超声波-酶协同提取西藏猫乳总黄酮工艺及抗氧化活性

以西藏猫乳茎枝为试材,采用超声波-酶协同法提取其中的总黄酮,通过单因素试验与响应面设计法对提取工艺进行优化,得到最佳工艺参数。在该基础上,将超声波-酶协同法与超声波法、酶解法进行比较,考察其抗氧化活性,以期为西藏猫乳的进一步开发利用提供参考依据。结果表明:超声波-酶协同提取西藏猫乳总黄酮最优条件为纤维素酶浓度0.31 mg·mL^(-1)、乙醇浓度53%、酶解pH 5.0、酶解时间2 h、酶解温度50℃、超声温度50℃、液料比40∶1 mL·g^(-1)、超声时间30 min,在该条件下,总黄酮提取量为17.01 mg·g^(-1),提取工艺稳定可靠。与超声波法和酶解法比较,超声波-酶协同提取总黄酮含量较高,且具有更好的DPPH·和ABTS+·清除能力。

藏药“生等”的化学成分研究(Ⅰ)

首次从藏药“生等”，即鼠李科猫乳属植物西藏猫乳Rhamnellagilgitica的干燥心材中分离并鉴定了9个黄酮体化合物，分别是墨沙酮（maesopsin，Ⅰ），香橙素（aromadendrin，Ⅱ），柚皮素（naringenin，Ⅲ），山柰酚（kaempferol，Ⅳ），懈皮素（quercetin，Ⅴ），花旗松素（taxifolin，Ⅵ），顺-4，6，4’-三羟基异噢［（z）-4，6，4’-trihydroxyaurone，Ⅶ］，4，6，4’-三羟基异噢（4，6，4’-trihydroxyisoaurone，Ⅷ），山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖甙（kaempferol-7-O-β-D-glucoside，Ⅸ）．其中化合物Ⅰ为主要成分，得率0．41％；化合物Ⅷ为首次从天然界获得。

藏药“生等”中墨沙酮成分的超临界CO_2萃取工艺研究

用超临界CO2流体萃取法对藏药“生等”（RhamnellagilgilitcaMansf．etMelch．）的主要成分墨沙酮（Maesopsin）的萃取进行了研究，探讨了压力、温度、夹带剂流量对革取效率的影响；并用HPLC法作了含量测定．结果表明，本法提取率约为超声波军取法的1．2倍。

西藏猫乳活性成分研究

首次从西藏猫乳中分离并鉴定了３个化合物，它们是Ｍａｅｓｏｐｓｉｎ（Ⅰ），山奈酚（Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ，Ⅱ）和右旋肌醇甲醚（Ｐｉｎｉｔｏｌ，Ⅲ）．利用二维核磁对（Ⅰ）和（Ⅲ）的全部氢信号和碳信号进行了确切归属，并由此而确定了（Ⅲ）的立体构型。化合物（Ⅰ）为其中主要成分。初步筛选结果显示，化合物（Ⅰ）有较强的抗癌促进因子作用和细胞毒作用。

藏药“生等”的化学成分研究(第2报)

首次从藏药“生等”，[鼠李科猫乳属植物西藏猫乳（Rhamnellagilgitica）Mansf．etMelch）]的干燥心材中分离矿鉴定了6个化合物，一个混合脂肪酸酯及一个混合脂肪酸，它们分别是大黄酚（Chrysophanol，I），没食子酸（Gallicacid，Ⅱ）、β-谷甾醇（β-Sitosterol，Ⅲ）．胡萝卜甙（Daucosterol，Ⅳ）、二十四烷酸（V）、十六烷酸（Ⅵ）、十六与十八烷酸甲酯混合物（Ⅶ），二十二～二十六烷酸混合物（Ⅷ）。

高效液相色谱法测定藏药生等中墨沙酮的含量

用反相高效液相色谱法测定藏药生等心材中墨沙酮的含量。浸泡和超声提取相结合，ＯＤＳ柱，甲醇水（２８∶７２），内含００５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾（ｐＨ４）为流动相，ＵＶ２９０ｎｍ检测。回收率为９８９％。墨沙酮含量为１０２％。

西藏猫乳总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺及其抗氧化活性研究

目的:使用大孔吸附树脂分离纯化西藏猫乳总黄酮,并对纯化后的总黄酮进行体外抗氧化活性研究。方法:通过静态吸附实验考察ADS-F8、D101、AB-8等8种大孔吸附树脂对西藏猫乳总黄酮的纯化效果,并研究样液质量浓度、p H值、上样体积对树脂吸附率的影响以及洗脱液浓度、体积对洗脱率的影响。采用DPPH法、ABTS法和FRAP法,评价纯化后西藏猫乳总黄酮的抗氧化活性。结果:采用ADS-F8型树脂对西藏猫乳进行分离纯化,最佳工艺条件为:上样浓度0.6 mg/mL,p H为3.0,体积23 BV,洗脱剂为60%的乙醇,洗脱体积8 BV。所得西藏猫乳总黄酮纯度由17.18%提高至24.67%,精制倍数为1.44。抗氧化实验结果表明,纯化后西藏猫乳总黄酮对ABTS自由基的清除率可以达到99.15%,DPPH自由基清除率也可达到67.84%,体现出良好的自由基清除能力,并对Fe^3+有较好的还原力,FRAP值最高为939.8μmol/L。结论:ADS-F8型树脂可对西藏猫乳总黄酮进行分离纯化,提高总黄酮纯度,纯化后的总黄酮具有较强的抗氧化作用。

藏药“西藏猫乳”的色谱指纹谱研究

用75％乙醇回流法提取出藏药“西藏猫乳（生等）”的有效成分并浓缩精制后，采用HPI—C梯度洗脱法，在选定的色谱条件{DuPont ZORBAX ODS C18色谱柱（4．6mm×25cm），用甲醇（A）～甲酸铵水溶液（pH=3．5，1．0mL·min^-1，B）进行梯度洗脱（甲醇浓度：0～10min，20％～25％；10～20min，25％～40％；20～55min，40％～55％：55～75min，55％～75％；75～85min，75％～90％），检测波长为290nm}下，对藏药“生等”的提取液进行了有效的分离与检测，并建立了“生等”药材的数字化色谱指纹谱（DFPS）．所建立的方法能对藏药的产地归属进行有效的分辨．

西藏猫乳化学成分研究

目的:研究西藏猫乳Rhamnella gilgitica Mansf.et Melch.心材的化学成分。方法:采用正反相硅胶柱层析、Sephadex LH⁃20柱层析、制备型高效液相等色谱分离方法对西藏猫乳的乙酸乙酯部位进行分离纯化,并结合核磁共振、质谱等波谱学方法进行结构鉴定。结果:从西藏猫乳中分离得到9个化合物,分别鉴定为:(-)⁃南烛木树脂酚(1)、儿茶素(2)、(-)⁃表儿茶素(3)、柚皮素(4)、山柰酚(5)、鼠李柠檬素(6)、芹菜素(7)、(+)⁃丁香脂素(8)、(+)⁃皮树脂醇(9)。结论:其中,化合物1~3、6~9为首次从该植物中分离得到。

基于网络药理学和分子对接技术探讨藏药西藏猫乳抗类风湿性关节炎作用机制

目的通过网络药理学和分子对接技术,探索藏药西藏猫乳治疗类风湿性关节炎(RA)“多成分-多靶点-多途径”的作用机制。方法结合文献和本课题组前期研究获取西藏猫乳的化学成分,通过Swiss Target Prediction数据库查询化学成分对应靶点。通过Drug Bank和Therapeutic Target Database等数据库以“rheumatoid arthritis”为关键词搜索RA靶点;运用Cytoscape3.7.2构建“化学成分-靶点-通路”网络图,通过DAVID进行基因本体(GO)功能富集分析和KEGG通路富集分析,预测其作用机制。采用Maestro version 11.5软件,对核心化学成分与潜在作用靶点进行分子对接验证。用Griess法测定山奈素、芹菜素和鼠李柠檬素对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞一氧化氮(NO)释放的影响,验证其抗炎活性。结果西藏猫乳化学成分可能作用于原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白和胰岛素样生长因子1受体等关键靶点,GO功能富集分析得到GO条目318个(P<0.05),KEGG通路富集筛选得到80条信号通路(P<0.05)。以“化学成分-靶点-通路”网络图设置等级值(degree)≥14为核心化学成分,筛选出了西藏猫乳中9个主要化学成分,通过选取等级值(degree)≥22为潜在作用靶点,得到9个靶点。将上述9个主要化学成分与9个靶点分别进行分子对接,结果显示,鼠李柠檬素与雄激素受体,芹菜素与热休克蛋白90AA1和胰岛素样生长因子1受体,柚皮素与丝裂原活化蛋白激酶8、表皮生长因子受体和人源重组蛋白RELA,山奈素与原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、Tristin和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1,槲皮素与磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1结合最稳定。山奈素、鼠李柠檬素和芹菜素对脂多糖所致RAW264.7巨噬细胞NO释放具有明显的抑制作用(P<0.05),表明该3个化合物确有抗炎作用。结论西藏猫乳通过“多成分-多靶点-多途径”发挥抗RA作用,该作用可能与其调控炎症、免疫、内分泌等相关靶点和通路有关,可为其临床研究提供参考。

藏药松生等醇提物不同极性提取部分体外抗氧化活性研究

目的:通过体外还原力和抗氧化评价方法研究藏药松生等提取物的抗氧化活性。方法:将松生等用70%乙醇浸泡、提取、浓缩所得浸膏依次用石油醚,二氯甲烷,乙酸乙酯,正丁醇、乙醇进行萃取,各组分都配制成适当稀释倍数的溶液,通过普鲁士蓝法、Fenton法和,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法分别测定各组分的还原力,·OH自由基的清除能力以及抗氧化的活性,并计算各组分的IC50。结果:3种抗氧化实验表明乙酸乙酯、正丁醇、乙醇部分都具有明显抗氧化的作用。其中用DPPH法测得的IC50分别是乙酸乙酯0.060 5 g·L-1,正丁醇0.076 3 g·L-1,乙醇0.083 3 g·L-1。结论:提取物清除率与样品浓度存在明显的量效关系,浓度大于1.0 g·L-1时其还原能力几乎接近于维生素(VC),清除能力接近甚至超过60%。其中在大极性溶液层还原力和抗氧化的能力最强。

响应面法优化西藏猫乳总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究

目的:采用响应面法优化西藏猫乳总黄酮提取工艺,并对其抗氧化能力进行考察。方法:利用超声法提取西藏猫乳总黄酮;选取提取温度、提取时间、乙醇浓度、料液比进行单因素实验,在单因素实验基础上,运用Box-Behnken试验设计,以总黄酮提取率为响应值,优化提取工艺;应用DPPH、ABTS及超氧自由基清除等试验,对超声法和回流法所得产物抗氧化能力进行比较。结果:西藏猫乳总黄酮的最优提取工艺参数:料液比为1∶48.42mL/g,提取时间50.00min,乙醇浓度53.33%,温度54.66℃,总黄酮提取率为8.16%。西藏猫乳总黄酮具有良好的抗氧化作用,且超声提取法抗氧化能力优于回流提取法。结论:超声提取法可充分提取西藏猫乳总黄酮,且提取产物具有良好的抗氧化作用。