Regioselective synthesis and initial evaluation of a folate receptor targeted rhaponticin prodrug

To improve the therapeutic effect of rhaponticin （RHA）, a folate receptor （FR） targeted RHA prodrug was designed and regioselectively synthesized by utilizing a hydrophilic peptide spacer linked to folic acid （FA） via a releasable disulfide linker. A series of biological evaluation was investigated in vitro and in vivo. The positive results of biological investigations warrant further preclinical study before this novel targeted chemotherapeutic is considered for clinical investigation.

六味能消制剂中非法成分土大黄苷检测方法的建立

目的建立六味能消丸(胶囊、片)中非法成分土大黄苷的检测方法。方法用薄层色谱法及高效液相色谱-二极管阵列检测器法初步筛查样品中非法成分土大黄苷,并用高效液相色谱-串联质谱法对土大黄苷检测阳性结果进一步进行确证。结果在101批次六味能消丸(胶囊、片)中的12批次六味能消丸中检出土大黄苷。结论所建立的方法专属性强,可有效筛查六味能消制剂中是否含有土大黄苷。

液质联用法定性检测熟大黄配方颗粒中的土大黄苷和番泻苷A

目的:应用液质联用法定性检测熟大黄配方颗粒中土大黄苷和番泻苷A。方法:采用HPLC-MS/MS法同时检测土大黄苷和番泻苷A,使用Welch UHPLC XB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.8μm),采用0.1%甲酸水-甲醇梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL·min^(-1),采用ESI离子源,多反应模式(MRM)模式。结果:该方法对土大黄苷和番泻苷A的检出浓度分别为:2.0 ng·mL^(-1)、8.0 ng·mL^(-1),用该方法检测了山东省内市售的8批熟大黄配方颗粒,均未检出土大黄苷和番泻苷A。结论:该方法专属性强,灵敏度好,能快速定性检查熟大黄配方颗粒中是否含有土大黄苷和番泻苷A,可用于熟大黄(药用大黄)配方颗粒的质量控制。

大黄通便片中非法成分土大黄苷的定性筛查和定量测定研究

目的:建立大黄通便片中土大黄苷的定性筛查和定量测定方法。方法:采用薄层色谱(TLC)法初筛,高效液相色谱(HPLC)法定量测定及超高效液相色谱-质谱联用(UHPLC-MS)法定性确证。结果:TLC法检测结果显示专属性强,耐用性好。HPLC法方法学考察结果显示:土大黄苷质量浓度在2.59~259.6μg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系(R^(2)=0.9999);精密度、重复性、稳定性试验RSD均小于2.0%;平均加样回收率为97.89%(RSD=0.61%)。UHPLC-MS/MS法确证结果与TLC、HPLC法结果一致,阳性检出样品与土大黄苷对照品呈现同一保留时间的提取离子对(421.1→258.9,421.1→199.0)。结论:该方法灵敏、准确,可作为大黄通便片中非法成分土大黄苷的检查方法。

UPLC法同时测定复方龙胆碳酸氢钠片中10种大黄蒽醌类成分及土大黄苷的含量

目的 建立同时测定复方龙胆碳酸氢钠片中10种大黄蒽醌类成分和伪品特征成分土大黄苷含量的方法,用于含大黄复方制剂的质量评价。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)法对8个生产企业40批次复方龙胆碳酸氢钠片中10种大黄蒽醌类成分(芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)和土大黄苷的含量进行测定。色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为5μL。结合主成分分析与聚类分析对含量测定结果进行综合分析,并对不同企业样品进行质量评价。结果 上述11种成分在各自检测质量浓度范围内线性关系均良好(r≥0.999 3),精密度、重复性、稳定性试验的RSD均小于3%(n均为6),平均加样回收率为96.82%~98.92%(RSD≤1.74%,n=6);含量分别为0.011 7~0.252 0、0~0.323 3、0.131 3~1.236 6、0.081 1~1.056 2、0.015 2~0.189 8、0.001 8~0.152 3、0~0.255 2、0.001 9~0.223 4、0.054 3~0.303 0、0.022 7~0.172 2、0~2.835 9 mg/g。3个主成分的累计方差贡献率为95.533%;40批次样品可分为4类:a和d企业的样品分别自成一类,f、b、g、e企业的样品为一类,c、h企业的样品为一类。8家生产企业样品中的大黄蒽醌类成分含量存在较大差异,且有1家企业的样品检出了土大黄苷。结论 所建UPLC法稳定、可靠,可用于复方龙胆碳酸氢钠片中10种大黄蒽醌类成分及土大黄苷的含量测定。

华北大黄愈伤组织培养及土大黄苷含量研究

为有效保护和利用华北大黄野生资源,以野生华北大黄为材料,探讨了不同种类、不同质量浓度的植物生长调节剂对其愈伤组织诱导及增殖效应,并采用高效液相色谱对愈伤组织及野生植株中土大黄苷含量进行了分析.结果表明：MS培养基中单独添加不同质量浓度的6-BA,不利于愈伤组织的增殖;培养基中单独添加不同质量浓度的NAA和2,4-D,对愈伤组织的增殖有一定作用;6-BA分别与低质量浓度NAA及2,4-D配合使用时,对愈伤组织的增殖效应十分明显.3种不同类型的愈伤组织中均检出土大黄苷,其中2种愈伤组织土大黄苷的质量分数高达1.45%~1.54%,为野生植株的3.63~3.85倍.

三黄片质量情况分析及标准修订的建议

针对三黄片的质量问题,建立了土大黄苷和盐酸巴马汀的薄层色谱检查方法,并建立了高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量的方法,对三黄片质量标准的进一步修订提供了实验依据。

大黄药材及饮片的土大黄苷新检查方法

目的:建立可靠的土大黄苷检查方法。方法:对传统方法、中国药典方法检查土大黄苷进行了研究,在此基础上建立了以土大黄苷为对照的薄层色谱法和高效液相色谱法检查大黄药材及饮片中土大黄苷。结果:土大黄苷薄层检查法对大黄药材及饮片的检查均适用。采用高效液相色谱法对番泻苷和土大黄苷在同一色谱条件下测定,不仅能鉴别正伪品大黄药材及饮片,还能检出掺伪土大黄的大黄药材及饮片。结论:该薄层色谱法和高效液相色谱法准确可靠,可用于大黄药材及饮片的质量控制。

HPLC测定河套大黄中的土大黄苷含量

从河套大黄中分离纯化出活性成分土大黄苷,作为自制的标准品,利用Kromasil^(TM) C_(18)(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm)反相色谱柱,以V(甲醇):V(乙腈):V(水)=35:5:60为流动相,以320 nm为检测波长,对河套大黄中土大黄苷进行测定。土大黄苷在0.427～4.190μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9994),平均回收率为99.12%。该方法为河套大黄的质量控制奠定了基础。

土大黄苷与牛血清白蛋白结合反应机制及金属离子的介导作用

应用荧光光谱法结合紫外-可见分光光度法研究了中药分子土大黄苷(rhaponticin,RT)与牛血清白蛋白(bovineserum albumin,BSA)的结合反应机制,并考察了金属离子的介导作用。依据不同理论模型测定了反应体系的结合常数K、结合位点数n,并进行了分析比较,探讨了荧光猝灭机制。根据Fōrster非辐射能量转移机制确定了授体-受体间结合距离和能量转移效率。采用同步荧光技术考察了RT对BSA分子构象的影响。结果表明:不同理论模型计算的结合参数基本相符并显示出RT与BSA结合反应形成了稳定的静态复合物,RT对BSA分子的结构域微区构象产生了影响,导致BSA相应结构微区疏水环境改变。金属离子钴(Ⅱ),镍(Ⅱ)竞争RT与BSA的结合反应,使BSA-RT的结合距离发生改变。同时,提出了一个新变量-伸展度ED的计算公式,以此定量表征药物分子对蛋白质分子微区构象的影响。

环糊精修饰混合胶束电动色谱法测定大黄中6种有效成分

目的 分离、测定大黄样品中 6种有效成分。方法 用 2 0mmol·L- 1 硼砂缓冲溶液 (含 2 0mmol·L- 1 脱氧胆酸钠、2 0mmol·L- 1 牛磺胆酸钠和 15mmol·L- 1 β 环糊精 ) ,通过环糊精修饰的混合胶束电动色谱内标定量法测定。 结果 在 2 5min内分离出芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、土大黄苷、大黄素甲醚和大黄酚 ,对缓冲溶液pH、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠和 β 环糊精浓度等分离条件进行了优化。考察了方法的线性行为、精密度和回收率 ,并对生大黄和蒙古大黄样品进行了测定。结论 本法可作为鉴别大黄优劣的有效方法之一。

土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响

目的:观察土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响。方法:Annexin V-FITC/PI双标法检测100、200、400μmol/L土大黄苷对SK-BR-3细胞凋亡的影响,Western blot法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达情况,试剂盒检测caspase-3的活性变化。结果:土大黄苷可诱导SK-BR-3细胞出现明显的早期凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05～P<0.01)。土大黄苷在100、200、400μmol/L浓度时均可抑制Bcl-2蛋白的表达,且随着其浓度的增加,蛋白表达逐渐降低,并促进Bax蛋白的表达(P<0.01)。土大黄苷对caspase-3具有激活作用,且随着土大黄苷浓度的增加,caspase-3的活化程度逐渐增强。结论:土大黄苷具有诱导乳腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及激活caspase-3有关(P<0.01)。

叶酸受体靶向土大黄苷前药与HSA相互作用研究

目的从分子水平上研究叶酸受体靶向土大黄苷前药(FRHA)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的结合作用。方法模拟生理条件,采用荧光光谱和紫外-可见光谱研究FRHA与HSA结合反应的光谱学特征,探讨药物对蛋白质内源性荧光的淬灭机制,并结合三维、同步荧光光谱和圆二色谱分析FRHA对HSA微环境及构象的影响。结果 FRHAHSA复合物的形成将导致HSA发生荧光淬灭,298、302、306和310 K时FRHA与HSA相互作用的结合常数分别为1.4322×105、1.1793×105、0.9334×105和0.7896×105L/mol。由实验计算出热力学参数焓变ΔH为-38.772 k J/mol,熵变ΔS为-31.39 J/(mol·K)。结论 FRHA-HSA复合物的形成是自发进行的,范德华力和氢键作用力是使该复合物稳定的主要作用力,并且复合物的形成使HSA的微环境和构象发生改变,进而导致HSA发生荧光淬灭,淬灭机制为静态淬灭。

HPLC法鉴别大黄及部分含大黄中成药的真伪

目的:建立大黄及三黄片的真伪鉴别方法。方法:采用HPLC法测定其中的土大黄苷;色谱柱为Agilent analytical TC-C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(25∶75),检测波长为323nm。结果:正品大黄和以正品大黄投料所生产的三黄片中均未检出土大黄苷,而3种伪品大黄中均检出土大黄苷。结论:所建立的方法专属性强、灵敏度高、重现性好,能用于鉴别大黄及部分含大黄中成药的真伪。

薄层色谱法鉴别大黄饮片真伪

目的建立一种以土大黄苷为检测指标,定性鉴别中药大黄饮片真伪的薄层色谱(TLC)方法。方法以甲醇为提取溶剂,用超声波提取的方法制备供试品溶液,以硅胶G板为固定相,苯-甲酸乙酯-甲酸-甲醇(30:10:0.1:15)为展开剂展开,紫外光(365 nm)下检视。结果华北大黄和河套大黄两种伪品大黄饮片的薄层色谱中检出土大黄苷,正品大黄饮片中未检出;对市售的10批大黄饮片进行TLC鉴别,有50%检出土大黄苷成分。结论该方法操作简便、结果准确、专属性强,可用于大黄饮片的真伪鉴别,有一定的应用价值。

毛脉酸模果实不同部位中大黄素及白藜芦醇的含量分析

目的考察毛脉酸模果实不同部位中大黄素及白藜芦醇的含量,为其合理开发利用提供理论依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法分析大黄素及白藜芦醇的含量。结果毛脉酸模一等种子的大黄素及白藜芦醇含量均高于二、三等种子,大黄素在花被片中含量较高,白藜芦醇在一等种子中含量较高。结论在生产中,选择果实入药较种子更经济、简便。

牛黄消炎片中土大黄苷的检查方法研究

目的:建立牛黄消炎片中土大黄苷的检测方法。方法:通过使用聚酰胺薄膜进行薄层色谱快速筛查;采用Prevail^(TM) C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行HPLC法验证,以甲醇-乙腈-水(30:7:63)为流动相,流速1 ml/min,检测波长320 nm;采用负离子模式电喷雾离子源进行HPLC-MS/MS法验证,对土大黄苷的准分子离子峰m/z 419[M-H]-进行二级质谱分析。结果:经薄层色谱法检测,测试样品中17批样品在与土大黄苷对照品R_(f)值一致的位置有相同颜色荧光斑点检出。经HPLC法验证,17批阳性样品在与土大黄苷保留时间相同的位置均有色谱峰检出,并且在280~400 nm波长范围的吸收光谱与土大黄苷对照品相同。17批阳性样品进一步经HPLC-MS/MS分析,均检测到土大黄苷准分子离子峰,且二级扫描质谱图与对照品一致。结论:建立的检测方法专属性强,准确可靠,可用于牛黄消炎片中土大黄苷的检测。

HPLC-荧光法测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数

目的建立测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数的高效液相色谱(HPLC)-荧光法。方法采用SHIMPACK VP-ODS色谱柱;以甲醇-水(40∶60)为流动相,流速为0.8mL/min;进样量为10μL;激发波长为320nm,发射波长为410nm,测定土大黄苷在37℃水和不同pH值介质中的平衡溶解度以及在正辛醇-水、正辛醇-缓冲溶液体系中的油水分配系数。结果在37℃条件下,土大黄苷在水中的平衡溶解度为109.54mg/L;在pH为8.0时溶解度最大,为126.12mg/L;土大黄苷在正辛醇-水中的油水分配系数logP值为0.53;在pH为6.0的缓冲溶液中油水分配系数最大,logP为0.76。结论本研究建立了HPLC-荧光检测法,成功应用于测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数,为土大黄苷剂型的开发及药代动力学研究提供了理论依据。

TLC、HPLC、UPLC-MS法联合定性检查厚朴排气合剂中的土大黄苷

目的建立厚朴排气合剂中土大黄苷的检测方法。方法采用薄层色谱(TLC)法鉴别土大黄苷,采用高效液相色谱(HPLC)法和超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)法对土大黄苷进行定性分析。结果 2批次产品中检出土大黄苷。结论所建立的方法专属性强,灵敏度高,重现性好,可作为该类产品是否含有土大黄苷的检测方法。

基于2015年版《中华人民共和国药典》探讨真伪大黄鉴别的关键指标土大黄苷的最佳检测方法

目的建立操作简便、专属性强的大黄中土大黄苷检查方法。方法通过对比聚酰胺、硅胶薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)检测大黄药材中的土大黄苷的研究,考察鉴别正、伪品大黄的最佳方法。结果采用聚酰胺、硅胶TLC方法检查大黄中土大黄苷的耐用性较差,HPLC更适用于土大黄苷的检测。结论本研究确定的HPLC方法准确可靠,可用于大黄药材的质量控制,为药典用大黄的真伪鉴别提供参考。