基于PLS-DA的盘龙七及其易混品大盘龙七差异性成分分析

目的:确定盘龙七及其同名异物药材大盘龙七的差异性成分并建立其含量测定方法。方法:采用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)结合超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)分析盘龙七和大盘龙七差异性成分,并建立差异性成分定性、定量分析方法。结果:PLS-DA结果显示以t检验(P<0.05)和变量重要性投影(VIP)值(VIP>1.0)为标准,筛选出盘龙七和大盘龙七差异性成分共296个。对排名靠前的差异性成分进行表征分析,进一步筛选出符合碎片裂解规律及文献记载的差异性成分共8个,其中绿原酸、没食子酸、岩白菜素3个成分含量差异最显著。结论:该方法能有效分析盘龙七和大盘龙七的差异性,为盘龙七及大盘龙七的质量评价及定性、定量分析提供参考。

HPLC法测定盘龙七中岩白菜素的含量

[目的]建立盘龙七中岩白菜素含量的测定方法。[方法]采用高效液相色谱法,以Kromasil-C18为色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,乙腈-0.2%磷酸溶液（V/V,10∶90）为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为275 nm,柱温为35℃,测定盘龙七中岩白菜素的含量。[结果]岩白菜素在0.248~1.240μg/ml范围内呈良好的线性关系（r=0.997 9）,平均回收率为100.95%,RSD为2.47%（n=6）。[结论]该方法处理简单,重复性好,结果准确,可用于盘龙七中岩白菜素的含量测定。

盘龙七中岩白菜素的超声提取工艺研究

采用超声辅助乙醇提取盘龙七中的岩白菜素,考察了提取溶剂浓度、提取时间、提取次数和料液比对岩白菜素提取率的影响。结果表明,超声提取岩白菜素的最佳工艺为:50%乙醇,提取3次,提取时间30 min,料液比为1∶8 g/m L。在此条件下,岩白菜素提取率为2.64%(RSD=1.0%,n=5)。

响应面法优化盘龙七中岩白菜素的提取工艺

为优化盘龙七药材中岩白菜素的超声提取工艺,在单因素实验的基础上,利用响应面分析方法建立了盘龙七岩白菜素的超声提取功率、超声提取时间、乙醇浓度和提取温度的二次响应曲面方程。结果表明,对盘龙七岩白菜素提取率影响的大小次序为:超声提取温度、超声功率、乙醇浓度和超声提取时间。盘龙七岩白菜素超声提取工艺的最佳条件为:提取温度为59℃、超声功率270 W、乙醇浓度75%,提取时间40 min/次,料液比1∶30,提取3次,在此条件下盘龙七岩白菜素得率为6.429%,与模型预测值6.432%高度相符。

HPLC测定不同产地盘龙七中没食子酸的含量

[目的]建立高效液相色谱法测定盘龙七中没食子酸含量的方法,并测定14个不同产地盘龙七中没食子酸的含量.[方法]高效液相色谱法,Inertsil ODS-3C18（4.6×150 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液（7∶93）,流速1.0 ml/min,检测波长271 nm,柱温30 ℃.[结果]没食子酸在5.3～ 53.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系,Y=31 446X-15 550（R2 =0.999 9）,平均加样回收率99.995％,RSD为1.704％.不同产地盘龙七中没食子酸的含量不同,其含量随产地的不同而显示出明显差异,其变化范围在1.704 4～8.639 3 mg/g.[结论]该研究建立的没食子酸含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于不同产地盘龙七药材的质量控制.文县产盘龙七中没食子酸含量较丰富,具有进一步的开发利用价值.

盘龙七中儿茶素的含量测定

[目的]建立HPLC测定盘龙七中儿茶素含量的方法。[方法]采用超声波辅助提取,HPLC法测定,色谱条件为:色谱柱为Kroma-sil-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为无水甲醇-水-冰醋酸(15:84:1,V/V/V),流速为1.0 ml/min,检测波长为276 nm。[结果]儿茶素的线性范围为0.624～3.12 μg/ml(r=0.9993),平均回收率为100.05%,RSD为1.73%(n=6)。[结论]该测定方法简便、准确,可用于盘龙七中儿茶素的含量测定。

盘龙七的体外抗氧化活性研究

以维生素C为对照,采用流动注射-化学发光法、紫外可见分光光度法和荧光光谱法测定盘龙七提取物对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_2^-)、过氧化氢(H_2O_2)的清除能力,研究其体外抗氧化活性。结果表明,流动注射-化学发光法测定盘龙七水提物和醇提物在鲁米诺-碳酸盐缓冲液-邻苯三酚体系中的IC50值分别为0.17μg·mL^(-1)和0.03μg·mL^(-1),在鲁米诺-碳酸盐缓冲液-H_2O_2体系中的IC50值分别为15.06μg·mL^(-1)和0.03μg·mL^(-1);紫外可见分光光度法测定盘龙七水提物和醇提物对·OH的清除率分别为91%和98%,对·O_2^-的清除率分别为96%和97%;荧光光谱法测定盘龙七水提物和醇提物对·OH的清除率分别为92%和91%,对·O_2^-的清除率分别为97%和94%。盘龙七具有较高的抗氧化活性,其对·OH、·O_2^-、H_2O_2等3种自由基的清除作用随浓度的增加逐渐增强,呈良好的线性关系。该研究为盘龙七药材的深度开发以及抗氧化性能研究提供了理论基础。

盘龙七生药学研究

建立陕西地方药材盘龙七的质量标准。采用查阅文献、野外采集标本、性状描述、显微观察等方法,研究盘龙七的来源、性状及显微特征。确定了以长圆柱形、表面具明显环节及须根痕,折断时有粉尘飞出,断面边缘具明显点状突起,气微,味涩、微苦作为其性状鉴别特征;以外韧维管束50余束,髓部宽广且含有草酸钙簇晶作为其横切面鉴别特征;以淀粉粒、草酸钙簇晶、螺纹导管、梯纹导管作为其粉末鉴别特征。这一研究结果为盘龙七的质量标准制定提供了生药学方面的依据。

蒽酮-硫酸比色法测定盘龙七中多糖的含量

建立测定盘龙七中多糖含量的方法。以无水葡萄糖为对照品，采用蒽酮一硫酸比色法，在584nm处测定盘龙七中多糖的含量。多糖在0．02—0．10mg／mL范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为），=6．7950x＋0．0342，7=0．9994（n=5），平均回收率为101．06％，RSD=1．31％，（n=6）。结论是所用方法快速准确、重现性好，可用于盘龙七中多糖的含量测定。

盘龙七的质量分析研究

对不同产地的盘龙七药材进行质量分析和评价。实验依据《中国药典》,采用显微鉴别、理化鉴别、薄层鉴别对盘龙七药材进行鉴别;对其水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、挥发性醚溶性浸出物进行测定;采用高效液相色谱法同时测定盘龙七药材中岩白菜素和儿茶素含量。结果表明:不同产地盘龙七药材中所含水分、浸出物、岩白菜素和儿茶素含量存在差异,为建立盘龙七质量标准提供依据。

不同产地盘龙七中岩白菜素含量的分析研究

利用高效液相法测定14个不同产地盘龙七中岩白菜素的含量。色谱条件：色谱柱为Inertsil ODS-3C18（4.6 mm×150 mm,5μm）柱,乙腈-0.2%磷酸溶液（9∶91）为流动相,流速1.0 m L/min,检测波长275 nm,柱温30℃。岩白菜素在15~75μg/m L范围内呈良好的线性关系,Y=14 942.0X-428.6（R2=0.999 8）,平均加样回收率100.58%,RSD为1.77%（n=6）。分析结果表明,不同产地盘龙七中岩白菜素的含量不同,其含量随产地的不同而显示出一定的差异,其变化范围在14.68~70.19 mg/g,含量较为丰富。本研究建立盘龙七药材中岩白菜素含量测定方法,并分析检测了产自陕西、甘肃、四川三省14个产地盘龙七中岩白菜素的含量,其结果可为盘龙七药材的质量控制提供科学依据。

麸炒对盘龙七中岩白菜素含量的影响

目的:考察盘龙七麸炒前后岩白菜素的含量变化。方法:采用HPLC法测定盘龙七麸炒前后岩白菜素的含量,色谱柱:UltisilTMXB-C18柱(150 mm×10 mm,5μm);流动相为甲醇∶水(32∶68);流速1.0 mL/min;柱温为室温;检测波长275 nm。进样量:20μL。结果:盘龙七麸炒前所测岩白菜素平均含量为16.82 mg/g;盘龙七麸炒后所测岩白菜素的平均含量为22.15 mg/g。结论:麸炒后盘龙七中岩白菜素的含量高于麸炒前的盘龙七,麸炒盘龙七可以提高其治疗效果。

不同产地盘龙七中熊果苷含量的分析研究

本文采用高效液相色谱法，测定了14个不同产地盘龙七中熊果苷的含量。色谱条件为：色谱柱为Inert—all ODS-3C18（4．6×150mm，5μm）柱，以甲醇：水（8：92）为流动相，流速1．0mL／min，检测波长282nm，柱温30℃。熊果苷在10．3—103．0μg/mL范围内呈良好的线性关系，Y=4468．8X-999．10（R2=0．9999），平均加样回收率99．58％，RSD为1．79％（n=6）。研究结果表明，盘龙七中含有较丰富的熊果苷，其含量随产地的不同而显示出一定的差异，其变化范围在18．32—5．34mg／g，甘肃省文县产盘龙七的熊果苷含量最高（18．32mg／g）。本研究建立的熊果苷含量测定方法简便、准确、重复性好，可用于该药材中熊果苷含量的测定和药材质量控制。

基于指纹图谱结合化学模式识别及多酚类成分含量测定的大盘龙七质量评价

目的建立大盘龙七Bergeniae Scopulosae Rhizoma的HPLC指纹图谱及多酚类成分的含量测定方法,为大盘龙七药材质量控制及临床应用提供依据。方法采用Agilent 5 TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为275 nm,柱温25℃;对10批大盘龙七药材进行指纹图谱构建,基于指纹图谱相似度分析结合聚类分析与主成分分析,同时测定熊果苷、没食子酸、岩白菜素、儿茶素、4-O-没食子酰岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、儿茶素没食子酸酯的含量。结果建立了大盘龙七药材的HPLC指纹图谱,其中S5的相似度为0.752,其余批次的相似度均大于0.92,共标定了14个共有峰,指认出7个色谱峰,分别为熊果苷、没食子酸、岩白菜素、儿茶素、4-O-没食子酰岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、儿茶素没食子酸酯。聚类分析将10批大盘龙七药材分为3类;经主成分分析,主成分1~4是影响药材样品质量评价的主要因子;采用正交偏最小二乘法判别分析标记了大盘龙七中6个差异性成分。含量测定结果表明10批大盘龙七药材中熊果苷、没食子酸、岩白菜素、儿茶素、4-O-没食子酰岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、儿茶素没食子酸酯的含量范围分别为7.30~63.24、0.26~2.98、15.96~78.04、1.54~11.17、0.97~2.54、2.09~7.38、0.64~12.30 mg/g。结论建立的大盘龙七药材的HPLC指纹图谱及多酚类成分的含量测定方法操作简便、重复性好,可用于大盘龙七药材的定性定量分析,为大盘龙七药材的质量评价提供参考。

秦岭岩白菜入血成分及其代谢产物的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的:研究秦岭岩白菜提取物在大鼠体内的入血原型成分及代谢产物。方法:采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)技术,通过比对秦岭岩白菜提取液、空白血清和含药血清的图谱差异,根据保留时间、相对分子质量,以及一级、二级离子碎片,解析秦岭岩白菜提取物经大鼠灌胃给药后血清中的原型成分和代谢产物,检测条件为流动相选择甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A),流速设定0.3 mL·min^(-1),进样量1μL,加热电喷雾离子源,检测范围m/z 80~1200,正、负离子扫描模式。结果:大鼠口服给药后,共在血清中检测到35个移行成分,其中6个为原型成分,29个为代谢产物。经鉴定6个原型成分分别为熊果苷、mallonanoside A、岩白菜素、ardimerin、水杨酸、鞣花酸,29个代谢产物主要是来自含有没食子酸、mallonanoside A、岩白菜素、儿茶素、鞣花酸等结构单元的化合物代谢物,其代谢途径主要为葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、甲基化等,以Ⅱ相代谢为主。结论:入血成分及其代谢产物可能是秦岭岩白菜体内直接作用的药效成分,其中mallonanoside A、岩白菜素、鞣花酸在体内既可以原型成分入血,又可以经过Ⅱ相代谢发挥药效;而秦岭岩白菜药材中的其他大多数化学成分在体内可能主要是先通过水解等途径转化为没食子酸、岩白菜素、儿茶素等简单结构,再进一步发生Ⅱ相代谢。

不同采收期盘龙七中岩白菜素的含量比较

采用高效液相色谱法测定不同采收期盘龙七中岩白菜素的含量,进行比较,确定其最佳采收时期。色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×150mm,5Lm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(V/V,10÷90),流速为1.0mL/min,检测波长275nm;柱温35℃。结果表明,不同采收期盘龙七中岩白菜素含量变化较大,6月盘龙七中岩白菜素含量最低为2.34%,9月盘龙七中岩白菜素的含量最高为6.06%。以岩白菜素含量为指标,盘龙七的最佳采收期为9月。

盘龙七的质量标准研究

目的:建立盘龙七药材的质量标准。方法:测定不同采收期或不同采集地盘龙七的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、重金属、砷盐的含量;采用TLC对盘龙七进行理化鉴别;采用HPLC测定盘龙七中岩白菜素的含量。结果:盘龙七的质量标准确定为:水分不得过14.3%,总灰分不得过15.2%,酸不溶性灰分不得过4.6%,水浸出物不得低于4.8%,95%乙醇浸出物不得低于3.7%,挥发性醚浸出物不得低于4.9%,铅的含量小于0.002%,砷盐含量小于0.0001%,岩白菜素含量应不少于2.3%。结论:本文建立的方法可作为评价盘龙七质量的标准。