The Popularization and Application of Cold Storage Red Blood Cells or Whole Blood at -80 ℃ of the Rh(D) Negative Patients in Surgical Operation

Summary: The efficiency of cold storage red blood cells (CSRBC) or whole blood at -80 ℃ used in 27 Rh(D) negative patients during surgical operation was reported. The Rh(D) negative patients received the transfusion of CSRBC or whole blood stored at -80 ℃ for 180 to 360 days. The changes in the indexes, such as blood TB, DB, K +, Na +, BUN, Cr, urine protein (URPO), UOB, Hb, HCT, serum total protein, relative to hemolytic reaction and blood volume before and after transfusion were observed. The results showed that after transfusion of CSRBC or whole blood 27 cases were negative for urine protein and UOB, and the levels of BUN and Cr were normal (P>0.05). Blood TB, DB, Hb, and HCT were increased, while pH, blood K + and blood Na + was normal with the difference being not significant before and after operation (P>0.05). Plasma protein was decreased, but there was no significant difference before and after operation (P>0.05). It was suggested that CSRBC or whole blood at -80 ℃ could be safely infused to the Rh(D) negative patients without side effects during the surgical operation.

孕妇及胎儿Rh(D/E)免疫性溶血病的诊断与血液治疗

目的:探讨孕妇及胎儿Rh(D/E)血型不合的免疫性溶血病的治疗,预防孕妇早孕自然流产或不足月死胎。方法:用大量去除血浆和换血疗法对孕妇及胎儿或新生儿Rh(D/E)血型不合者进行治疗,以降低IgG抗D/E的含量,提高胎儿或新生儿的成活率。结果:2例孕妇及胎儿Rh(D)血型不合者去除血浆前IgG抗-D分别为512和1024,去除血浆3周后,IgG抗-D效价降至16和32,以后间断性的治疗,减少治疗频率,保持IgG抗-D≤64,置足月行剖宫术,产下正常男、女婴儿各1名;1例Rh(E)血型不合者未经治疗而胎死宫内;另1例Rh(D)新生儿溶血病(HDN)经换血治疗而得救。1年后随访,3例婴儿发育均良好,与正常婴儿无差异。结论:大量去除血浆,同时补充高蛋白饮食是治疗孕妇及胎儿RhD/E血型不合的免疫性溶血病的好方法,换血疗法是HDN治疗的最佳选择。

Rh缺失型D--个体及其家系成员基因分型与序列分析

目的初步探讨Rh缺失型D--个体发生的分子机制。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP),对两例Rh缺失型D--个体及其家系成员RHD与RHCE基因多个外显子与内含子进行扩增。根据PCR-SSP结果,对所有与血清学表型不符的异常扩增片段进行克隆测序。结果两例Rh缺失型D--个体PCR-SSP扩增后获得D、e的基因相关片段。经测序发现,RhD--个体1第5外显子第22位核苷酸出现缺失,48与90位发生点突变。RhD--个体2第5外显子第89位发生突变。结论Rh基因外显子的缺失以及单个核苷酸的缺失与突变可能是导致Rh缺失型DD--形成的重要原因之一。

2493例RhD阴性献血者的基因分析及4个新RHD等位基因的鉴定

目的研究中国汉族人群RHD等位基因多态性和分子机制。方法2008年1月-2011年9月，对2493例初筛为RH阴性的无偿献血者，采用单克隆抗体鉴定RhD／C／c／E／＇e抗原，D抗原鉴定同时采用间接抗球蛋白法；采用PCR·SSP方法测出d／d、D／d、DEL／d型，再用商用RHD基因检测试剂盒鉴定D／d型的样本中的弱D—15、RHD．CE（2-9）-D、DVI-Ⅲ和Dva型；对于排除前述基因型的样本，对其RHD基因10个外显子序列进行测序比对分析。结果2493例中，有1686名为R／／D基因完全缺失（0／O），占67．6％，其它808名检出有RHD基因：其中20．7％（516／2493）为DEL型（RHD1227G〉A／a），RHD—CE（2-9）-D／d为最常见的融合基因型，占6．5％（163／2493），其次为DⅥ·nl（RHD—CE（3-6）-D／d），占1．2％（31／2493），弱D15型为常见的弱D型，共检出62例（2．5％）；发现的4个新等位基因，分别是RHO78delC／d、RHD520G〉A＋1080dellO／dRHD、438G〉C／d和RHD101A〉G／d。结论汉族人群RHD等位基因多态性与高加索人群存在差异，有丰富的类型和不同分子机制。

Rh血型抗-D阳性个体中未见DEL型

目的分析Rh血型系统抗-D抗体阳性个体的RhCcEe表型及检测DEL等位基因,观察产生抗-D同种免疫反应个体中是否存在DEL型。方法对因输血或妊娠产生抗-D同种抗体的个体,采用间接抗人球蛋白试验(IAT)排除部分D型或弱D型,然后进行RhCcEe表型检测,同时采用PCR方法检测RHD1227A等位基因鉴别DEL型和真实Rh(D)阴性表型。同时检测99名IAT确认的、抗-D抗体阴性的Rh(D)阴性健康人作对照。结果 99名抗-D抗体阴性组共检出C抗原阳性(包括CC或Cc)个体44名(44.4%);DEL型24名(24.2%)。抗-D抗体阳性组经IAT确认共118名Rh(D)阴性,C抗原阳性22名(18.6%),未发现DEL型个体,均与抗体阴性组存在显著性差异(P<0.01)。结论抗-D抗体阳性组未见DEL型,提示DEL型个体或不会因输血或妊娠针对Rh(D)抗原发生抗-D同种免疫反应;由于DEL型多携带C抗原,因此造成抗-D阳性组C抗原频率显著降低。

广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析

目的分析广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征。方法收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序。结果发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960G>A(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致。结论首次在广州地区人群中发现了RHD*960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D。

RHD1227A型弱D的D抗原表位分析

目的分析携带RHD1227A等位基因的Rh血型弱D型个体的红细胞D抗原表位。方法采用常规血清学方法检测Rh血型D、C、c、E和e抗原表型,间接抗人球蛋白试验(IAT)确认D抗原,序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)测定RHD基因,并检测RHD杂合型。对确认的弱D型,使用12种抗-D抗原不同表位的单克隆抗体,分析红细胞D抗原表位。结果血清学筛选和PCR-SSP检测鉴定出3例携带RHD1227A等位基因的弱D型样本,Rh小因子均为C+c+E-e+,RHD合子型鉴定均为RHD+/RHD-杂合型,提示3例个体基因型为CDe/cde。3例个体红细胞D抗原表位分析显示均具有基本完整D抗原表位,与Rh(D)阳性对照样本相同。结论发现3例RHD1227A型弱D型;不管RHD1227A等位基因表达DEL型或弱D型,其D抗原表位近似,均表达基本完整D抗原,提示该等位基因不同量的表达可能与其它调节因素有关。

血清学Rh(D)阴性个体分子机制的研究

目的探讨江苏地区无偿献血者中血清学Rh(D)阴性表型汉族人群的分子背景。方法 37份常规血清学试验检测出的Rh(D)阴性江苏汉族人,采用PCR-SSP检测RHCE基因和RH(D)基因;并对存在RH(D)基因的个体进行10个外显子及邻近内含子的测序。结果 37例血清学Rh(D)阴性献血者中,分子生物学方法确认26例无RH(D)基因。存在RH(D)基因的11例中,3例为RH(D)和RHCE基因发生互换,6例为RH D(K409k)(第9外显子1 227G>A),1例为弱D15型(第6外显子845G>A),1例为RH(D)*711delC(第5外显子711位碱基缺失)。结论一定比例的血清学阴性Rh(D)人群并非真正的Rh(D)阴性,即表达弱D抗原。提示对血清学Rh(D)阴性个体进行分子生物学分析,有利于安全输血。

Rh(D)阴性患者自体输血的临床分析(附29例报告)

目的 探讨择期手术的Rh(D)阴性患者进行自体输血的临床意义。方法 对确定为Rh(D)阴性血型的 2 9例择期手术患者即与临床医生联系并决定行自体输血。患者口服多糖铁 15 0mg ,每日 2次。按预计患者术中输血量 ,分次进行采血 ,每次采血 4 0 0ml,间隔 3d进行第二次采血。为了缩短手术等待的时间 ,最后一次采血在手术中进行。结果 2 9例患者有 7例术前采自体血 4 0 0ml (2 4 .1% ) ;2 1例术前采自体血 80 0ml,同时术中回收自体红细胞 30 0ml(72 .4 % ) ;1例术前采自体血 80 0ml,术中回收自体红细胞 30 0ml,另外输注异体悬浮红细胞 2 6 0ml(3.5 % )。结论 在Rh(D)阴性血液紧张的情况下应用术前自体储血的同时配合术中血液回收术 ,90 %以上的患者均可避免输异体血。

1例Rh(D)阴性患者输血引发迟发性输血反应原因探讨

目的探讨Rh(D)阴性患者误输Rh(D)阳性血液的原因,保障安全、有效输血。方法 1例76岁Rh(D)阴性女性胆囊炎患者,术前血型鉴定失误,术中误输Rh(D)阳性悬浮红细胞4 U,引发迟发性输血反应。运用微柱凝胶卡式法,对患者血液标本进行血型鉴定、抗筛检查及交叉配血试验。结果患者血型为B型,Rh(D)阴性,术前抗体筛查及交叉配血结果均为阴性,出错原因为首次鉴定方法不敏感导致假阳性、错报及人员复核马虎。结论通过案例剖析,寻找原因,提高认识,使临床输血真正达到安全、有效。

不同检测方法用于Rh(D)阴性确认检测比较

目的采用盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法4种检测方法用于Rh(D)阴性确认检测的比较及应用效果分析.方法选取2012年1月至2013年12月期间云南省第一人民医院输血科Rh(D)血型鉴定中初筛结果为阴性的标本96例,同时选用4种方法学进行Rh(D)阴性确认和分型实验.结果盐水法检测发现96例为Rh(D)确认阴性结果;凝聚胺法检测发现84例为Rh(D)确认阴性结果;抗人球蛋白法检测发现82例为Rh(D)确认阴性结果;微柱凝胶法检测发现81例为Rh(D)确认阴性结果.结论盐水法检测操作简单,但特异性差.凝聚胺法快速、简便,但会漏检抗体效价较弱的Ig G抗体;抗人球蛋白法操作复杂,但灵敏度高、特异性好;微柱凝胶法对检测血清中的Ig G抗体具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点,但成本较高.在实际工作中,多种方法的联合应用更能保证结果的准确性.

利用噬菌体随机肽库筛选Rh(D)血型抗原的模拟表位

目的从纯化的人抗Rh(D)抗体阳性血清中筛选Rh(D)血型抗原模拟表位。方法用纯化的多克隆抗Rh(D)抗体血清对噬菌体随机十二肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"过程筛选,随机挑取噬菌体克隆;用ELISA法检测其特异性及其与抗体的结合能力。提取阳性克隆DNA并进行测序,推导外源多肽的氨基酸序列。凝集抑制试验检测噬菌体展示的多肽对Rh(D)血型抗原结合的模拟作用。结果经过3轮筛选和相应鉴定后得到6个抗Rh(D)抗体的特异性噬菌体克隆,其中4个克隆展示相同的氨基酸序列为PSQGYVILLDEK,命名为C2,另外2个克隆展示相同的氨基酸序列为TMLNRAHDFSEC,命名为C21。凝集抑制试验结果表明这两个多肽的噬菌体可以抑制Rh(D)抗原阳性红细胞的凝集作用。结论多肽PSQGYVILLDEK和TMLNRAH-DFSEC可以模拟Rh(D)血型抗原表位。

Rh(D)变异体的分子生物学研究

目的应用分子生物学方法鉴定3例患者Rh(D)变异体的基因型。方法 Rh血型血清学试验采用标准血清学实验方法;采用PCR-SSP法扩增RHD基因的启动子、外显子、内含子及RHCE基因;采用PCR-RFLP法鉴定RHD基因的杂合性。结果这3例患者血清学检测结果均为Rh(D)变异体。PCR-SSP结果表明3例均具有融合等位基因RHD*D-CE(3-6)-D,为RHD*DVI.3;RHD基因合子型为RHD+/RHD-杂合型;RHCE基因检测结果显示为RHCE*Ccee。3例患者RH基因型为CDVI IIIe/cde。结论基因分型对于Rh(D)变异体的鉴定是一种有效方法。

抗-D抗体产生人群Rh分型与输血安全探讨

目的探讨产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性湖北汉族人群Rh分型分布特征及输血安全。方法对968例确认为Rh阴性的人群进行抗体鉴定,对检出红细胞同种抗-D抗体的人群进行Rh分型,并分析其接受Rh阴性或Rh阳性含红细胞血制品输注时产生其他抗-Rh抗体的产生风险。结果在确认为Rh阴性的968例人群中检出红细胞同种抗-D抗体103例,其抗-D抗体发生率为10.4%;在产生抗-D抗体人群检出ccee和Ccee两种Rh分型,以ccee为最常见,约为79.7%(82/103);该人群接受Rh阴性或Rh阳性血制品输注导致抗-Rh类抗体产生风险最高分别为17.93%、33.89%;该人群接受Rh分型不一致血制品输注所产生的抗-Rh类抗体主要为抗-C。结论产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性人群接受Rh分型不一致血制品输注时有产生红细胞同种抗体的风险;在有条件且非紧急情况下,该人群可接受Rh分型一致的血制品输注。

Rh-D-稀有血型免疫血清学分析及家系调查——附新生儿溶血病报告1例

目的对1例严重高胆红素血症新生儿及其家系成员进行免疫血清学检测,诊断新生儿溶血病。方法对患儿进行直接抗球蛋白试验,放散试验及游离试验;对患儿母亲进行抗体筛查及抗体鉴定;检测母系家系成员Rh表现型并绘制家系图。结果母亲为Rh-D-稀有血型,产生针对高频抗原的抗体引起患儿溶血。该家系中有6位-D-基因携带者。结论发现了1名Rh-D-稀有血型个体,诊断了1例由高频抗体导致的新生儿溶血病。

Rh血型变异体弱D15型的鉴定

目的分析2例血清学表现不同的Rh D抗原变异体基因突变情况,为D抗原突变者的临床安全输血提供依据。方法选取Ig M抗-D初筛为阴性的患者,经3种不同来源抗血清鉴定的Rh D变异体,采用分子生物学方法分析其基因突变位点。结果 2例患者的血清学表现不一致,但是基因突变位点分析结果均显示为弱D15型。结论本文报道的2例Rh D抗原变异体均为汉族人群中最常见的弱D15型,提示应对D变异体进行基因突变研究,进而采用安全的输血策略。

抗-D产生人群Rh分型特征调查

目的探讨产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性湖北汉族人群Rh分型分布特征及输血安全。方法对2011年9月至2016年9在武汉大学人民医院住院的968例确认为Rh阴性的人群进行抗体鉴定,对检出红细胞同种抗-D抗体的人群和120例Rh阴性且未产生抗-D抗体的对照组人群进行Rh分型。结果在确认为Rh阴性的968例人群中检出红细胞同种抗-D抗体103例,其抗-D抗体发生率为10.6%;在产生抗-D抗体人群检出ccee、Ccee和cc Ee三种Rh分型,其表型频率分别为78.6%(81/103)、18.5%(19/103)和2.9%(3/103);在对照组检出ccee、Ccee、cc Ee和CCee四种Rh分型,其表型频率分别为72.5%(87/120)、20.0%(24/120)、2.5%(3/120)和5.0%(6/120)。两组受检者的Rh分型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性人群表型以ccee型最为常见,其次为Ccee和cc Ee型,这对临床Rh D阴性患者安全输血具有重要意义。

受血者与供血者Rh(D、C、c、E、e)抗原相容情况的回顾性分析

目的了解我院受血者及其供血者Rh(D、C、c、E、e)抗原和表型分布,分析受、供者Rh抗原相容情况及其临床意义。方法收集交叉配血相合的受血者血样418例和供血者血样710例,进行Rh(D、C、c、E、e)抗原检测,比较分析受、供者抗原和表型分布差异及抗原相容性。结果受、供者Rh(D、C、c、E、e)抗原分布无显著性差异,受、供者CcDEe、CCDee表型分布比例差异有统计学意义(P<0.05)。受、供者Rh(D、C、c、E、e)抗原不相容性输血中以c、E抗原同时不相容占比最高(50.00%);ccDEE、ccDEe和CcDEE表型的受血者发生Rh抗原不相容性输血的概率较高;受血者输注多个供血者血液时,发生Rh抗原不相容性输血的概率最高(P<0.05)。结论临床输血中存在一定比例的Rh抗原不相容性输血,交叉配血前对受、供者进行Rh(D、C、c、E、e)抗原的检测并采取相容性输血,可有效提升临床输血治疗的安全性。

广西百色市3个民族人群RhD阴性和弱表达D表型分布的比较研究

目的对广西百色市壮、汉、苗族人群的Rh血型分布进行调查并与弱表达D表型的分布进行比较研究。方法 ABO血型采用正定玻片法,Rh血型采用Rh抗D单克隆抗体测定,另外对RhD阴性个体应用聚合酶链反应(PCR-SSP)技术检测RhD基因外显子和RhCE基因。结果居住在广西百色市的壮、汉、苗族人群RhD阴性率分别为3.86%、0.93%、8.79%,d基因频率分别为0.187、0.079、0.215。壮族人群RhD阴性血清学表型分布极不平衡,以cde多见,占56.1%,Ccde次之,占29.1%,其他表现型频率较低;34例弱D标本血清学表型主要为cDEe(47.1%)和CcDe(38.2%),其他表型所占频率较少。结论广西百色市壮、苗族等少数民族人群的Rh血型比例较高,可能与本地区Rh溶血症发生率相对较高相关,因此常规检查Rh血型对避免Rh血型不合引起的溶血性输血反应、新生儿溶血具有重要意义。