上调c-Ski基因表达对青光眼兔术后瘢痕形成及TGF-β、RhoA/Rock信号通路的影响

目的探讨上调c-Ski基因表达对青光眼兔术后瘢痕形成及转化生长因子(TGF)-β、Ras同源家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(Rock)信号通路的影响。方法取30只新西兰大白兔建立青光眼模型,并进行青光眼滤过手术。将其随机分为A组(仅造模及手术,不给药)、B组(结膜下注射400μg空白质粒)、C组(结膜下注射100μg c-Ski质粒)、D组(结膜下注射200μg c-Ski质粒)和E组(结膜下注射400μg c-Ski质粒),每组6只。分别于术后2 d、4 d、7 d、14 d和28 d检测各组兔的眼压、滤过道组织中Ⅰ型和Ⅱ型胶原面积占比。术后28 d采用实时荧光定量PCR检测各组兔滤过道组织中c-Ski、TGF-β1、Rock和RhoA mRNA表达水平,采用Western blot检测各组兔滤过道组织中TGF-β1、Rock及RhoA蛋白表达水平。结果术后2 d、4 d、7 d、14 d、28 d,C组、D组及E组兔眼压均低于A组和B组,D组和E组兔眼压均低于C组(均P<0.05)。术后2 d、4 d、7 d、14 d、28 d,C组、D组及E组Ⅰ型胶原面积占比依次降低且均低于A组和B组(均P<0.05);术后14 d,C组、D组及E组Ⅱ型胶原面积占比依次降低且均低于A组和B组(均P<0.05)。术后28 d,C组、D组、E组兔滤过道组织中c-Ski mRNA表达水平均高于A组和B组,TGF-β1、Rock及RhoA的mRNA和蛋白表达水平均低于A组和B组,且C组、D组、E组c-Ski mRNA表达水平依次升高,TGF-β1、Rock及RhoA的mRNA和蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论上调c-Ski基因表达能够降低青光眼兔术后的眼压,减少胶原合成,抑制瘢痕形成,这可能与其抑制TGF-β1及RhoA/Rock信号通路有关。

Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1在动脉粥样硬化血管壁中的表达及其与基质金属蛋白酶2及转化生长因子1的相关性

目的研究Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)在动脉粥样硬化血管壁中的表达及其与基质金属蛋白酶2(MMP2)、转化生长因子1(TGF-β1)的相关性。方法选择30只载脂蛋白E基因敲除小鼠为实验组,高脂饲料喂养,另选30只C57BL/6小鼠为对照组,普通饲料喂养。在喂养的第10、16、22、28及34周,取眼球血监测小鼠血脂水平;取小鼠腹主动脉作为标本,包埋切片并进行苏木精-伊红染色观察血管壁形态;应用免疫组化染色观察血管壁中ROCK1、MMP2、TGF-β1的表达;使用Image Pro Plus 6.0软件测量切片中血管壁厚度、斑块面积、血管壁中ROCK1、MMP2及TGF-β1的表达量。采用SPSS 27.0统计软件进行数据分析。采用单因素方差分析进行组间比较,两两比较采用Tukey检验。采用Pearson相关与线性回归分析ROCK1与血管壁厚度及斑块面积、MMP2、TGF-β1的关系。结果成功建立动脉粥样硬化小鼠模型。在喂养第10、16、22、28及34周,实验组血脂水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。自喂养第16周起,实验组小鼠血管内均有斑块形成,随着喂养时间的延长,斑块面积和血管壁厚度不断增加,差异有统计学意义(P<0.05);血管壁内ROCK1的表达逐步增高,其表达与斑块面积及血管壁厚度呈正相关(r=0.821,0.730;P<0.05)。线性相关分析及回归分析显示,ROCK1与MMP2、TGF-β1表达均呈正相关(r=0.801,0.906;P<0.05)。结论在动脉粥样硬化血管壁中存在ROCK1蛋白的表达,且表达量随着血管壁厚度增加而增高,ROCK1的表达与MMP2、TGF-β1呈显著正相关性。鉴于ROCK1蛋白的致血管痉挛作用,提示动脉粥样硬化血管壁可能易于痉挛,具体机制需进一步研究。

基于RhoA/Rho信号通路探讨产妇子宫平滑肌组织Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平与产后出血的关系

目的:基于RhoA/Rho信号通路探讨产妇子宫平滑肌组织CPI-17(Thr38)、KCa3.1、Krüppel样因子4(KLF4)表达水平与产后出血的关系。方法:选择80例宫缩乏力性产后出血产妇为观察组,选择同期80例无产后出血产妇为对照组。采用肌条等长张力测定法检测离体子宫平滑肌的自发收缩活动力,以及加入Rho激酶抑制剂(Y-27632)后的子宫平滑肌收缩活动力。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应法检测子宫平滑肌组织中RhoA、ROCKⅠ以及ROCKⅡmRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测RhoA、ROCKⅠ以及ROCKⅡ以及Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平。采用Pearson相关分析RhoA蛋白以及子宫平滑肌收缩活动力与Thr38、KCa3.1、KLF4的关系。结果:观察组的子宫平滑肌收缩活动力、收缩频率以及收缩幅度均低于对照组(P<0.05~P<0.01),加入Y-27632后,2组子宫平滑肌收缩活动力均低于加入前(P<0.05)。观察组RhoA/Rho信号通路相关mRNA以及蛋白(RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ)表达水平均低于对照组(P<0.01)。观察组Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平均低于对照组(P<0.01)。Pearson相关分析显示,子宫平滑肌RhoA/Rho信号通路相关蛋白、收缩活动力与Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平均呈正相关关系(P<0.05)。结论:宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌组织的RhoA/Rho信号通路以及Thr38、KCa3.1、KLF4表达下降,且与收缩能力降低呈正相关关系,共同参与产后出血的发生。

重度子痫前期胎盘合体滋养细胞微绒毛膜脱落与Rho/ROCK分子表达的关系

目的探讨重度子痫前期(sPE)患者合体滋养细胞表面微绒毛膜(STBM)脱落水平与胎盘组织Rho/ROCK分子表达的关系。方法收集sPE产妇(sPE组)和正常产妇(对照组)胎盘组织各20例,透射电镜下观察胎盘合体滋养细胞表面微绒毛结构变化,应用体视学方法分析细胞表面微绒毛数密度(Nv)、表面积密度(Sv)和体积密度(Vv),通过Western blotting和免疫组化检测胎盘组织中Rho亚家族蛋白成员(RhoA、RhoB、RhoC)及Rho激酶(ROCKI、ROCKⅡ)的表达水平。应用Spearman等级相关分析法检验Rho、ROCK蛋白表达水平与STBM脱落水平的相关性。结果 sPE组患者胎盘合体滋养细胞表面微绒毛的Nv、Sv、Vv均显著小于对照组(P<0.05),胎盘组织中RhoA、RhoB、ROCKI、ROCKⅡ蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。sPE组患者胎盘组织中RhoB、ROCKI、ROCKⅡ的表达水平与STBM的脱落水平均呈正相关(r=0.631,r=0.826,r=0.865,P<0.05)。结论 RhoB及其与下游分子ROCKI、ROCKⅡ构成的信号通路可能在sPE时胎盘STBM脱落过程中发挥重要作用。

RhoA/ROCKⅠ信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达

目的观察RhoA和Rho激酶Ⅰ(ROCKⅠ)蛋白在前列腺癌中的表达,探讨RhoA/ROCKⅠ信号传导途径在前列腺癌形成过程中的可能作用。方法选取2005年1月-2008年5月住院手术的前列腺癌患者20例(前列腺癌组),年龄57～86(73±7)岁,行根治性前列腺切除术并留取前列腺癌组织,以及良性前列腺增生患者36例(良性前列腺增生组),年龄50～83(71±7)岁,行尿道前列腺电切除术,留取增生的前列腺组织。免疫组化法测定两组前列腺癌与增生前列腺组织中RhoA和ROCKⅠ蛋白的表达。结果前列腺癌组RhoA和ROCKⅠ蛋白的表达水平(0.225±0.068、0.273±0.070)均明显高于良性前列腺增生组(0.126±0.047、0.176±0.040,P<0.01)。相关分析显示,RhoA与ROCKⅠ蛋白的表达水平呈显著正相关(r=0.487,P<0.01)。结论RhoA和ROCKⅠ蛋白在前列腺癌中表达增加,且高于良性前列腺增生组织;RhoA/ROCKⅠ信号传导途径可能参与了前列腺癌的形成。

RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用

目的:探讨RhoA在卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移过程中的作用。方法:构建RhoA真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV3,用RT-PCR和Westernblot检测SKOV3RhoAmRNA及蛋白表达水平;Boyden小室体外侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:转染RhoA的实验组与转染空载体的对照组比较,RhoAmRNA的表达丰度(RhoA/GAPDH)为12.01±1.72,明显高于对照组的6.81±1.24;RhoA蛋白的表达水平(RhoA/β-actin)为4.81±0.56,亦明显高于对照组的3.02±0.32,两者差异都有统计学意义(P<0.05)。Boyden小室体外侵袭实验中实验组与对照组平均侵袭百分数分别为(47.60±1.47)%和(22.60±2.40)%(P<0.05),比较划痕后0h与24h的宽度差,实验组和对照组愈合百分比分别为(65±6.4)%和(54±5.5)%(P<0.05);表明转染RhoA后,细胞侵袭和迁移能力明显增强。结论:RhoA增强了卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和迁移能力。

TNF-α对小鼠脑微血管内皮细胞RhoA活性的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对小鼠脑微血管内皮细胞RhoA活性和表达的影响,探讨p115RhoGEF是否参与其调控。方法:以小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3为实验对象,TNF-α(10μg/L)刺激后pull-down检测RhoA活性,Western blotting检测RhoA总蛋白表达;再将bEnd.3分为siRNA组(转染p115RhoGEFsiRNA)和对照组(转染无活性的nsRNA),Western blotting检测p115RhoGEF蛋白的表达,pull-down检测TNF-α预处理后RhoA活性的变化。结果:RhoA活性在TNF-α刺激30 min后明显增高达到高峰,RhoA总蛋白表达在TNF-α刺激12 h和24 h显著上调;TNF-α刺激siRNA组bEnd.3细胞30 min后,RhoA活性较对照组明显降低。结论:TNF-α可导致小鼠脑微血管内皮细胞RhoA活性增加和表达上调,p115RhoGEF可能参与了TNF-α诱导RhoA活化的调控过程。

TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。

补肾生血中药治疗慢性再生障碍性贫血疗效及对碱性成纤维细胞生长因子、Rho家族成员A蛋白水平的影响

目的观察补肾生血中药治疗慢性再生障碍性贫血疗效及对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、Rho家族成员A(Rho-A)蛋白水平的影响。方法将60例慢性再生障碍性贫血患者随机分为2组,对照组30例给予西药司坦唑醇、环孢素A治疗,观察组30例在此基础上加用补肾生血中药治疗,2组治疗时间均为6个月。观察2组治疗前后中医证候积分、外周血指标、非造血细胞百分率、骨髓增生程度、bFGF及Rho-A水平变化情况,统计2组近期疗效。结果 2组治疗后心悸头晕、周身乏力、面色口唇指甲苍白、盗汗出血、形寒肢冷及腰膝酸软积分均显著低于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项积分均显著低于对照组(P均<0.05);2组治疗后血红蛋白、白细胞计数、血小板计数、bFGF及Rho-A均显著提高(P均<0.05),非造血细胞百分率均显著降低(P均<0.05),骨髓增生程度均显著改善(P均<0.05),且观察组治疗后各项指标改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);观察组近期治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05)。结论补肾生血中药治疗慢性再生障碍性贫血可有效缓解相关症状体征,改善外周血指标,促进骨髓增生复常,并有助于提高bFGF和Rho-A水平。

巨噬细胞移动抑制因子经Rho途径促进人肺成纤维细胞Ⅲ型胶原合成

目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:不同浓度的rMIF(25-100μg/L)分别作用于MRC-5细胞48 h,RT-PCR法检测III型胶原mRNA表达,Western blotting检测III型胶原蛋白合成;100μg/L rMIF刺激MRC-5细胞48 h,刺激前0.5 h加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632,RT-PCR法检测III型胶原mRNA表达,Western blotting法检测III型胶原蛋白表达。结果:刺激MRC-5细胞48 h,rMIF可呈剂量依赖地诱导III型胶原mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)表达。Y27632预刺激后,显著抑制rMIF100μg/L诱导的III型胶原mRNA和蛋白表达(均P<0.01)。结论:MIF可能通过Rho途径刺激人肺成纤维细胞III型胶原合成,从而在哮喘气道重塑的发病机制中发挥重要作用。

RhoA/Rho激酶在2型糖尿病大鼠肝脏纤维化中的作用

目的阐明RhoA/Rho激酶在糖尿病大鼠肝纤维化中的作用。方法通过高脂饮食和小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组和法舒地尔干预组(法舒地尔10 mg/(kg·d),分两次腹腔注射)24周末。测定血糖、血脂、谷草转氨酶和谷丙转氨酶;Masson染色和羟脯氨酸测定评估肝胶原沉积;RT-PCR测定转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达;免疫组化测定TGF-β1蛋白表达;Western blot测定肝组织肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1磷酸化(p-MYPT1)水平。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠血糖、血脂和转氨酶显著增高,肝组织大量胶原沉积,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著上调(P<0.01)。与糖尿病组比较,法舒地尔干预组大鼠转氨酶降低,肝胶原沉积明显减轻,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论高血糖激活了肝组织RhoA/Rho激酶,通过调控TGF-β1/CTGF表达,在糖尿病肝纤维化中起着重要作用。

巨噬细胞移动抑制因子经Rho途径促进人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成

目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞6h、12h、24h、48h后,ELISA法测定细胞培养上清中TGF-β1蛋白含量;100μg/L的rMIF作用于MRC-5细胞48h,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白合成;100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞48h,刺激前0.5h加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果:与对照组比较,100μg/L的rMIF对细胞培养上清TGF-β1蛋白含量无显著影响(P>0.05);100μg/L的rMIF可显著促进Ⅰ型胶原mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)合成。Y27632预刺激后,100μg/L的rMIF促进Ⅰ型胶原mRNA和蛋白合成能力显著减弱(P均<0.01)。结论:MIF可能通过Rho途径刺激人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成从而在哮喘气道重塑的发病机制中发挥重要作用。

PLGF通过激活Rho/ROCK信号通路介导人脑微血管内皮细胞间紧密连接开放

目的探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制。方法利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响;用Western blot法及免疫荧光法检测HBMEC间紧密连接相关蛋白质occludin和ZO-1的表达及分布,用蛋白激酶抑制剂干预和Western blot法检测Rho蛋白活性。结果 25 ng/mL PLGF 30 min显著降低体外血脑屏障模型TEER,使其通透性增高(P<0.05);增加S-occludin表达的同时降低了IS-occludin的表达,使ZO-1蛋白在细胞周边分布减少;此外,ROCK蛋白激酶抑制剂Y27632抑制了PLGF引起的体外血脑屏障透过性增高(P<0.05),并激活细胞内Rho激酶活性。结论 PLGF通过激活HBMEC内Rho/ROCK信号通路,影响HBMEC间紧密连接完整性,进而改变血脑屏障的通透性。

勿动蛋白及其信号通路分子Rho A与Rho相关蛋白激酶在高血压心肌肥厚与纤维化中的作用

目的探讨勿动蛋白(Nogo)/Rho相关蛋白激酶(ROCK)-去甲肾上腺素转运蛋白(NET)信号通路对自发性高血压大鼠心肌肥厚与纤维化的调节作用。方法选择7周龄SPF级同源同系雄性自发性高血压大鼠20只,随机分为4组:对照组、Nogo受体拮抗剂(NEP1-40)组、ROCK抑制剂(法舒地尔)组和NET抑制剂(氟西汀)组,每组5只,饲养7周。分离称量左心室质量,计算左心室质量指数。实时定量PCR检测心肌肥厚标志物心钠肽、脑钠肽、β肌球蛋白重链(β-MHC)基因表达,以及心肌纤维化标志物结缔组织生长因子(CTGF)、心肌胶原组织Ⅰ型(CollagenⅠ)、心肌胶原组织Ⅲ型(CollagenⅢ)和NET基因表达水平。结果与对照组比较,NEP1-40组左心室质量指数、心钠肽、脑钠肽、β-MHC表达明显增高,法舒地尔组左心室质量指数、心钠肽、脑钠肽、β-MHC表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,NEP1-40组CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ表达明显增高,法舒地尔组NET表达明显升高,CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ和NET表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,氟西汀组心钠肽、脑钠肽、β-MHC、CTGF和CollagenⅠ表达明显增高[(1.37±0.05)%vs (1.26±0.03)%,(1.27±0.04)%vs (1.18±0.07)%,(1.26±0.04)%vs (1.22±0.03)%,2.05±0.01 vs 1.44±0.11,1.86±0.06 vs 1.29±0.05,P<0.05]。结论Nogo/ROCK-NET信号通路参与自发性高血压大鼠心肌肥厚与纤维化的调节。

Rho蛋白鸟苷酸交换因子11基因R1467H多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究

目的研究Rho蛋白鸟苷酸交换因子11(ARHGEF11)基因R1467H多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)及其胰岛素抵抗(IR)的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对136例PCOS患者和117名健康对照者ARHGEF11基因R1467H位点进行基因分型;同时进行人体测量学和代谢指标的检测。结果在PCOS组和对照组中,ARHGEF11基因R1467H位点的基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组GA/AA基因型的空腹胰岛素和HOMA2-IR水平明显高于GG基因型(P<0.05),对照组GA/AA基因型的空腹血糖显著高于GG基因型(P<0.05),这种统计学差异经年龄、体质量指数校正后依然存在(P<0.05)。结论 ARHGEF11基因R1467H多态性与PCOS的发病无关,但可能与PCOS患者IR抵抗有关。

Rho/Rock信号通路在原发性高血压肾纤维化中作用

目的探讨Rho/Rock信号通路在原发性高血压肾纤维化中的作用。方法选择31例原发性高血压病人,依据24h尿微量清蛋白排泄率(UAER)分为正常清蛋白尿组(A组)11例、微量清蛋白尿组(B组)10例和尿毒症组(C组)10例,选取正常体检者10例作为对照组,用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定各组血清转化生长因子β(TGF-β)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK-1)水平,分析TGF-β、MMP-9、ROCK-1在各组间的表达规律及三者之间的相关性。结果与对照组比较,A、B、C组TGF-β、MMP-9、ROCK-1血清浓度均显著升高(F=14.498～126.037,q=3.222～20.617;P<0.05、0.01);B、C组TGF-β及ROCK-1血清浓度较A组显著升高(q=4.797～17.636,P<0.01),B、C组间TGF-β、ROCK-1血清浓度差异无显著(q=0.612、1.175,P>0.05);B组MMP-9血清浓度较A、C组显著增高(q=4.799、5.959,P<0.01),而A、C组之间差异无显著性(q=1.299,P>0.05)。血清TGF-β与MMP-9、TGF-β与ROCK-1、MMP-9与ROCK-1浓度之间均呈正相关(r=0.381～0.652,P<0.05)。结论Rho/Rock信号通路可能参与了高血压肾纤维化过程。

Rho激酶抑制剂对压力超负荷大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠心肌纤维化的影响。方法:采用腹主动脉缩窄术制备SD大鼠心肌纤维化模型,动脉夹闭4周后,随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、法舒地尔高剂量(FH,30mg/Kg/天)组和法舒地尔低剂量(FL,10mg/Kg/天)组。术后8周末,计算各组大鼠心脏质量指数(HWI)、左室质量指数(LVWI),观察心肌组织HE染色和Masson染色,碱水解法测定心肌组织羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组化分析磷酸化的肌球蛋白磷酸酶靶蛋白亚基1(p-MYPT1)、转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)水平。结果:与Sham组相比,Model组大鼠LVWI及HYP含量显著升高(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,间质大量胶原纤维沉积,心肌组织p-MYPT1水平升高(P<0.01),TGF-β1、CTGF表达升高(P<0.01);与Model组相比,FH组和FL组大鼠LVWI及HYP含量降低(P<0.05),间质胶原蛋白沉积程度减轻,心肌组织p-MYPT1、TGF-β1、CTGF水平均降低(P<0.05或P<0.01)。结论:Rho激酶参与压力超负荷诱导的大鼠心肌纤维化,法舒地尔抑制心肌纤维化进展的作用与TGF-β1和CTGF水平的降低有关。

Rho激酶抑制剂治疗急性心肌梗死血清炎症因子的变化及疗效观察

目的给予急性心肌梗死患者早期应用Rho激酶抑制剂,测查其血清炎症因子IL-6,TNF-a,NO的变化情况,并以此为依据,观察Rho激酶抑制剂临床治疗效果.方法选择同期收治的未接受冠脉介入治疗的急性心肌梗死患者50例.随机分为治疗组和常规组,各25例.两组均给予硝酸甘油、硫酸氢氯吡格雷、辛伐他丁等常规治疗.治疗组在常规治疗的基础上静脉滴注盐酸法舒地尔30 mg,2次/d,10 d为1个疗程,观察患者血清炎症因子IL-6,TNF-a,NO浓度变化.结果加用法舒地尔的治疗组患者血清炎症因子IL-6,TNF-a浓度下降,NO浓度增高,均比常规组明显,且患者心功能检测治疗组改善更明显.结论 Rho激酶抑制剂治疗急性心肌梗死能够更有效地保护心肌细胞,降低炎症因子对心肌细胞的损伤,对改善患者心功能有显著效果.

脑源性神经营养因子对苯丙氨酸诱导的Cdc42、Rac1和RhoA蛋白表达的影响

目的观察脑源性神经营养因子(BDNF)对苯丙氨酸诱导的神经元树突的生长及其Cdc42、Rac1和RhoA蛋白表达的影响。方法胎鼠大脑皮层神经元培养3 d后,加入0.9 mmol/L苯丙氨酸或同时加入100 ng/mlBDNF诱导,免疫组化标记神经元突起并计数,Western blotting检测Cdc42、Rac1和RhoA蛋白表达。结果神经元在苯丙氨酸诱导2 d后,苯丙氨酸减少了神经元树突数(P<0.01),而同时加入BDNF可改善苯丙氨酸诱导的神经元树突的减少(P<0.01)。并且BDNF抑制苯丙氨酸诱导的Cdc42、Rac1和RhoA蛋白表达下调。结论BDNF可能通过影响Cdc42、Rac1和RhoA表达改善苯丙氨酸所致的神经元损伤。BDNF对治疗苯丙酮尿症脑损伤可能具有潜在的应用价值。

Rho激酶抑制剂与芪苈强心胶囊对慢性心力衰竭患者细胞因子的影响

目的：观察Rho激酶抑制剂、芪苈强心胶囊分别及联合短期应用对慢性心力衰竭患者细胞因子（肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6）水平的作用，并探讨其机制。方法：120例慢性心力衰竭患者（NYHA分级Ⅱ～Ⅲ级）在接受常规心力衰竭治疗的基础上，随机分成4组，分别是空白对照组（30例）（A组），单用Rho激酶抑制剂治疗组（30例）（B组），单用芪苈强心胶囊治疗组（30例）（C组）和Rho激酶抑制剂与芪苈强心胶囊联合治疗组（30例）（D组）共治疗4周。治疗前后测定肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、BNP，评估心功能。结果：治疗后3个治疗组B、C、D组分别与对照组A组相比TNF-α、IL-6、BNP水平均明显降低（P＜0.05），治疗组间（B、C、D组间）比较B组与C组间无统计学意义（P＞0.1），D组较B组、C组均有统计学意义（P＜0.05）。结论：Rho激酶抑制剂联合芪苈强心胶囊能显著降低慢性心力衰竭患者血清细胞因子TNF-α、IL-6水平，改善心功能，有利于慢性心力衰竭的治疗。