目的:构建L02/HBx转基因细胞模型并研究HBx对肝细胞周期的影响.方法:运用脂质体转染和G418筛选获得L02/ HBx阳性克隆,并分别用RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.进一步用四唑蓝(MTT)比色试验、流式细胞仪检测L02/HBx的增...目的:构建L02/HBx转基因细胞模型并研究HBx对肝细胞周期的影响.方法:运用脂质体转染和G418筛选获得L02/ HBx阳性克隆,并分别用RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.进一步用四唑蓝(MTT)比色试验、流式细胞仪检测L02/HBx的增殖、凋亡和细胞周期.结果:RT-PCR和Western blot分别检测到L02/ HBx细胞中HBx mRNA和蛋白的表达.MTT比色试验显示L02/HBx生长速度加快,流式细胞仪检测发现L02/HBx凋亡率低(0.09%±0.13% vs 3.74%±1.29%,P<0.05),G1期细胞比例减少(61.35%±0.82% vs 67.80±6.84%,P<0.05),S期细胞比例相应增加(36.59%±2.54% vs 22.37%±2.17%,P<0.05).经阿霉素(ADM)培养后,L02/HBx的凋亡率显著增加(34.91%±5.85% vs 0.09%±0.13%,P<0.05),G1期细胞比例明显增加但低于对照组(82.81%±6.48% vs 61.35%±0.82%,P<0.05;82.81%±6.48% vs 87.19%±1.92%,P<0.05),S期细胞比例降低但较对照组高(13.84%±6.16% vs 36.59%±2.54%,P<0.05;13.84%±6.16% vs 2.22%±1.26%,P<0.05).结论:L02/HBx构建成功,HBx能促进细胞周期进程,加快细胞的生长并抑制细胞的凋亡;转染HBx基因的肝细胞凋亡更易受凋亡因子所触发,表明HBx可能会增加正常肝细胞对诱导凋亡因素的敏感性.展开更多
文摘目的:构建L02/HBx转基因细胞模型并研究HBx对肝细胞周期的影响.方法:运用脂质体转染和G418筛选获得L02/ HBx阳性克隆,并分别用RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.进一步用四唑蓝(MTT)比色试验、流式细胞仪检测L02/HBx的增殖、凋亡和细胞周期.结果:RT-PCR和Western blot分别检测到L02/ HBx细胞中HBx mRNA和蛋白的表达.MTT比色试验显示L02/HBx生长速度加快,流式细胞仪检测发现L02/HBx凋亡率低(0.09%±0.13% vs 3.74%±1.29%,P<0.05),G1期细胞比例减少(61.35%±0.82% vs 67.80±6.84%,P<0.05),S期细胞比例相应增加(36.59%±2.54% vs 22.37%±2.17%,P<0.05).经阿霉素(ADM)培养后,L02/HBx的凋亡率显著增加(34.91%±5.85% vs 0.09%±0.13%,P<0.05),G1期细胞比例明显增加但低于对照组(82.81%±6.48% vs 61.35%±0.82%,P<0.05;82.81%±6.48% vs 87.19%±1.92%,P<0.05),S期细胞比例降低但较对照组高(13.84%±6.16% vs 36.59%±2.54%,P<0.05;13.84%±6.16% vs 2.22%±1.26%,P<0.05).结论:L02/HBx构建成功,HBx能促进细胞周期进程,加快细胞的生长并抑制细胞的凋亡;转染HBx基因的肝细胞凋亡更易受凋亡因子所触发,表明HBx可能会增加正常肝细胞对诱导凋亡因素的敏感性.
