Inhibition of Hepatitis B Virus Replication by Rheum palmatum L. Ethanol Extract in a Stable HBV-producing Cell Line

肝炎 B 病毒(HBV ) 感染是在世界上的一个严重健康问题。然而，仍然为 HBV 感染没有令人满意的治疗学的策略。到为有更高的功效和更少的副作用的新 anti-HBV 代理人的搜索，繁体中文药感冒 palmatum L 的禁止的活动。对 HBV 复制的乙醇摘录(RPE ) 在这研究被调查。量的即时聚合酶链反应(PCR ) 被采用在稳定的生产 HBV 房间线 HepAD38 对 HBV-DNA 复制分析 RPE 的禁止的活动；HBV 表面抗原(HBsAg ) 和 e 抗原(HBeAg ) 的表示层次被酶也决定在 RPE 处理以后的连接 immunosorbent 试金(ELISA ) 。RPE 能 dose-dependently 禁止 HBV-DNA 和 HBsAg 的生产。50% 抑制(IC50 ) 的集中在 209.63 点被计算， 252.53 渭 g /mL， respectivel y。然而，它对 HBeAg 表示的禁止的活动甚至在高集中是细微的。RPE 在 HepAD38 房间上有弱细胞毒素的效果(CC50 = 1 640 渭 g /mL ) 并且选择索引(SI ) 在 7.82 点被计算。与二 anthraquinone 衍生物 emodin 和 rhein 相比， RPE 显示出 anti-HBV 和更弱的 cytotoxicity 的更高的能力。那么感冒 palmatum L。可能拥有能有效地禁止 HBV-DNA 复制和 HBsAg 表示的另外的功能的代理人。他们改进功效并且减少的结构的活跃代理人，鉴定和修正的进一步的纯化 cytotoxicity 被要求。关键词肝炎 B 病毒(HBV )- 抗病毒 - 感冒 palmatum L.ethanol 摘录(RPE )- HepAD38 房间 CLC 数字 R373 同等地相应的作者。

Rheum palmatum L. and Salvia miltiorrhiza Bge. Alleviates Acute Pancreatitis by Regulating Th17 Cell Differentiation: An Integrated Network Pharmacology Analysis, Molecular Dynamics Simulation and Experimental Validation

Objective: To identify the core targets of Rheum palmatum L. and Salvia miltiorrhiza Bge.,(Dahuang-Danshen, DH-DS) and the mechanism underlying its therapeutic efficacy in acute pancreatitis(AP)using a network pharmacology approach and validate the findings in animal experiments. Methods: Network pharmacology analysis was used to elucidate the mechanisms underlying the therapeutic effects of DH-DS in AP. The reliability of the results was verified by molecular docking simulation and molecular dynamics simulation.Finally, the results of network pharmacology enrichment analysis were verified by immunohistochemistry,Western blot analysis and real-time quantitative PCR, respectively. Results: Sixty-seven common targets of DH-DS in AP were identified and mitogen-activated protein kinase 3(MAPK3), Janus kinase 2(JAK2), signal transducer and activator of transcription 3(STAT3), protein c-Fos(FOS) were identified as core targets in the protein interaction(PPI) network analysis. Gene ontology analysis showed that cellular response to organic substance was the main functions of DH-DS in AP, and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes analysis showed that the main pathway included Th17 cell differentiation. Molecular docking simulation confirmed that DH-DS binds with strong affinity to MAPK3, STAT3 and FOS. Molecular dynamics simulation revealed that FOS-isotanshinone Ⅱ and STAT3-dan-shexinkum d had good binding capacity. Animal experiments indicated that compared with the AP model group, DH-DS treatment effectively alleviated AP by inhibiting the expression of interleukin-1β, interleukin-6 and tumor necrosis factor-α, and blocking the activation of Th17 cell differentiation(P<0.01). Conclusion: DH-DS could inhibit the expression of inflammatory factors and protect pancreatic tissues,which would be functioned by regulating Th17 cell differentiation-related m RNA and protein expressions.

掌叶大黄(RheumpalmatumL.)WRKY基因家族鉴定与分析

【目的】本研究为开展WRKY基因功能验证提供基础,进而为大黄药材品质形成的转录调控机制研究提供科学依据。【方法】基于掌叶大黄(R.palmatum L.)的全长转录组数据,通过生物信息学方法鉴定掌叶大黄WRKY基因家族成员,分析其蛋白理化性质、结构域、系统发育关系、蛋白互作,结合转录组数据进行不同组织和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理的表达谱分析。【结果】掌叶大黄WRKY基因家族包含53个成员,编码蛋白氨基酸数量为192-748,均为亲水性蛋白,预测定位均在细胞核。掌叶大黄WRKY基因家族与拟南芥WRKY基因家族成员进化树可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个亚族,其中Ⅱ亚族WRKY占比最高(58.49%)。转录组数据分析显示掌叶大黄WRKY基因家族成员在掌叶大黄根、根茎和叶中差异表达,其中7个基因在根和根茎中表达量较高,12个基因响应MeJA处理呈差异表达,其中10个被MeJA显著诱导,4个候选基因RpWRKY5/6/9/33的qPCR分析与其转录组结果基本一致。蛋白互作网络显示RpWRKY2/16/20/22/23与查尔酮合酶(chalconesynthase,CHS)发生相互作用。【结论】获得53个掌叶大黄WRKY基因、生物信息、组织及响应MeJA的表达特征,其中5个可能与大黄蒽醌类物质的合成有关。

甘肃铨水大黄的HPLC指纹图谱研究

目的:建立甘肃铨水大黄药材HPLC指纹图谱分析方法,为铨水大黄的质量控制提供依据。方法:用Cosmosil 5C18-PAQ(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速:1 mL/min,柱温:30℃,检测波长:280 nm;测定收集的21份大黄样品,对数据进行相似度评价、主成分分析和聚类分析。结果:建立了铨水大黄HPLC指纹图谱分析方法;根据相似度评价、主成分分析和聚类分析结果,筛选10份样品建立了铨水大黄的特征指纹图谱。结论:在建立的HPLC条件下各成分分离较好,可用于铨水大黄的分析和质量控制。

HPLC法同时测定荜茇-大黄中6种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定荜茇-大黄药对中胡椒碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。方法采用Thermo Hypersil BDS C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 ml/min;检测波长254 nm;柱温30℃。结果各成分色谱峰分离度良好,胡椒碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的质量浓度分别在6.02~240.72μg/ml(r=0.9996)、1.85~74.18μg/ml(r=0.9993)、1.79~71.78μg/ml(r=0.9996)、1.59~63.55μg/ml(r=0.9995)、5.42~216.72μg/ml(r=0.9992)、1.62~64.64μg/ml(r=0.9997)内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.61%(RSD=1.50%)、99.48%(RSD=1.11%)、99.10%(RSD=1.31%)、99.72%(RSD=1.29%)、99.88%(RSD=1.25%)、99.06%(RSD=0.97%)。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于荜茇-大黄药对的质量控制。

HPLC法测定大黄提取物中芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量

建立了同时测定大黄提取物中芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的HPLC方法。色谱条件:色谱柱为Prontosil-C18-ace-Eps(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(90∶10,体积比),流速1.0mL.min-1,检测波长254nm,柱温25℃,进样量20μL。结果表明,芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1.3～10.4μg·mL-1、1.3～6.5μg·mL-1、3.0～12.0μg·mL-1范围内线性关系良好,R2分别为0.9997、0.9999、0.9992,平均加标回收率分别为115.5%、98.1%、99.9%。该方法操作简单、结果准确、灵敏度高,可用于大黄提取物的质量控制。

不同施肥量与益生菌对掌叶大黄生长和土壤微生物组成的影响

目的:分析化肥和益生菌对掌叶大黄根茎初生和次生代谢、药用成分含量和土壤微生物群落组成的影响,为合理施肥提供参考。方法:对掌叶大黄幼苗进行2个施肥量(适量施肥、过量施肥)和添加3种益生菌(枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌、解淀粉芽孢杆菌)处理;通过非靶向代谢组学分析不同处理对掌叶大黄根茎初生和次生代谢的影响;采用高效液相色谱法分析不同处理掌叶大黄根茎蒽醌含量的差异;通过16S rRNA测序和内转录间隔区测序分析不同处理掌叶大黄根际土壤微生物群落组成和多样性。结果:适量施肥和过量施肥均能显著增加掌叶大黄叶片和根茎的质量。在适量施肥的基础上添加益生菌处理,哈茨木霉菌和解淀粉芽孢杆菌对掌叶大黄根茎生长的促进作用优于枯草芽孢杆菌。在物质代谢方面,适量施肥和过量施肥均导致掌叶大黄根茎氨基酸水平升高,但过量施肥导致掌叶大黄根茎糖类和脂类水平降低。与适量施肥比较,哈茨木霉菌能够显著提高掌叶大黄根茎糖类、氨基酸和脂类水平,而解淀粉芽孢杆菌则导致糖类和氨基酸水平降低。在药用成分方面,过量施肥和解淀粉芽孢杆菌处理蒽醌含量明显偏低,适量施肥、枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌处理蒽醌含量较高。施肥对细菌群落组成影响较小,对真菌群落组成影响较大,施肥会导致土壤真菌中多种潜在病原菌(如楔孢黑粉菌属)丰度增加而使真菌整体丰度和多样性降低,益生菌处理(如枯草芽孢杆菌)能减轻施肥带来的影响。结论:综合掌叶大黄生长和药用成分含量情况,在多种施肥组合中,哈茨木霉菌能够较好地促进掌叶大黄根茎生长,并使其具有良好的营养状况和较高的药用成分含量。在保持或改善掌叶大黄种植土壤微生物群落多样性方面,枯草芽孢杆菌具有较好的效果。

化学修饰L02肝细胞膜生物亲和材料快速筛选大黄降血脂活性成分

为增加细胞膜生物亲和材料使用寿命,建立以APTES修饰硅胶为载体的L02细胞膜生物亲和材料,并将其应用于大黄降血脂活性成分的快速筛选。采用油酸刺激L02肝细胞,建立肝脂肪变性模型;硅胶与APTES、戊二醛发生反应,在硅胶表面引入醛基,游离醛基与细胞膜上富含的氨基通过共价键连接;扫描电镜和红外光谱进行表征;对大黄30%乙醇提取液进行吸附,HPLC分析吸附结果。通过扫描电镜证实材料表面覆盖有一层细胞膜,红外光谱也出现3442、2942 cm^(-1)的-NH键特征吸收峰,表明材料制备成功;HPLC分析表明:11种化学成分被特异性吸附,分别为:芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚及2种未知成分。制备的化学修饰L02肝细胞膜生物亲和材料能够延长使用次数,也可用于大黄及其他中药降血脂活性成分的快速筛选。

HPLC法分析不同年限及不同部位掌叶大黄9种成分的积累特征

为研究不同年限及部位掌叶大黄9种成分含量及其变化特征。利用HPLC法进行分析,色谱柱为武本C18 (5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-磷酸水(0.2%),检测波长260 nm,柱温30℃,体积流量1.0 mL/min,进样量10μL。线性范围良好(R^2>0.995),精密度、稳定性、重复性RSD均小于2%,加样回收率97.30%~108.20%。含量分析表明:同一部位,随着年限增加,除根中没食子酸、根茎中大黄素、叶片中大黄酚的含量无变化外,其他8成分的含量均随年限增加而增加或者第4年增加、第5年无显著变化。同一年限,大黄酚-8-O-葡萄糖苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量次序为根>根茎>叶片;3年生芦荟大黄素,4年生没食子酸、番泻苷B叶片中含量与根中大致相等且高于根茎;5年生大黄素-8-O-葡萄糖苷的含量次序为叶片>根茎>根,根与根茎中没食子酸、大黄酚的含量相当且高于叶片。本实验成功建立简便快捷、重现性好的HPLC分析方法,明确了不同年限及部位掌叶大黄9种成分积累特征,为大黄质量评价和药材高效生产提供理论依据。

HPLC法测定大黄配伍肉桂后水煎液中大黄酚含量

建立高效液相色谱法测定大黄配伍肉桂后水煎液中大黄酚含量的方法,对不同配伍比例下水煎液中大黄酚含量的变化进行研究.采用热回流法提取样品中的大黄酚,利用HPLC测定提取液中游离态及结合态大黄酚的含量.结果表明,大黄与肉桂配伍后水煎液中大黄酚含量呈现不同程度的下降,并且随配伍比例的变化呈规律性变化,大黄肉桂配伍比例为2∶1时,大黄酚的含量最低.该方法快速、准确、重复性好,可用于大黄配伍肉桂大黄酚含量的测定.

基于UPLC-Q/TOF-MS研究掌叶大黄酒蒸前后的化学成分变化

目的基于UPLC-Q/TOF-MS技术,分析掌叶大黄Rheum palmatum酒蒸前后的化学成分,运用植物代谢组学方法对掌叶大黄酒蒸前后化学成分进行对比,研究掌叶大黄酒蒸前后的化学成分变化。方法采用ACQUITY UPLC?HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,体积流量0.3 mL/min,在负离子模式下采集掌叶大黄生品及酒蒸品样品数据,并在此基础上使用正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)研究8个不同产地、批次掌叶大黄炮制前后化学成分的差异。结果全面分析了8批掌叶大黄生熟品的化学成分,共指认出115个成分(鉴定106个),包含糖类3个、鞣质类40个、酚酸类2个、黄酮类20个、二苯乙烯类6个、苯丁酮类6个、蒽醌类22个、色原酮类1个、蒽酮类6个,以及9个未知成分。基于植物代谢组学分析,发现酒蒸前后掌叶大黄化学成分明显不同,与掌叶大黄生品比较酒蒸后鞣质类、黄酮类、蒽醌类等6类共30个化学成分呈现差异,其中有6个成分酒蒸后显著上调,即没食子酸、儿茶素-7-O-葡萄糖苷、儿茶素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷和山柰酚;香叶木素-7-O-新橙皮苷、没食子酸-3-O-葡萄糖苷、1,6-二-O-没食子酰葡萄糖苷等22个成分酒蒸后显著下调。结论掌叶大黄炮制前后化学成分结构发生改变,鞣质聚合体向鞣质单体转化,多级糖苷向次级糖苷和苷元转化,进一步阐释了掌叶大黄酒蒸加热过程成分变化的规律。

大黄蒽醌致泻作用及其机理的初步研究

目的比较大黄结合蒽醌、游离蒽醌致泻作用的强度并探讨其相关机制。方法通过灌服高浓度的奶粉溶液以营造高营养性环境,在此基础上考察了大黄结合蒽醌及游离蒽醌对小鼠的致泻作用;并运用析因设计分析了奶粉在这些致泻作用中的作用,同时还考察了大黄结合蒽醌及其游离蒽醌体外对胃蛋白酶活性的影响。结果大黄游离蒽醌500,1000mg/kg均可使小鼠胃内容物和小肠内容物显著增加;大黄结合蒽醌500,1000 mg/kg也可显著增加小鼠小肠内容的重量,但对小鼠胃内容重量的影响作用较弱;各药物组均可显著增加小鼠各肠段内的蛋白质浓度。析因设计的实验结果显示,无论是大黄游离蒽醌或是结合蒽醌均可显著增加正常小鼠(未加用奶粉)的胃、小肠及全胃肠道的内容物及蛋白质的含量,并可显著降低小鼠小肠、结肠Cl-浓度和升高小鼠结肠K+浓度;奶粉本身也具有与大黄蒽醌类似的作用,与之合用可增强大黄蒽醌的作用。体外实验结果显示,无论是大黄游离蒽醌或是结合型蒽醌对胃蛋白酶的活性均无明显影响。结论大黄游离蒽醌和结合蒽醌均具有显著的致泻作用;其机理可能是通过刺激胃肠道分泌、增加胃肠道内蛋白质浓度而产生容积性导泻。

不同产地加工方法对掌叶大黄药材质量的影响

目的:优选掌叶大黄药材的最佳产地加工方法。方法:将大黄趁鲜切片加工,以晒干法、阴干法、微波法、不同温度烘干等不同方式干燥,其加工品的折干率、蒽醌衍生物含量及横切面质地和色泽变化与传统加工方法比较。结果:趁鲜切制对掌叶大黄药材折干率影响不大,但能明显降低蒽醌类成分含量,药材横切面色泽褐变明显;不同干燥方式以熏干法的蒽醌类成分含量、横切面色泽质量最好,阴干和微波法其次,80℃烘干最差。结论:掌叶大黄产地加工不宜趁鲜切片加工,干燥方式以传统的熏干法最好。

掌叶大黄毛状根培养及培养物中蒽醌类成分分析

大黄是我国特产的世界著名的传统中药，历代本草均有记载，始载于《神农本草经》，“味苦寒，有毒。主下瘀血、血闭、寒热，破征瘕积聚、留饮宿食，荡涤肠胃，推陈致新，通利水谷，调中化食，安和五脏”。作者已于近期报道了天山大黄发根的诱导方法［１］掌叶大黄Ｒｈｅｕ...

掌叶大黄不同炮制品指纹图谱与其止血作用的灰关联度分析

目的确定掌叶大黄不同炮制品指纹图谱特征峰所代表的化学成分对其止血作用贡献大小顺序,为建立"指纹图谱与药效关联"的中药质量控制模式提供理论依据和数据支持。方法用HPLC法研究掌叶大黄不同炮制品水提取物指纹图谱;用小鼠剪尾尖法研究其止血作用;用灰关联度分析方法研究其谱效关系。结果掌叶大黄不同炮制品的止血作用是其所有化学成分共同作用的结果,各特征峰所代表的各化学成分(以特征峰编号作为该特征峰所代表的化学成分名称)对其止血作用贡献的大小顺序为:4>1>8>2>31>29>18>39>17>15。结论掌叶大黄不同炮制品指纹图谱与其止血作用之间有一定的对应关系。

掌叶大黄叶资源的开发与利用

对掌叶大黄叶中的药用成分做了定性分析,运用凯氏定氮法和液相色谱仪对粗蛋白和氨基酸的含量进行了测定。实验结果表明:掌叶大黄叶中含有多种药用成分,含有除色氨酸以外的7种人体必需氨基酸,粗蛋白含量在叶及叶柄中分别为干重的0 5712%和1 896%。在此基础上,对掌叶大黄叶资源的开发与利用进行了讨论。

超临界CO_2流体萃取大黄游离蒽醌的研究

研究了带夹带剂的超临界流体萃取大黄中的五种有效蒽醌类物质(大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和大黄素甲醚)的工艺,考察了萃取条件(温度和压力)、CO2流量、萃取时间、夹带剂种类等对大黄游离蒽醌萃取率的影响。通过正交实验对萃取釜条件(萃取压力、温度和夹带剂用量)进行了优化;采用液相色谱对萃取产物进行了分析。结果表明,分离釜的温度和压力、CO2流量等对萃取效率影响较小;最佳工艺条件为:静萃取时间为60min、动萃取时间为30min、以乙醇作夹带剂、乙醇用量300mL·(100g大黄)-1、萃取温度45°C、萃取压力45MPa。在此条件下大黄游离蒽醌的萃取量达1.15%。

不同碳源对掌叶大黄毛状根生物量和蒽醌产量的影响

目的研究不同碳源对掌叶大黄毛状根生物量和蒽醌产量的影响。方法选取3个克隆的掌叶大黄毛状根和非转化根,采用统计分析方法,对7种糖作为培养基碳源时对大黄根生物量的积累和5种蒽醌类化合物的产量的影响进行了研究。结果不同糖作为碳源对大黄根生物量积累和蒽醌产量有极显著影响。大黄根类型与糖种类互作分析显示,DH 7a与麦芽糖对于蒽醌产量来说是优势组合,而DH 5a和DH 5c在蔗糖和果糖差异不显著,非转化根在蔗糖作碳源的培养基中蒽醌产量极显著地高于其他6种糖。结论果糖作为碳源最利于大黄根培养的生物量的积累,蔗糖作为碳源时大黄根蒽醌产量最高。

稀土元素镧对掌叶大黄毛状根和非转化根生长及蒽醌产量的影响

目的 研究不同浓度的稀土元素镧(La2+)对3种大黄根生物量和蒽醌次生代谢产物产量的影响。方法采用统计学分析方法,研究稀土元素La3+对两种掌叶大黄单克隆毛状根DH5c、DH7a和液体培养非转化根NOR生物量和蒽醌化合物合成的影响。结果 La3+浓度对大黄根生物量积累有显著影响,培养基中La3+为10 mg/L时,对大黄根生长表现出明显的抑制作用;La3+浓度对3种大黄根的蒽醌产量有极显著影响,当培养基中La3+1.0mg/L时,蒽醌产量最高;经稀土离子处理的3种大黄根中芦荟大黄素和大黄酸显著高于大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。结论 培养基中添加适宜浓度的稀土离子La3+对掌叶大黄单克隆毛状根的生物量积累和蒽醌类化合物的合成具有明显的促进作用。