RhoC基因沉默对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的:分析RhoC对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法:利用UALCAN和K-M plotter在线数据库预测分析RhoC在OSCC中的表达及其与病理分期分生存率的关系,并结合IHC实验检测OSCC组织中RhoC的表达水平。按照人RhoC基因构建两条小干扰RNA(siRNA)并将细胞进行实验分组。RT-qPCR检测转染后各组细胞RhoC的mRNA表达水平,Western blot法分析实验分组细胞中RhoC、FAK、MAPK、p-FAK、p-MAPK、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达;此外,比较各实验分组细胞的穿膜细胞数和划痕愈合面积分析细胞的侵袭和迁移活动。最终通过构建裸鼠肺转移模型对上述实验进行验证。结果:RhoC在OSCC中高表达,并和病理分期和病理分级等关联性大。RhoC的mRNA和蛋白相对表达量在OSCC中增高(P<0.01);RT-qPCR及Western blot结果显示,敲减RhoC表达后,RhoC的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),Western blot结果显示p-FAK、p-MAPK、MMP-2和MMP-9蛋白水平显著下降(P<0.05),FAK和MAPK蛋白表达无明显变化(P>0.05);细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01);实验组在动物活体荧光成像系统下发出的荧光强度显著低于对照组,且HE染色结果显示实验组裸鼠肺结节数量明显减少(P<0.05)。结论:RhoC基因可影响OSCC细胞的迁移和侵袭能力,其潜在机制可能是通过活化FAK和MAPK信号分子参与OSCC细胞的迁移和侵袭过程。

食管鳞癌RhoC和OPN蛋白的表达及其对患者预后的影响

目的研究食管鳞癌组织中RhoC和OPN蛋白的表达及其与食管鳞癌生物学行为之间的关系。方法采用免疫组织化学方法(二步法)检测80例食管鳞癌组织中RhoC和OPN蛋白的表达情况,探讨它们与食管鳞癌肿瘤大小、组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后的关系。结果(1)RhoC蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率为66.25%,其表达与淋巴结转移有关(rs=-2.115,P<0.05),而与肿瘤大小、组织分化程度和TNM分期无关(P>0.05);RhoC蛋白阳性表达组患者的术后生存时间较阴性表达组短,(P<0.001);(2)OPN蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率为100%,OPN蛋白的表达水平与组织分化程度(χ2=10.766,P<0.05)及淋巴结转移有关(rs=-2.289,P<0.05),而与肿瘤大小和TNM分期无关(P>0.05);OPN蛋白的表达水平越高,患者术后生存时间越短(P<0.05);(3)RhoC蛋白和OPN蛋白在食管鳞癌组织中的表达之间存在正相关性(rs=0.408,P<0.001)。结论食管鳞癌组织RhoC和OPN蛋白的表达与淋巴结转移情况及患者的预后有密切关系,RhoC蛋白和OPN蛋白可作为食管鳞癌预后评价的参考指标。

非小细胞肺癌中PRL-3与RhoC的表达及相关性意义

背景与目的PRL-3是新近发现的酪氨酸蛋白磷酸酶,尚属于肝再生磷酸酶家族,具有促进肿瘤转移作用;RhoC属于小分子G蛋白超家族中的Rho亚家族,二者作用机制不清楚。本研究通过检测非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)中PRL-3和RhoC的表达,分析二者表达的相关性及在不同分组之间的差异,为进一步研究PRL-3在肿瘤发生发展中的作用机理提供实验依据。方法采用免疫组化SP法检测PRL-3和RhoC在92例NSCLC中的表达,用统计学方法检验分析二者在不同分组间的表达差异性及二者的相关性。结果在NSCLC中PRL-3和RhoC的表达阳性率分别为69.6%(64/92)、73.9%(68/92),二者的表达在不同的TNM分期、淋巴结及胸膜是否转移的分组之间差异有统计学意义(P<0.01),同时二者的表达具有相关性(r=0.754,P<0.001)。结论在NSCLC中PRL-3和RhoC在TNM分期较高以及合并淋巴结、胸膜转移的分组中表达较高,同时二者的表达具有相关性,提示PRL-3可能通过RhoC及其下游因子促进癌细胞的远处转移。

三氧化二砷抑制肝癌HepG2细胞侵袭转移及对RhoC基因表达的影响

目的了解三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用及对转移基因RhoC表达的影响,探讨As2O3抑制肝癌细胞转移的机制。方法分别采用MTT法、Transwell检测As2O3对HepG2细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响;采用RT-PCR、Westernblot方法检测As2O3作用前后HepG2细胞中RhoC基因的表达及变化。结果As2O3作用后HepG2细胞黏附率、侵袭及侵袭细胞数较对照组明显下降(P<0.05)。As2O3作用4、6、8天后RhoC-mRNA及蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05)。HepG2细胞中RhoC-mRNA表达和蛋白表达具有相关性(r=0.92,P=0.046)。结论As2O3可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力;并可通过下调RhoC基因的表达而抑制其侵袭转移。

RhoC小干扰RNA抑制胃癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究Ras homology C(RhoC)在胃癌转移中的作用。方法:利用Vector NTI软件设计并构建RhoC 的小干扰RNA(siRNA)载体,利用脂质体介导法将一组RhoC siRNA分别转染胃癌SGC7901细胞。筛选出稳定抗性克隆;Western blot检测RhoC siRNA转染后的抑制效应,Cell Counting Kit-8检测RhoC siRNA转染细胞株的生长速度;MTT法检测转染细胞株对化疗药物的敏感性;损伤刮擦实验和TRANSWELL小室实验分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力。结果:在计算机辅助下成功地设计并构建了5个RhoC的小干扰RNA载体,Western blot显示其中一个RhoC的小干扰RNA RhoC-s362对 RhoC的表达有明显的抑制作用;尽管下调RhoC的表达对胃癌细胞的生长和药物敏感性无明显影响,但可显著抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭。结论:RhoC siRNA RhoC-s362能够明显抑制胃癌SGC7901细胞中RhoC的表达,并进而抑制胃癌细胞的迁移与侵袭,提示RhoC可能在胃癌转移中发挥重要作用。

RhoC在胃癌细胞中的表达及其小干扰RNA表达载体的构建与鉴定

目的 :检测RhoC在胃癌细胞系中的表达 ,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体。方法 :以Westernblot方法检测RhoC在多株胃癌细胞系中的表达。利用计算机辅助设计RhoC特异性siRNA ,体外合成siRNA基因并将其定向克隆入真核表达载体mU6pro。以脂质体法转染RhoC siRNA载体至高转移的人胃癌细胞系AGS中 ,以Westernblot方法鉴定RhoC siRNA对RhoC表达的作用。结果 :RhoC蛋白在具有高转移潜能的胃癌细胞系中表达增强。利用BbsⅠ和XbaⅠ双酶切法鉴定重组载体后 ,DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆入mU6pro载体。RhoC siRNA载体可特异性抑制AGS细胞中RhoC的表达。结论 :RhoC特异性siRNA表达载体成功构建 。

卵巢上皮性癌组织RhoC和MMP-2蛋白的表达及其临床意义

目的:研究RhoC和MMP-2蛋白在卵巢上皮性癌组织中表达及其临床意义,为判定卵巢上皮性癌的生物学行为及预后提供依据。方法:采用免疫组织化学方法检测10例正常卵巢组织、12例卵巢上皮性良性肿瘤及91例卵巢上皮性癌组织中RhoC与MMP-2蛋白的表达,并与临床特征进行相关性分析。结果:RhoC及MMP-2蛋白在卵巢良性肿瘤和卵巢正常组织中的阳性表达率均为0,在卵巢上皮性癌组织中阳性表达率分别为37.3%和68.1%,RhoC和MMP-2蛋白在卵巢癌组织中的表达明显高于卵巢良性肿瘤和卵巢正常组织。中、低分化卵巢癌的阳性表达率明显高于高分化卵巢癌(P<0.05,P<0.005),Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌的阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌(P<0.005),有转移的卵巢癌RhoC和MMP-2蛋白的阳性表达率明显高于无转移卵巢癌(P<0.005,P<0.05),卵巢癌组织中RhoC与MMP-2阳性表达呈正相关(r=0.492,P<0.05)。结论:RhoC与MMP-2蛋白的表达与卵巢癌的细胞分化程度、临床分期及有无转移密切相关,且两者呈正相关。临床检测卵巢癌RhoC与MMP-2蛋白的表达,可以作为判断卵巢癌生物学行为及患者预后的参考指标。

RhoC基因沉默对肝癌细胞增殖的影响

目的构建靶向RhoC基因的RNA干扰(RNAi)载体,并研究RhoC基因沉默对肝癌细胞增殖的影响。方法将合成的寡核苷酸片段克隆入RNAi载体,并转染肝癌细胞,以沉默RhoC基因表达,RT-PCR检测基因抑制效果。绘制生长曲线,检测转染细胞的增殖情况,FCM检测细胞周期变化。结果构建的RNAi载体有效地抑制了肝癌细胞RhoC基因的表达,RhoC基因沉默显著地抑制肿瘤细胞增殖,增殖期细胞百分数显著下降,而静止期细胞百分数显著升高。结论RhoC基因沉默能够抑制肝癌细胞的增殖,为靶向RhoC的肿瘤基因治疗奠定了基础。

RhoC基因在原发性肝癌中的表达及其意义

目的 探讨原发性肝癌组织及癌旁肝组织中RhoCmRNA的表达及其意义。方法 采用RT-PCR技术分析 3 0例原发性肝癌病人的肝癌组织及癌旁肝组织中RhoCmRNA的表达。结果 肝癌组织中RhoCmRNA光密度相对值明显高于癌旁肝组织 (P <0 .0 1) ;有肝内转移灶者其癌组织中RhoCmR NA光密度相对值明显高于无肝内转移灶者 (P <0 .0 5 )。结论 RhoCmRNA的表达与原发性肝癌的转移程度可能有关 ,可望作为估计原发性肝癌转移的参考指标。

RhoC蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨RhoC在胃癌中的表达及其临床意义。方法收集胃癌手术标本40例和正常胃黏膜组织30例,应用免疫组化SABC法检测RhoC蛋白在上述组织的表达。结果30例正常胃黏膜组织均不表达RhoC。40例胃癌肿瘤细胞中,25例表达RhoC,阳性率为62.5%,两者之间具有显著差异(P=0.001)。RhoC的表达与肿瘤细胞分化、浸润深度未见相关性(P=0.977,P=0.141),与淋巴结转移、PTNM分期存在相关性(P=0.014,P=0.039)。结论RhoC蛋白在胃癌组织中高表达,RhoC蛋白可作为一项提示胃癌转移潜能的生物学指标。(检测胃癌组织中RhoC的表达对判断预后和指导临床治疗一定参考应用价值。)

RhoC、Rho-GDIα在肺癌细胞系中过表达并与转移相关

目的分析RhoC及其调节蛋白GDP解离抑制因子α(Guanine dissociation inhibitor,GDIα)在肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞转移能力间的关系。方法应用Westernblot、RT-PCR分别检测正常支气管上皮细胞、不同的肺癌细胞系中的RhoC、Rho-GDIa蛋白及mRNA的表达。结果RhoC、Rho-GDIα在人支气管上皮细胞、肺腺癌细胞系、肺巨细胞癌细胞系均有表达,免疫荧光显示均表达于细胞浆。RhoC、Rho-GDIα在肺癌中的表达高于人支气管上皮细胞。在高转移能力的肺巨细胞癌亚系BE1RhoC、Rho-GDIα的表达均高于低转移能力的肺巨细胞癌亚系LH7。结论RhoC、RhoGDIα在肺癌细胞系中过表达并与转移能力相关。

RhoC-siRNA表达载体对肝癌细胞生长速度及侵袭力的影响

目的构建RhoC-siRNA表达载体,研究其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法构建RhoC-siRNA表达载体,以脂质体转染法将之稳定转染入SK-Hep1肝癌细胞株,Western blot法鉴定转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况,观察转染前后肝癌细胞形态、生长曲线、黏附、运动及体外侵袭能力的改变。结果酶切及测序证实RhoC-siRNA真核表达载体构建成功,将之转染入肝癌细胞后,细胞中RhoC蛋白表达水平降低达60%,细胞形态及生长速度无明显改变,但细胞黏附、运动能力及体外侵袭能力均降低。结论RhoC-siRNA表达载体对肝癌细胞的形态及生长曲线无显著影响,但可抑制其体外侵袭转移能力,可为肝癌的生物学治疗提供新的方法。

RhoC和Ki67在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨RhoC、Ki67在非小细胞肺癌中的表达状况及其与临床病理学参数间的关系。方法利用免疫组织化学(ElivisionTMplus法),检测肺癌组织芯片中151例非小细胞肺癌患者RhoC、Ki67的表达情况。结果肺癌组织的RhoC蛋白阳性表达率为59.60%(90/151),相应癌旁组织RhoC阳性表达率为32.7%(16/49),差别有显著意义(P<0.05)。RhoC在TNMIII/IV期的NSCLC组织中阳性表达率为68.9%(51/74),明显高于在Ⅰ/II期NSCLC组织中阳性表达率50.6%(39/77,P<0.05);RhoC在出现淋巴结转移的表达率为49.2%(32/65),显著高于没有淋巴结转移的阳性表达率67.4%(58/86,P<0.05);非小细胞肺癌中RhoC高表达同Ki-67高表达呈显著正相关关系(χ2=21.634,r=0.377,P<0.01)。结论RhoC的高表达与非小细胞肺癌的分期,淋巴结转移及增殖有关。

RhoC及其调节因子RhoGDIβ、RhoGDIγ在肺鳞癌、腺癌中的表达及临床意义

背景与目的以往的研究表明,RhoC在许多肿瘤中过表达,RhoGDIβ、RhoGDIγ(Rho GDP dissociation inhibitors.β、γ)被认为是Rho的负性调节因子,目前在肿瘤中研究有限。本研究旨在探讨RhoC及其调节因子RhoGDIβ、RhoGDIγ在肺鳞癌、腺癌中的表达、他们之间的关系及临床意义。方法应用Western blot,RT-PCR检测40例新鲜肺癌组织中RhoC及RhoGDIβ、RhoGDIγ蛋白和mRNA表达,分析其与临床病理参数间的关系。结果RhoC、RhoGDIβ、RhoGDIγ蛋白和mRNA在肺癌组织表达均显著高于对应正常肺组织;RhoC、RhoGDIγ和临床TNM分期,淋巴结转移正相关(r=0.659,P<0.05)(r=0.597,P<0.05),RhoGDIβ和临床TNM分期,淋巴结转移呈负相关(r=-0.621,P<0.05)。结论RhoC及RhoGDIβ、RhoGDIγ表达水平与肺癌TNM分期及淋巴结转移密切相关。

乙肝病毒X基因对肝癌细胞表达RhoC的影响

目的探讨X基因对肝癌细胞表达RhoC基因的影响。方法用定向克隆的方法构建X基因的真核表达载体pcDNA 3.1-X,脂质体转染HEPG 2细胞;潮霉素选择培养稳定表达X基因的HEPG 2-X细胞;免疫组化鉴定HEPG 2-X细胞RhoC蛋白表达。结果构建的真核表达载体pcDNA 3.1-X在HEPG 2细胞中有稳定表达,HEPG 2-X细胞表达RhoC蛋白增强。结论体外条件下,X基因可促进肝癌HEPG 2细胞RhoC表达增强。这可能与肝癌的侵袭、转移有关。

胃癌中RhoC、CD44v6、MMP-9和VEGF的表达及相关性研究

目的:探讨RhoC(ras homologue C)、CD44v6、MMP-9和VEGF在胃癌中的表达以及在胃癌发展过程中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测120例胃癌组织中RhoC、CD44v6、MMP-9和VEGF蛋白的表达。结果:(1)RhoC、CD44v6、MMP-9和VEGF蛋白在胃癌组织中的表达均与胃癌的浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移有关。(2)RhoC分别与CD44v6、MMP-9和VEGF蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关。结论:RhoC、CD44v6、MMP-9和VEGF在胃癌的演进过程中可能具有一定协同作用。

胃癌中RhoC和MMP-9的表达及其临床意义

目的探讨RhoC基因和基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinases-9,MMP-9)基因在胃癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测120例胃癌组织中RhoC和MMP-9的表达。结果120例胃癌组织中RhoC和MMP-9阳性率分别为80.00%(96/120)、85.83%(103/120),两者表达存在相关性(P<0.05)。RhoC和MMP-9表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移和肿瘤临床分期有明显差异(P<0.05)。结论RhoC和MMP-9蛋白在胃癌中过量表达与胃癌的发生发展密切相关,检测RhoC和MMP-2蛋白表达对于评估胃癌的预后有一定意义。

RhoC和Ki67在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨RhoC、Ki67在宫颈鳞癌中的表达状况及其与宫颈鳞癌临床病理特征间的关系。方法采用免疫组化SP法检测14例正常宫颈、26例宫颈上皮内瘤变(CIN)和57例宫颈鳞癌组织中RhoC、Ki67的表达。结果①正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及宫颈鳞癌中RhoC阳性表达率分别为0%、0%、15.38%、82.46%。宫颈鳞癌中RhoC表达明显高于正常宫颈及CIN组织(P<0.05)。RhoC在宫颈鳞癌中的表达与淋巴结转移、间质浸润深度有关(P<0.05),提示宫颈鳞癌主要的转移途径即直接蔓延和淋巴转移可能与RhoC的高表达有关。与患者年龄、FIGO分期、组织学分级及脉管浸润无关(P>0.05)。②Ki67在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ及宫颈鳞癌中阳性表达率分别为28.57%、38.46%、100%、96.49%。CINⅡ/Ⅲ及宫颈鳞癌中Ki67表达明显高于正常宫颈和CINⅠ组织(P<0.05)。Ki67的表达与宫颈鳞癌临床病理参数无明显关系(P>0.05)。③宫颈鳞癌组织中RhoC表达与Ki67表达间无明显相关关系(rs=0.163,P=0.227)。结论RhoC的表达可能与宫颈鳞癌的浸润转移有关,该基因蛋白的表达情况可作为筛选高危人群及判断预后的指标之一。

RhoC过表达对人脐静脉内皮细胞体外迁移及血管生成能力的影响

目的探讨RhoC基因过量表达对内皮细胞体外迁移及血管生成过程的影响。方法构建RhoC真核表达载体,以脂质体转染人脐静脉内皮细胞(HUVE),采用RT-PCR和Western blot检测RhoC的mRNA及蛋白表达水平;划痕实验检测细胞迁移能力;胶原基质胶三维培养检测内皮细胞体外血管生成能力。结果转染RhoC实验组与空载体对照组比较,RhoC mRNA和蛋白表达明显增高;细胞迁移能力和血管样结构生成能力明显增强。结论RhoC高表达能促进人脐静脉内皮细胞体外迁移及血管生成。

RhoC、Ki-67、Bcl-2在胃癌发生发展中的表达及其相关性

目的研究胃癌组织和正常胃黏膜中RhoC、Ki-67、Bcl-2的表达情况,探讨它们在胃癌发生发展中的作用及其相关性。方法应用免疫组化SABC法检测54例胃癌标本及20例正常胃黏膜中RhoC、Ki-67、Bcl-2的表达情况。结果①胃癌组织RhoC蛋白、Ki-67蛋白及Bcl-2蛋白阳性表达率高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。②随着胃癌浸润深度的增加、分化程度的降低、淋巴结转移的出现RhoC及Ki-67阳性表达率升高(P<0.05)。③胃癌组织Bcl-2蛋白阳性表达率与胃癌的分化程度具有相关性(P<0.05)。④在胃癌组织中,RhoC与Ki-67的表达呈正相关(r=0.390,P<0.05),均呈升高趋势;但是二者与Bcl-2均无明显相关(P>0.05)。结论 RhoC、Ki-67、Bcl-2均参与胃癌的发生和发展,三者可成为判断胃癌恶性程度有价值的指标,也可成为预后评估的指标。