人肺腺癌细胞系中小G蛋白Rho-GDP解离抑制因子α的克隆及序列分析

目的 :研究人肺腺癌细胞系中小G蛋白Rho解离抑制因子α基因结构的改变。方法 :应用RT PCR扩增Rho解离抑制因子αcDNA ,并进行测序。结果 :在人肺腺癌细胞系AGZY 83α 中 ,除Rho解离抑制因子基因α存在外 ,还存在缺失型的Rho解离抑制因子αcDNA ,即在第 5个外显子有 78bp的缺失。结论 :在人肺腺癌细胞系AGZY 83α

实体瘤免疫治疗相关分离反应的研究进展

近年来,免疫检查点抑制剂(ICIs)在国内外临床实践中被广泛应用,极大改善了部分晚期恶性肿瘤患者的生存及预后。在接受免疫治疗后,一些患者体内会出现有反应病灶和无反应病灶共存的现象,即分离反应(DR)。目前,DR的具体发生机制尚未阐明,评估标准各异,这给临床医师及时识别并治疗患者增加了挑战。本文就免疫治疗相关DR的定义及发生率、评估标准及潜在生物学机制等进行系统综述,以期为临床实践工作提供参考。

含动力学抑制剂体系甲烷水合物微观分解过程

注入低剂量水合物动力学抑制剂是防治油气管道中水合物堵塞的有效技术之一。为了实现高效、经济解堵,非常有必要展开动力学抑制剂对水合物分解行为影响规律的研究。利用粉末X射线衍射仪和激光共聚焦拉曼光谱仪在常压、-10℃条件下原位观测纯水体系和含动力学抑制剂聚乙烯基己内酰胺(PVCap)体系的甲烷水合物微观分解过程。结果显示,相比纯水体系,PVCap的存在会减弱sI型甲烷水合物“自保护”效应,加速水合物的分解。甲烷气体在水合物大、小笼中的含量同步降低,且相对含量基本保持恒定,说明PVCap不影响水合物以晶胞为单位进行整体分解。六角冰的(100)和(002)晶面峰面积随时间的变化不同步,且在纯水体系和含PVCap体系中呈现的变化趋势截然不同。

GDI2通过p75NTR通路调节结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的:探讨GDP解离抑制因子2(GDI2)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡以及细胞周期的影响及其机制。方法:TCGA数据库分析GDI2 mRNA在CRC肿瘤组织中的表达。将CRC细胞分为sh-NC组和sh-GDI2组,采用CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GDI2基因表达,western blotting检测GDI2蛋白和神经生长因子受体(p75NTR)通路关键因子(IKK、p-NF-κB和p-IκB)的表达。构建异种移植瘤裸鼠模型,观察GDI2对CRC肿瘤生长的影响。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞相比,GDI2在CRC患者肿瘤组织和细胞系中的表达上调(P<0.05)。sh-GDI2能抑制CRC细胞增殖、迁移、侵袭,阻滞细胞周期进程,并促进凋亡(均P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-GDI2组p75NTR蛋白表达上调,IKK、p-NF-κB、p-IκB蛋白表达下调(均P<0.05)。敲低GDI2可明显抑制裸鼠体内CRC肿瘤的生长(P<0.05)。结论:敲低GDI2可能通过p75NTR信号通路抑制CRC细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。

两种水稻GDP解离抑制蛋白基因的分离及特征分析

以Rho家族成员OsRacD为诱饵 ,采用酵母双杂交体系 ,分离到两种与OsRacD互作的水稻RhoGDP解离抑制蛋白的基因 ,分别命名为OsRhoGDI1和OsRhoGDI2 .酵母体内结合和GSTpulldown分析结果显示 ,OsRhoGDI1和OsRhoGDI2与野生型和组成型激活的OsRacD都能结合 ,且不依赖GDI的N端部分序列 ;GDI和Rho的结合具有一定的特异性 .两种GDI在水稻根、地上组织和幼穗等多种组织和器官都有表达 ,但在表达特征上存在明显差异 .研究证实 ,在水稻中存在着调控RhoGTPases的GDP解离抑制蛋白基因家族 。

注甲醇溶液分解丙烷水合物实验模拟

在自制的可视化水合物开采装置中进行了以恒流量注入不同质量分数(30.0%,60.1%,80.2%,99.5%)甲醇溶液定容分解丙烷水合物的模拟化学试剂法分解天然气水合物实验。结果表明,分解实验开始后,釜内液相温度缓慢降低,压力近似于线性增长,分解时间随着质量分数的增加逐渐减少但减少的程度在减弱。通过计算得到丙烷水合物的平均分解速率介于0.02059～0.04535mol/(min.L),并随注入甲醇质量分数的增加而增大。与注入纯水分解水合物实验相比甲醇的注入可以减少水合物分解时所需要的热量、加速水合物分解,同时提高甲醇的质量分数有利于加速水合物的分解。

乙二醇溶液作用下丙烷水合物分解实验研究

通过可视化天然气水合物开采模拟系统进行了模拟抑制剂法分解天然气水合物实验,研究了恒流量注入不同质量分数(60.1%,69.8%,80.2%,99.5%)乙二醇(Ethylene glycol)溶液定容分解丙烷水合物实验,研究了抑制剂分解丙烷水合物过程中的温度、压力变化等,同时进行了热量衡算及能效分析。计算得平均分解速率介于3.59～7.67mol·min-1·m-3,平均分解反应速率随浓度变化近似呈线性增长;能效介于61.8%～81.5%;能量产出比介于4.89～6.49;随乙二醇浓度的增加,能量效率和能量产出比也随之增大,但增加的梯度中会出现拐点。与注纯水相比注乙二醇可减少水合物分解时所需要的热量,加速水合物分解,提高分解的能量效率和能量产出比;与低浓度抑制剂相比能效和能量产出比也有明显的提高。

注入不同温度的乙二醇溶液分解丙烷水合物

在自行设计的装置上,进行了恒流量(25mL/min)条件下注入不同温度(24.2,40.3,59.5,80.1℃)质量分数为99.5%的乙二醇溶液(抑制剂)分解丙烷水合物的实验,研究了注入温度不同时丙烷水合物分解过程中温度和气相压力的变化规律。实验结果表明,随乙二醇溶液注入温度的升高,丙烷水合物分解时间缩短;通过计算得到丙烷水合物的平均分解速率介于60.63～140.70mmol/(min.L)之间,并随注入温度的升高而增大;提高注入温度有利于丙烷水合物的分解。与注入纯水分解丙烷水合物的实验结果相比,乙二醇溶液的注入可降低丙烷水合物的分解热,加快丙烷水合物的分解速率。

紫花苜蓿GDP解离抑制蛋白基因cDNA的克隆、分析及烟草转化

采用RT-PCR方法,克隆得到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)GDP解离抑制蛋白基因cDNA核心区域序列,命名为MsGDI1。序列分析结果表明,该cDNA核心区域全长1575 bp,包含一个1332 bp的最大开放阅读框,编码444个氨基酸。半定量RT-PCR分析结果表明,在盐胁迫和铝胁迫条件下,MsGDI1基因的表达随着胁迫时间的增加而上升,该基因可能与紫花苜蓿抗盐耐铝机理有关。借助于新构建的该基因超表达载体,用农杆菌介导方法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)。转基因烟草植株PCR检测的结果表明,MsGDI1基因已经成功插入到烟草基因组中,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及其意义

目的探讨Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及意义。方法采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN I assay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对正常足月妊娠妇女(对照组)30例、晚发型重度子痫前期30例及早发型重度子痫前期30例的Rho-GDI mRNA及蛋白进行测定。结果 Rho-GDI主要表达于蜕膜细胞的胞浆、胞核和少许间质。荧光实时定量PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证结果显示Rho-GDI mRNA及蛋白在正常妊娠组蜕膜组织中表达最高;早发型子痫前期组中次之;晚发型子痫前期中最低。正常组与早发组和晚发组比较,差异均有显著性(P<0.05),但早发组与晚发组间比较的差异无显著性(P>0.05)。结论 Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中表达下调,Rho-GDI可能通过调控滋养细胞浸润和血管平滑肌舒缩状态等环节参与了子痫前期的发生发展。

X射线衍射分析聚乙烯吡咯烷酮对水合物分解过程的影响

深水油气资源的勘探开发以及开采过程中的环保要求,使得天然气水合物动力学抑制剂使用不可避免,含动力学抑制剂的分解研究对水合物生成后的解堵具有重要的指导意义。本文在高压反应釜内采用甲烷和丙烷混合气,合成天然气水合物,并用X射线粉晶衍射仪分析了含动力学抑制剂聚乙烯吡咯烷酮的水合物分解过程。结果显示甲烷和丙烷气体会形成SⅡ型水合物,但伴随有SⅠ型甲烷水合物的生成;添加动力学抑制剂后,水合物的分解速率变慢,在-60℃,添加0.5%的聚乙烯吡咯烷酮后,分解起始的20 min内,无抑制剂体系水合物分解可达69%,而在含抑制剂体系分解约18%;SⅡ型甲烷丙烷混合气水合物分解过程中晶胞各晶面分解速率相同,没有偏好性,水合物笼作为一个整体分解,添加抑制剂不改变这种分解方式,仍以整体分解。

RhoGDI蛋白在肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨RhoGDI(Rhoguanine nucleotide dissociation inhibitor)蛋白在肺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用Western blotting检测苏州大学两所附属医院于2007-2008年收治的39例肺癌及5例肺炎性假瘤患者组织标本中RhoGDI蛋白的表达,并分析RhoGDI蛋白表达与患者临床病理指标的相互关系。结果:小细胞肺癌组织中RhoGDI蛋白的表达水平显著高于非小细胞肺癌和炎性假瘤[(0.903±0.228)vs(0.522±0.152),(0.485±0.095);均P<0.05)]。非小细胞肺癌组织中,低分化癌RhoGDI蛋白的表达水平显著高于中、高分化癌和炎性假瘤[(0.649±0.123)vs(0.458±0.138),(0.485±0.095);均P<0.05]。RhoGDI的表达在鳞癌与腺癌中没有显著差别。非小细胞肺癌Ⅰ～Ⅲ期的RhoGDI蛋白表达水平有逐渐增高趋势,但无显著性差别(F=0.6,P>0.05)。RhoGDI蛋白的表达与原发肿瘤大小(t=1.15,P>0.05)和淋巴结转移无明显相关(t=1.648,P>0.05)。非小细胞肺癌组织RhoGDI的表达水平与血清乳酸脱氢酶水平呈正相关(r=0.46,P<0.01)。结论:肺癌组织中RhoGDI蛋白表达的明显升高与肺癌的病理类型和分化程度有关。

吸烟对肺组织D4-GDI表达的影响及其与慢性阻塞性肺疾病相关性的蛋白质组学研究

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是环境因素与遗传因素共同作用的结果,而吸烟是导致COPD发生的最主要危险因素,然而,吸烟导致COPD的机制及COPD的遗传易感机制目前尚未完全阐明.蛋白质组学研究方法具有高效和信息含量丰富的特点,为COPD研究提供了有力的帮助,被认为在COPD的研究领域具有广阔的前景.运用二维凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱蛋白质组学研究方法结合生物信息学技术,对不吸烟者、非COPD吸烟者和吸烟COPD患者的肺组织进行蛋白质组比较,共鉴定出24种表达差异蛋白.研究发现,非COPD吸烟者肺组织ρ-GDP解离抑制因子2(D4-GDI)表达水平为不吸烟者的1.7倍,吸烟COPD患者肺组织D4-GDI表达水平接近非COPD吸烟者的2倍.通过免疫组织化学染色和Western-blotting检测对肺组织D4-GDI表达水平进行验证,获得了与蛋白质组学研究相一致的结果.结果首次说明:吸烟能够导致肺组织D4-GDI表达水平升高,D4-GDI参与了COPD的发病机制而且可能与COPD易感性相关.

RhoGDI2基因抑制膀胱癌转移涉及基因和信号通路的生物信息学分析

目的利用生物信息学方法探讨Rho GTP酶GDP解离抑制因子2(rho GDP dissociation inhibitor 2,Rho GDI2)基因抑制膀胱癌转移涉及的基因和信号通路。方法从GEO datasets数据库搜索膀胱癌转移相关的全基因组表达谱芯片数据,使用GEO2R在线工具分析膀胱癌组织中Rho GDI2基因高表达组与低表达组之间的差异表达基因,再筛选出多组表达谱芯片数据中一致性上调或下调的基因,最后使用DAVID在线工具进行差异表达基因信号通路富集。结果得到Rho GDI2基因在膀胱癌组织中高表达组和低表达组一致性高的差异表达基因,其中A2M、CORO1A、ENC1、FGD3为上调基因中一致性高的差异表达基因。通过基因信号通路富集分析得到膀胱癌组织中Rho GDI2基因调控的主要信号通路为Vav-Rho A-ROCK-MLC和Ras-Raf-MEK。结论 Rho GDI2基因可能通过Vav-Rho A-ROCK-MLC和Ras-Raf-MEK信号通路调节肌丝蛋白、细胞骨架以及细胞的增殖、分化等,进而抑制膀胱癌转移。

硫化铜浮选及滑石高效抑制剂的研究

某氧化铜矿矿石氧化率73.5%,次生硫化铜(26.02%)主要以辉铜矿为主。矿石中滑石含量较高,对硫化铜的浮选产生不利影响。根据矿石性质,进行了硫化铜矿物浮选条件及滑石抑制剂SY作用机理的研究。其结果表明:采用捕收剂Z-200、滑石高效抑制剂SY进行浮选闭路试验,可获得铜品位60.72%、回收率23.55%的硫化铜精矿;抑制剂SY可有效降低捕收剂与滑石表面的作用,达到了抑制滑石的效果。

Rho GDP解离抑制蛋白β在布鲁杆菌感染中的作用

目的 探讨Rho GDP解离抑制蛋白（Rho GDI）β在布鲁杆菌感染中的作用。方法 构建pEGFP-Rho GDIβ真核表达质粒，转染到THP-1细胞中（实验组），筛选稳定表达pEGFP—Rho GDIβ的THP-1细胞，加强THP-1细胞中Rho GDIβ的表达后，计算被感染的细胞所占的比例和每个细胞所吞噬的布鲁杆菌数，并和对照组、pEGFP对照组比较，观察转染pEGFP—Rho GDIβ后THP-1细胞吞噬布鲁杆菌的能力。结果 在最初3．5h，随着侵袭时间的延长，吞噬了细菌的细胞所占比例逐渐增多，至4h时，95％以上的细胞都吞噬了细菌，3组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。在侵袭初期2—5h，加强了Rho GDIβ表达的THP-1细胞中含有的细菌个数略低于正常THP-1细胞内的布鲁杆菌，但差异无统计学意义（P〉0．05），这种趋势一直持续到感染后36h；在48h时，稳定表达pEGFP—Rho GDIβ质粒的THP-1细胞内的布鲁杆菌数（5．5±0．5）明显低于pEGFP对照组（7．5±1．5，P〈0．05）和对照组（8．0±1．5，P〈0．05）。结论 在感染早期，Rho GDIβ起着非常重要的作用，但布鲁杆菌的内化是-个复杂的过程，除Rho GDIβ参与此过程外，其他调节因素的作用不容忽视。

鸟苷酸解离抑制因子-2真核表达载体构建及稳定转染A549细胞株的建立

目的构建Rab蛋白鸟苷酸解离抑制因子-2(GDI2)真核表达载体并建立稳定转染A549细胞株。方法聚合酶链反应(PCR)扩增GDI2基因片段,构建pcDNA3.1-GDI2真核表达载体,经酶切、PCR、测序验证其正确性,脂质体法转染真核细胞A549,G418筛选建立稳定转染的细胞株。免疫印迹法检测稳定转染的细胞株。结果构建了真核表达载体并建立了稳定转染的A549细胞株,成功表达GDI2蛋白。结论 GDI2真核表达载体成功构建及稳定转染A549细胞株的建立,为研究GDI2过度表达对肿瘤侵袭和转移的影响奠定了实验基础。

Rho鸟苷酸解离抑制因子-2过表达载体的构建与慢病毒包装

目的:为研究β2肾上腺素能受体减敏的机制,构建Rho鸟苷酸解离抑制因子-2(Rho GDI2)过表达慢病毒载体。方法:GenBank搜索Rho-GDI2基因序列(Gene ID:14570,序列号:NM_008113),设计PCR引物扩增目的基因,双酶切后凝胶电泳回收酶切产物。质粒双酶切获得线性载体,将目的基因和线性载体进行琼脂糖凝胶电泳分离回收目的条带。再行目的基因和载体的连接,连接产物转化感受态细胞;菌液PCR阳性克隆鉴定并抽提质粒并测序。最后293T细胞内包装慢病毒质粒并测其病毒活力与滴度。结果:通过DNAStar SeqMan软件对测序结果进行分析,测序结果与目标序列一致。病毒质粒转染细胞效率较高,病毒活力较高,通过标准曲线测得病毒滴度pLenti-GDI慢病毒液:1.22×108vp/mL。结论:成功构建了Rho GDI2过表达慢病毒载体。

HIV-1蛋白酶解聚型抑制剂的计算机辅助分子设计

目的：探索性研究和设计ＨＩＶ１蛋白酶新型抑制剂—解聚型抑制剂。方法：计算机辅助药物设计的分子对接方法。结果：设计的一系列拟肽分子既可阻挠ＨＩＶ１ＰＲ二聚体的组装，又可抑制酶的活性。其中，ＰＰ３０可作为候选先导物。结论：解聚型抑制剂有望抑制突变的ＨＩＶ１ＰＲ。

磁性微球用于蛋白-抑制剂复合物解离常数的快速测定

以凝血酶与其选择特异性抑制剂阿加曲班为模型,应用磁性微球(MM)建立了一种快速测定蛋白-抑制剂复合物解离常数(Kd)的方法。该方法以四氧化三铁磁性微球为载体,在EDC/NHS偶联作用下制备了凝血酶包覆的磁性微球(Thrombin-MM),考马斯亮蓝G-250蛋白定量法间接测定蛋白键合量为4.1 mg/g,取5 mg Thrombin-MM与400μL一系列不同浓度的阿加曲班溶液混合振荡,应用高效液相色谱法通过测定平衡吸附前后药物浓度,代入Scat-chard模型,即得Kd值,与蛋白质数据库中值一致。吸附药物后的Thrombin-MM用含10%甲醇的PBS缓冲液洗脱,回收率约84%,Thrombin-MM可重复利用。