IL-4和IL-13在溃疡性结肠炎中的表达

目的探讨Th2类细胞因子IL4和IL13在溃疡性结肠炎中的作用。方法收集30例经内镜检查证实的UC患者结肠黏膜和血清标本,20例性别、年龄相匹配的同期大肠息肉患者(取其正常组织)作为对照组。用RTPCR法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL4及IL13的mRNA表达及其血清含量。结果轻度UC患者IL4和IL13的mRNA表达与对照组比较无统计学意义(P>0.05),中重度UC患者IL4和IL13的肠黏膜表达明显下降(P<0.05)与对照组比较,二者血清含量未见明显区别(P>0.05)。结论IL4和IL13在UC的发病中起重要作用。

Pim-3异常表达在胃癌中的意义

目的:探讨Pim-3的异常表达在胃癌发展过程中的作用.方法:使用半定量RT-PCR法和免疫组化法检测40例胃癌组织及20例癌旁正常组织标本Pim-3的表达,并比较Pim-3的表达与胃癌临床病理参数的关系.结果:与正常胃黏膜相比,Pim-3mRNA的表达量在胃癌组织中更高(0.287±0.058 vs 0.053±0.055,P<0.001).中分化腺癌中Pim-3蛋白的表达高于低分化腺癌组织中的表达,两者比较差异显著(50%vs20%,P<0.05).Pim-3的表达与淋巴转移、静脉转移密切相关(r=0.385,0.412,P=0.014,0.008).结论:Pim-3可作为胃癌早期的生物标志物,并可预示肿瘤的预后.

溃疡性结肠炎患者Th1类细胞因子的表达

目的:检测Th1类细胞因子IL-12,IFN-γ在溃疡性结肠炎(UC)中的表达,从分子水平上探讨UC的发病机制.方法:选取通过结肠镜诊断并经病理证实的患者UC 30例,正常对照者20例.用RT-PCR方法检测Th1类细胞因子IFN-γ和IL-12 mRNA表达,用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-12,IFN-γ的水平.结果:UC组(轻、中、重度)IL-12 mRNA表达较正常对照组显著增加(0.51±0.09,0.59±0.07,0.66±0.06 vs 0.25±0.03,P<0.05),而IFN-γ与正常对照组相比,表达无显著差异(P>0.05).UC组和正常对照组IL-12的血清浓度差异没有显著性(P>0.05),IFN-γ未达到可检测浓度.结论:IL-12在UC的发病中可能起重要作用.

脂肪变性对肝细胞胆固醇代谢的影响

目的:探讨非酒精性脂肪性肝病中肝细胞胆固醇(TC)代谢的相关变化.方法:正常成人肝细胞株HL-02,以油酸软脂酸诱导肝细胞产生脂肪变性,建立肝细胞脂肪变性模型.分别于实验12、24、48h收集细胞,同期设不含脂肪酸培养的细胞作对照.油红O染色观察细胞内脂滴变化;试剂盒检测细胞内三酯酰甘油(TG)和TC含量的变化情况,RT-PCR分别检测表达固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2),其靶基因羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)及TC7α羟化酶(CYP7α1)的基因mRNA变化.结果:油酸软脂酸诱导12h即可产生肝细胞脂肪变性,24h及48h脂肪变性逐渐加重.随造模时间延长,模型组细胞内TG、TC含量逐渐增多,且均显著高于对照组(TG:16.93±1.57mg/g,23.67±2.4mg/g,51.1±11.76mg/gvs8.43±5.65mg/g;TC:14.9±0.6,23.7±1.1mg/g,38.4±4.5mg/gvs8.5±1.6mg/g;均P<0.01);SREBP-2,HMGCRmRNA表达逐渐升高(SREBP-2mRNA:1.2972±0.16,1.6141±0.21,2.0368±0.27vs1.0±0.11;HMGCRmRNA:1.0311±0.15,1.2706±0.28,1.3954±0.32vs1.0±0.12;均P<0.05),而LDLR、CYP7α1mRNA表达逐渐下降(LDLRmRNA:0.8901±0.22,0.7846±0.18,0.6912±0.09vs1.0±0.24;CYP7α1mRNA:0.9726±0.27,0.6707±0.18,0.5659±0.16vs1.0±0.19;均P<0.05).结论:肝细胞脂变后细胞内TC含量增加,其合成基因表达升高及代谢基因表达降低可能是其机制;LDLRmRNA表达降低.

反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌3种耐药相关基因

目的:观察膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌(MTB)对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)耐药性的效果。方法:用ropB、katG、inhA、rpsL基因的寡核苷酸探针与结核分枝杆菌PCR产物进行反向斑点杂交,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较。结果:INH、RFP和SM的耐药基因检测灵敏度分别为84.88%、87.10%和79.17%,符合率为97.33%、94.74%和88.37%。结论:膜反向斑点杂交技术是检测部分MTB耐INH、RFP和SM基因型快速、简便的方法。

腹腔冲洗液和腹膜组织检测胃癌腹腔微转移的临床意义

目的:运用细胞学及RT-PCR方法对胃癌患者术中腹腔冲洗液、腹膜组织进行检测,以探讨对预测胃癌腹腔微转移的意义.方法:胃癌68例和胃良性病变5例,收集患者术中腹腔冲洗液,并同时切除少量大网膜、腹膜作为对照.用RT-PCR方法测定冲洗液中游离细胞的CEAmRNA表达,同时作冲洗液细胞学检查(PLC).结果:腹腔冲洗液和腹膜组织中的CEAmRNA的阳性率分别为36.8%(25/68),和38.2%(26/68),皆高于腹腔冲洗液细胞学25.0%(17/68).CEAmRNA的阳性率与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、浆膜侵犯深度呈正相关.结论:CEART-PCR方法对于检测腹腔微量游离癌细胞较PLC有更高的灵敏度和特异性,是一种检测胃癌腹腔微转移的有效方法.

VEGF-A与卵巢癌淋巴管生成及淋巴结转移的关系研究

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中血管内皮生长因子A(VEGF-A)与肿瘤内淋巴管生成及淋巴结转移的关系。方法:采用RT-PCR的方法检测VEGF-AmRNA在卵巢癌中的表达,用免疫组化的方法检测VEGF-A蛋白在卵巢癌中的表达。用VEGFR-3标记淋巴管行免疫组化染色,人工计数淋巴管密度(LVD),统计分析VEGF-AmRNA及VEGF-A蛋白与LVD及淋巴结转移的关系。结果:VEGF-AmRNA及VEGF-A蛋白的表达与LVD及淋巴结转移显著相关。结论:VEGF-A的高表达与卵巢癌淋巴管生成及淋巴结转移有关。

P27^(kip1)在肾癌中的表达及临床意义

目的检测细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白p27kip1在肾癌中的表达及临床意义。方法采用基于组织芯片的免疫组化方法、Westernblotting及RT-PCR检测80例肾癌组织、40例配对的癌旁肾组织及786-0细胞系中p27kip1蛋白及mRNA的表达情况,观察其表达与肿瘤临床参数之间的关系,并对3种检测方式(免疫组织化学、Westernblotting及RT-PCR)在p27kip1基因及蛋白水平上的检测结果进行分析和评价。结果免疫组化及Westernblotting检测显示,p27kip1蛋白主要在细胞核中表达,肾癌组表达率明显低于正常组(P<0.05),且在肿瘤不同的临床分期及病理分级间的表达有显著差异(P<0.05);p27kip1mRNA的表达在正常组织和肾癌组织中无明显差异。Westernblotting与免疫组化法检测蛋白表达有较一致的效果。结论正常肾组织与肾癌组织之间p27kip1的基因水平并无差异,而肾癌中p27kip1蛋白阳性表达率低于正常肾组织,其表达的调控可能是基于翻译阶段的蛋白降解。p27kip1低表达可能促进肿瘤的演进与发展。检测p27kip1蛋白可能成为评价肾癌预后的参考指标,为肾癌诊治的研究提供了新的思路。

溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜CINC-1及其受体CXCR2的表达及意义

目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠黏膜中性粒细胞趋化因子-1(CINC-1)及其受体CXCR2的表达及意义.方法:♂SD大鼠36只完全随机分为正常组、模型1组、模型2组,共3组,每组12只.用2,4,6三硝基苯璜酸100mg/kg灌肠建立大鼠溃疡性结肠炎模型,7d后处死模型1组动物,14d后处死模型2组动物.运用RT-PCR法、免疫组化染色法分别检测各组大鼠CINC-1及CXCR2mRNA及其蛋白的表达.结果:CXCR2主要表达在中性粒细胞及肠上皮细胞膜表面.UC活动期CINC-1及CXCR2mRNA及其蛋白表达明显呈上升趋势,与炎症相关.与正常组相比,模型1组、2组CINC-1mRNA及蛋白表达有显著差异(1.77±0.52,1.82±0.24vs0.29±0.10;0.30±0.01,0.31±0.04vs0.18±0.02,均P<0.05);CXCR2mRNA及蛋白表达也有显著差异(1.66±0.10,2.49±0.29vs0.55±0.13;0.20±0.03,0.23±0.02vs0.16±0.01,均P<0.05).结论:CINC-1及其受体CXCR2表达水平与UC炎症正相关,CINC-1可能通过CXCR2介导中性粒细胞浸润,造成结肠炎症及组织损伤.

平阳霉素作用静脉畸形内皮细胞后VCAM-1、ICAM-1、ICAM-3表达

目的:研究平阳霉素(PYM)作用于人静脉畸形内皮细胞(HVMECs)后Ig粘附分子(VCAM-1、ICAM-1、ICAM-3)表达。方法:体外培养HVMECs,采用细胞ELISA和RT-PCR技术检测不同浓度PYM作用人HVMECs后Ig粘附分子表达。结果:PYM作用人HVMECs后粘附分子表达具有时间浓度效应。PYM能诱导VCAM-1在人HVMECs表达,2h后明显增高,8h后达到峰值,12h后下降,48h后呈阴性表达。PYM能促进ICAM-1在人HVMECs表达,12h后显著增高,18h最高,24h逐渐下降。PYM能促进ICAM-3表达,12h后逐渐增高,24h达到峰值,72h后1CAM-3仍高表达。0.01～1mg/L PYM能诱导或促进粘附分子表达,表达水平与药物浓度成正相关,1mg/L PYM作用人HVMECs后粘附分子表达较高,10mg/L PYM作用人HVMECs后,表达下降。RT-PCR检测PYM作用人HVMECs 2、6、12h能诱导或促进VCAM-1、ICAM-1和ICAM-3mRNA表达,8、12、18h后mRNA表达最高。1mg/L PYM作用于HVMECs后,粘附分子mRNA表达最高,mR-NA表达具有时间浓度效应。结论:低浓度PYM能诱导或促进人HVMECs粘附分子表达,具有时间浓度效应。

甲状腺转录因子-2在C57BL/6J小鼠腭突发育过程中的时空变化

目的探讨C57BL／6J小鼠继发腭发育过程中，甲状腺转录因子（TTF）-2表达的时空变化规律，探讨TTF-2在腭突形成中的作用。方法于小鼠妊娠12、13、14、15d分别断颈处死各6只孕鼠，无菌条件取出胚胎，解离腭突。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Westernblot和免疫组织化学染色方法定量、定位检测TTF-2在腭突中的表达。结果免疫组织化学定位检查在C57BL／6J小鼠的腭突发育过程（E12-E14）中，在腭突中嵴上皮细胞均有TTF-2的表达，而在腭突问充质细胞未见TTF-2的表达；腭突融合时，已不能检测到TTF-2表达。TTF-2在腭突形成、上抬、接触的表达差异具有统计学意义（P〈0．05），以E13为最高，RT-PCR和Westernblot结果一致。结论TTF．2在腭突发育过程中的表达有时空性，推测TTF-2与腭突中嵴上皮细胞的分化抑制和转归相关。

bFGF基因在复发性阿弗他溃疡中表达的变化及其意义

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在复发性阿弗他溃疡(RAU)组织中基因表达变化规律。方法分别提取正常口腔粘膜和RAU组织中的总RNA,分离mRNA,用RT-PCR技术检测bFGF基因在其中的表达变化规律。结果在正常口腔粘膜组织中bFGF的mRNA表达较弱,而在RAU中表达水平增加(P<0.05)。结论RAU中的bFGF基因表达水平增强,这可能与RAU病程中黏膜的修复愈合有着密切的联系。

人CD40L真核表达载体构建及其在NIH3T3细胞膜上的表达

目的:扩增人CD40L基因并在细胞膜上表达,建立一种不需蛋白纯化获得人CD40L的简单方法,为进一步研究其在肿瘤治疗中的作用及机制奠定基础.方法:利用梯度RT-PCR从Jurkat细胞中扩增CD40L基因,测序证明序列正确后构建pcDNA3.1-40L真核表达载体,转染NIH3T3细胞,流式细胞仪检测目的基因的表达.结果:从Jurkat细胞内成功扩增人CD40L基因,筛选到一个序列无误的克隆;成功构建pcDNA3.1-40L真核表达载体;经转染NIH3T3细胞和G418初步筛选,流式细胞检测证明约41%的NIH3T3细胞膜上有CD40L基因表达.结论:利用RT-PCR技术可以从Jurkat细胞内扩增CD40L基因,利用pcDNA3.1表达载体可以实现人CD40L基因在NIH3T3细胞膜上的表达.

贝伐珠单抗对结直肠癌细胞串珠素表达的影响

目的探究贝伐珠单抗对结直肠癌细胞串珠素表达的影响。方法将处于对数生长期的肿瘤细胞(HCT116和HT29细胞)分为两组:对照组和实验组(加入终浓度为400μg/L的贝伐珠单抗48小时),采用RTPCR检测结直肠癌细胞串珠素mRNA表达。将同一批处于对数生长期的肿瘤细胞分为6组,一组为对照组,其余5组实验组分别加入终浓度为25、50、100、200和400μg/L的贝伐珠单抗,48小时后ELISA检测直肠癌细胞及培养液上清的串珠素蛋白水平,Western blot检测结直肠癌细胞串珠素的蛋白表达。结果与对照组比较,实验组肿瘤细胞串珠素mRNA及蛋白水平均上调(均P<0.05)。在细胞培养液中,与对照组比较,实验组的串珠素蛋白水平未出现显著变化(P>0.05)。结论贝伐珠单抗引起结直肠癌细胞串珠素mRNA和蛋白表达的上调,但未引起细胞培养液中串珠素蛋白的显著变化。

肝癌中肝细胞生长因子的表达及意义

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)在肝癌患者组织及血浆中的表达,探讨HGF在肝癌发生、发展中所起的作用。方法:对肝癌及慢性乙型肝炎患者进行调查,并且设立正常对照组,应用酶联免疫吸附法检测各组血浆HGF水平;应用半定量RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测各组肝组织中的HGF mRNA及HGF蛋白的表达。结果:(1)PCR产物行半定量分析,各组数据两两比较差异均有统计学意义(P<0.01),肝炎组和肝癌组中HGFmRNA的表达均显著高于正常肝组织,且在肝癌组中的表达显著高于肝炎组。(2)免疫组化法检测肝癌组织中HGF阳性染色位于细胞胞浆,HGF的表达阳性率97.1%。肝炎组织中HGF的表达阳性率51.4%,正常肝组织阳性率0%。且肝癌组织中HGF的表达高于肝炎组织,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)ELISA检测肝癌HGF与其它两组间比较差异有统计学意义(P<0.01),其中肝癌组血浆中HGF高于肝炎组,而对照组最低。结论:HGF在肝癌组织及血浆中呈高表达,可能与肝癌的发生、发展有关。

L-苹果酸对大鼠转运蛋白及抗氧化酶基因表达的影响

对12月龄SD大鼠给予L-苹果酸30d后,采用含有SYBR Green I的Real Time RT-PCR法,对肝脏和心脏线粒体苹果酸天冬氨酸穿梭中的两种转运蛋白(天冬氨酸谷氨酸转运蛋白(AGC)与α-酮戊二酸苹果酸转运蛋白(OMC))以及两种抗氧化酶(过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px))的基因表达进行检测,以研究L-苹果酸增强线粒体抗氧化作用的分子生物学机制。结果表明:苹果酸组中大鼠心肌细胞AGC、OMC、CAT、GSH-Px的mRNA表达量分别是空白对照组的1.25、1.39、1.12、1.01倍。苹果酸组中大鼠肝脏细胞AGC、OMC、CAT、GSH-Px的mRNA表达量分别是空白对照组的1.33、1.02、1.25、0.94倍。由此推测,L-苹果酸可能通过促进苹果酸天冬氨酸穿梭蛋白以及抗氧化酶的基因表达,实现提高线粒体的抗氧化作用。

甲状腺素对甲状腺功能减低大鼠子代脑组织中同源盒基因Nkx2．2表达的影响

目的：探讨妊娠不同时期补充不同剂量甲状腺素对甲状腺功能减低子代大鼠脑组织中同源盒基因Nkx2.2表达的影响。方法：选取1月龄Wistar大鼠240只,雌雄各半。将雌性大鼠随机分为对照组,甲状腺功能减低（甲低）组,甲低孕鼠妊娠117d（妊早期甲低）补充甲状腺素高、中、低剂量组,甲低孕鼠妊娠1820d（妊晚期甲低）补充甲状腺素高、中、低剂量组共8组。各组均饲以低碘饲料,高、中、低剂量组每100g体质量每天分别补充甲状腺素3.5、2.0、0.5μg。对照组饮用碘酸钾溶液,总碘摄入量相当于大鼠生理碘需要量,其余7组饮用去离子水。3个月后与正常雄性大鼠交配。分别于孕17d、新生当天及生后20d,取8组子代大鼠的间脑组织,采用实时荧光定量PCR法检测脑组织中Nkx2.2mRNA的表达量。结果：在孕17d,甲低组的Nkx2.2mRNA表达水平低于对照组,其他6组均高于对照组;在新生当天和生后20d,除孕晚期甲低补充甲状腺素中剂量组外,其他各组的Nkx2.2mRNA表达水平均低于对照组;在生后20d孕早期甲低补充甲状腺素低、中、高剂量组的Nkx2.2mRNA表达水平与甲低组比较差别无统计学意义（P〉0.05）。结论：甲低孕鼠子代大鼠脑组织同源盒基因Nkx2.2的表达受补充甲状腺素剂量及孕期的影响。

胃癌组织中GOLPH3的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中GOLPH3(Golgi phosphoprotein-3)的表达及临床意义。方法选取148例确诊并接受手术治疗的胃癌患者作为观察组,同时选取20例行胃镜检查的健康成人作为对照组。采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法对两组组织标本中GOLPH3的mRNA水平和GOLPH3蛋白的表达情况进行检测。根据GOLPH3表达情况将观察组患者分为阳性组和阴性组,分析GOLPH3表达水平与临床病理特征及预后的关系。结果与对照组比较,观察组胃癌组织中GOLPH3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);其中观察组GOLPH3阴性患者46例,阳性患者102例。GOLPH3高水平表达与胃癌组织分型、临床分期、肿瘤浸润程度以及淋巴结转移有密切关系(P<0.05)。GOLPH3阴性患者1、2、3年累积复发率为10.9%、23.9%、30.4%,低于GOLPH3阳性患者的28.4%、38.2%、48.0%(P<0.05);GOLPH阴性患者1、2、3年生存率分别为93.5%、84.8%、69.6%,高于GOLPH3阳性患者的89.2%、70.6%、51.0%(P<0.05)。结论胃癌组织中GOLPH3 mRNA和蛋白异常高表达,与胃癌的病理特征及预后密切相关,可能是胃癌发生、发展的重要机制之一。

非小细胞肺癌组织中GPX3基因的表达及其临床意义

目的:探讨非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织中GPX3(谷胱甘肽过氧化物酶3)基因mRNA和蛋白表达及其临床意义。方法:对60例非小细胞肺癌患者,及癌旁组织采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western-blot技术检测GPX3在其肺癌组织及癌旁组织中的表达,分析其与患者临床病理特征的关系。结果:RT-PCR结果显示GPX3 mRNA在癌旁组织中的表达量高于非小细胞肺癌组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其表达水平与肿瘤病理分期、分化程度和淋巴结转移明显相关(P<0.05)。Westernblot结果显示GPX3蛋白在癌旁组织中表达明显高于非小细胞肺癌组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。GPX3蛋白的表达水平与肿瘤病理分期和淋巴结转移明显相关(P<0.05)。结论 :GPX3基因的表达异常在非小细胞肺癌的发生、发展中起着重要的作用。

MNSF-β在子宫内膜异位症异位内膜中的研究

目的探讨小鼠单克隆非特异性抑制因子-β（MNSF-β）在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法选取24例经病理证实为子宫内膜异位症的异位内膜标本为实验组，以14例非子宫内膜异位症患者的子宫内膜标本为对照组。采用RT-PCR方法检测MNSF-βmRNA的相对表达。并对子宫内膜异位症患者异位内膜中MNSF-β表达水平与内异症严重程度及月经周期进行相关性分析。结果实验组异位内膜中MNSF-β表达相对水平明显低于对照组在位内膜（t=-11．581，P〈0．01）；实验组的异位内膜MNSF-9水平，中、重度组与轻度组的差别有显著性（t=-2．731，P〈0．05）；实验组异位内膜和对照组在位内膜在各自组中增殖期和分泌期比较，MNSF-β表达水平均无显著性差异（P〉0．05）；实验组异位内膜增殖期、分泌期与对照组在位内膜增殖期、分泌期在位内膜分别比较，均有统计学差异（t增殖期=-3．858，t分泌期=-3．187，均P〈0．05）。结论MNSF-β表达降低与子宫内膜异位症的发生发展有着密切关系。