis and progression to cirrhosis.Thus,avoiding Scylla-a strong,sustained antiviral immune response with inital tissue damage-takes the infected host to virus-triggered immunopathology,which ultimately leads to cirrhosis and liver cancerthe realm of Charybdis. 展开更多
关键词 Natural killer cells CD4+ T helper cells Regulatory T cells INTERFERON Hepatitis C Hepatic stellate cells HEPATOCYTES IMMUNOGLOBULIN retinoic acid inducible gene-I Toll like receptors
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Na^(+)/K^(+) ATPase β1亚基对乙型肝炎病毒复制的影响及其作用机制
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作者 曹扬 王莹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期910-916,共7页
目的探讨Na^(+)/K^(+) ATPaseβ1亚基(ATP1B1)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响及其作用机制。方法将稳定表达HBV的质粒pHBV1.3分别与质粒VR1012-ATP1B1及siRNA ATP1B1序列共转染Hep G2细胞,ELISA法检测细胞培养上清中H... 目的探讨Na^(+)/K^(+) ATPaseβ1亚基(ATP1B1)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响及其作用机制。方法将稳定表达HBV的质粒pHBV1.3分别与质粒VR1012-ATP1B1及siRNA ATP1B1序列共转染Hep G2细胞,ELISA法检测细胞培养上清中HBs Ag的含量,qRT-PCR法检测细胞中HBV DNA及RNA含量。Western blot法检测过表达ATP1B1的Hep G2细胞中维甲酸诱导基因蛋白-Ⅰ(retinoic acid-inducible gene-Ⅰ,RIG-Ⅰ)和黑色素瘤分化相关抗原5(melanoma differentiation-associated 5,MDA5)蛋白的表达,qRT-PCR法检测细胞因子(IFNα、IFNβ、IFNγ、IL-28a、IL-29)及IFN诱导基因(interferon-stimulated gene,ISG)mRNA含量,以转染载体VR012为对照。结果过表达ATP1B1可显著降低HepG2细胞培养上清中HBs Ag及HBV DNA、RNA含量(P <0.01);沉默ATP1B1可显著升高HepG2细胞培养上清中HBsAg及HBV DNA、RNA含量(P <0.01)。与VR012组比较,过表达ATP1B1的Hep G2细胞中RIG-Ⅰ和MDA5蛋白表达升高;IFNα、IFNβ和IL-29 mRNA含量明显升高(P <0.05),IFNγ和IL-28A mRNA含量差异无统计学意义(P> 0.05):ISG15、ISG56、OAS2和BST-2 mRNA含量显著升高(P <0.01),GBP-1 mRNA含量差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 ATP1B1可抑制HBV的复制,可能是通过上调细胞内RIG-Ⅰ及MDA5蛋白,诱导Ⅰ型IFN表达,激活下游抗病毒因子ISG发挥作用。 展开更多
关键词 Na^(+)/K^(+)ATPaseβ1亚基 乙型肝炎病毒 维甲酸诱导基因蛋白- 黑色素瘤分化相关抗原5 干扰素诱导基因
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