核糖霉素薄层扫描含量测定

核糖霉素是80年代开始使用的氨基糖甙类抗生素,由于耳毒性较氨基糖甙类抗生素低,尤其适合儿童使用,故对其质量控制很有实用价值。由于生产工艺等因素,核糖霉素产品中除主成分外,还含有结构相似而活性很低的杂质。从本实验薄层色谱图上看,核糖霉素产品中至少存在三种杂质,其一为新霉胺,另外两种结构待定。新霉胺既是生产过程中的副产品。

高效液相色谱法对氨基糖甙类抗生素分离定量的研究

本文以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)为衍生化试剂,用柱前衍生化反相高效液相色谱法分离分析了硫酸核糖霉素、丁胺卡那霉素和卡那霉素。对衍生化反应条件、样品的浓度与峰面积的相关性进行了考察,以己胺为内标物建立了定量的分析方法。对核糖霉素中的微量杂质新霉胺,卡那霉素中的杂质卡那霉素B在低浓度范围内的线性关系进行了考察及检测。

HPLC-ELSD法测定硫酸核糖霉素的含量和有关物质

目的建立硫酸核糖霉素含量和有关物质的分析方法，为该类药提供质量控制标准。方法应用高效液相色谱．蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法测定硫酸核糖霉素含量和有关物质。采用Agela Technologies Venusil ASB-C18 15nm（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相为0．11mol／L七氟丁酸酐混合溶液[称取七氟丁酸酐45．1g，置1000mL量瓶中，加乙腈-四氢呋喃-水（8：5：87）混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀]，流速为0．8mL／min，漂移管温度为110℃，雾化气体流速为3．0L／min。结果在选定色谱条件下，核糖霉素和有关物质分离良好。核糖霉素在0．34～2．68μg范围内进样量对数与峰面积对数间呈较好的线性关系（r=0．9988），最低检出量为68ng。结论方法快速、简便，结果准确可靠，重现性好，可用于含量测定和有关物质检测。

两种RP－HPLC柱前衍生化快速测定核糖霉素方法的建立与比较

分别选用３，５－二硝基苯甲酰氯和２，４－二硝基氟苯作衍生化试剂，柱前衍生，采用高效细粒度短柱（４．６ｍｍ×３．３ｃｍ，３μｍ）快速分离，二极管阵列紫外检测器检测，外标法定量，建立了核糖霉素及杂质新霉胺的两种ＲＰ－ＨＰＬＣ快速测定方法，分析时间均低于５ｍｉｎ。对方法的重现性、灵敏度、准确度、线性范围等指标进行考察，结果均令人满意。运用统计配对ｔ检验法对两种方法的测定结果进行相关分析，结果表明：方法之间无显著性差异。

反相快速HPLC测定核糖霉素方法的研究

本文选用３，５－二硝基苯甲酰氯（ＤＮＢＣＬ）作衍生化试剂，柱前衍生，采用二极管阵列紫外检测器检测，研究并建立了核糖霉素及杂质新霉胺的反相快速ＨＰＬＣ测定方法。采用高效细颗粒短柱（柱长：３．３ｃｍ，粒度：３μｍ）进行分离，整个分析时间少于５ｍｉｎ，实现了高效快速测定。按ＵＳＰ（××Ⅱ）附录分析方法评价的要求，我们对方法的重现性、灵敏度、准确度、线性范围等指标进行了考察，结果令人满意。运用所建立的分离测定方法，对原料药及制剂中核糖霉素及杂质新霉胺的含量分别进行了测定。

2，4－二硝基氟苯柱前衍生化反相快速HPLC测定核糖霉素

本文选用２，４－二硝基氟苯（ＤＮＦＢ）柱前衍生化，二极管阵列紫外检测器检测，建立了核糖霉素及杂质新霉胺的反相快速ＨＰＬＣ测定方法。按ＵＳＰ（ＸＸⅡ）版附录分析方法评价的要求，对本方法的重现性、灵敏度、准确度、线性范围等指标作考察，结果满意。因采用高效细颗粒短柱进行分离，整个分析时间于５ｍｉｎ内，实现了高效快速测定。运用所建立的分离测定方法，对硫酸核糖霉素原料药及注射液中核糖霉素及新霉胺的含量分别进行了测定。

核糖霉素高产菌株核苷链霉菌筛选

以核苷链霉菌09-15为出发菌株,采用氮离子束注入、甲基磺酸乙酯、紫外线诱变,耐抗生素的筛选等手段育种,以期获得高产菌株。测定了09-15菌对8种抗生素的敏感性,并讨论了菌株对自身代谢产物低耐受性的原因。比较了多种方法的诱变效应,氮离子束注入的诱变效应好,正变率高;紫外线正变率低。经过多种方法复合处理,获得St-150菌株,摇瓶发酵单位比亲株09-15提高20%,发酵液的杂质含量明显降低,并在20吨发酵罐得到验证。

硫酸核糖霉素在缓冲液和常用注射液溶媒中的稳定性

本文用经典恒温加速试验法,考察了硫酸核糖霉素在pH6.68磷酸缓冲液中的稳定性,通过微生物效价测定,结果表明:分解活化能E=7.622 kcal·mol^(-1),K_(25c)=5.368×10^(-4)h^(-1)。当60℃时,5%葡萄糖输液中的核糖霉素效价在6h内迅速下降,而在生理盐水和灭菌注射用水中的核糖霉素效价经144h无明显下降。

二阶导数差示脉冲极谱法的建立及在药物分析中的应用

本文研究建立了二阶导数差示脉冲极谱法(SDPP),并将其运用于硫酸核糖霉毒、卡那霉素及其制剂的定量分析。方法简便、快速、灵敏,结果准确。 二阶导教差示脉冲极谱法(又名二阶导数高速脉冲极谱法)是在一阶导数差示脉冲极谱法(FDPP)基础上建立的。由FDPP的公式再进行求导得到本法的理论公式如下:

注射用硫酸核糖霉素有关物质的检查

目的建立硫酸核糖霉素有关物质的检测方法。方法采用薄层色谱法,以硅胶G为吸附剂,以2-丁酮-甲醇-异丙醇-浓氨水-水(10:12:3:8:2)为展开剂,用0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液显色。结果核糖霉素主斑点与新霉胺及其他杂质斑点分离完全;检测限为0.08μg。结论该方法专属性强且操作简便,可用于硫酸核糖霉素及其制剂的有关物质的检查。

核糖霉素的选择性环氨基甲酸酯保护(英文)

目的发展一种新的选择性环氨基甲酸酯保护策略,用以合成具有环氨基甲酸酯结构的新型核糖霉素衍生物。方法全苄氨羰基保护的核糖霉素在氢化钠作用下环合,通过控制反应条件选择性在不同位点引入环状氨基甲酸酯保护基。将苄氧羰基催化氢化脱除可得含有环氨基甲酸酯结构的核糖霉素衍生物。结果通过反应条件的控制成功地实现了核糖霉素的选择性环氨基甲酸酯保护。脱保护得到了的核糖霉素衍生物,但并没有预期的抗菌活性。结论含有环氨基甲酸酯的核糖霉素衍生物的合成表明选择性环氨基甲酸酯保护策略是方便可行的。具有环氨基甲酸酯结构的核糖霉素衍生物可能并不具有抗菌活性。

硫酸核糖霉素分子式中硫酸数目的确定及控制方法的比较

目的:为了确定硫酸核糖霉素分子式中硫酸的数目,并选择适合的方法控制其硫酸盐的含量。方法:建立了高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)对硫酸核糖霉素的硫酸盐(SO4)含量进行测定,并开发出了同样适用的离子色谱电导法(HPIC-CD)进行结果比对。同时采用《中国药典》方法测定硫酸核糖霉素的酸碱度。结果:HPLC-ELSD法,硫酸盐(SO4)在15～250μg·mL-1范围内线性良好,检测限和定量限分别为0.16μg和0.25μg,回收率为101.1%;HPIC-CD法,硫酸盐(SO4)在20～180μg·mL-1范围内线性良好,检测限和定量限分别为0.17 ng和0.50 ng,回收率为99.8%。结论:两种硫酸盐测定方法,专属性强,灵敏度高,重复性好,测定结果无显著性差异,分子式中硫酸的数目约为1.5,进一步发现,硫酸盐含量和溶液pH值呈显著负相关,并具有一定的线性关系,酸碱度检查可以控制硫酸盐的含量。

标准曲线法测定注射用硫酸核糖霉素的抗生素效价

目的 :探讨用标准曲线法测定注射用硫酸核糖霉素的抗生素效价。方法 :利用标准曲线法测定其效价,与《中华人民共和国药典》(2015年版)四部规定用抗生素微生物检定法二剂量法测定其效价进行比较。结果 :标准曲线法测定其浓度在3.2~7.81 U/m L范围内菌圈清晰,标准品所致抑菌直径平均值的校正值与抗生素浓度对数线性关系良好(r^2=0.998 7)。结论:本法与二剂量法比较,结果无显著性差异、准确,重复性好。

核糖霉素高产菌株的选育

目的选育核糖霉素高产菌株,提高其生产发酵水平。方法以核糖苷链霉菌03-8为出发菌株,经紫外线和氯化锂复合处理后,再采用微波诱变,筛选自身产物抗性解除反馈调节突变株,同时结合单菌落自然分离纯化法进行选育。结果获得了稳定高产菌株563-44,比出发菌株产量提高201.1%,其生产能力在5吨发酵罐试验中得到验证。结论变异株563-44确实是1株高产的工业生产菌种。

旋光法快速测定注射用硫酸核糖霉素的效价

将硫酸核糖霉素及其制剂用蒸馏水适当稀释,即可用旋光光度计测定。结果显示,溶液的pH值、温度、时间等因素对测定影响甚微。据此建立的测定硫酸核糖霉素及其制剂效价的旋光度法便捷、可靠,可用于硫酸核糖霉素企业中间品控制或企业内控方法,并且可作为快速检验方法之一,用于监督抽验药品初筛和快检。

硫酸核糖霉素杂质谱的在线膜脱盐LC-Orbitrap HRMS研究

目的 建立硫酸核糖霉素杂质谱的在线膜脱盐液相色谱-静电轨道阱质谱(LC-Orbitrap HRMS)研究方法,消除流动相中三氟乙酸等对电喷雾离子化的抑制作用。方法 采用Thermo Aminoglycoside (RP_(18) 4.6 mm×150 mm, 3μm)色谱柱,以体积分数0.20%五氟丙酸0.15%三氟乙酸溶液-乙腈(99∶1)为流动相1 mL·min^(-1)等度洗脱,柱后分流(3∶2)电喷雾正离子化质谱检测。采用在线膜脱盐消除流动相中五氟丙酸和三氟乙酸对电喷雾离子化的抑制作用。结果 测得硫酸核糖霉素中11个有关物质,经质谱解析推测了其结构,分析确定其来源主要为合成中间体、副产物或降解杂质。结论 研究结果可为硫酸核糖霉素质量控制提供参考。

HPLC-CAD法测定硫酸核糖霉素有关物质及含量

目的:建立用于测定硫酸核糖霉素有关物质及含量的高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)法,优化补充2020年版《中华人民共和国药典》方法。方法:采用Agilent Zorbax SB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.15%(v/v)五氟丙酸+0.2%(v/v)三氟乙酸-甲醇(95∶5)作为流动相,流速1.0 mL·mL^(-1),柱温40℃;电喷雾检测器温度50℃。结果:所建立方法使核糖霉素及其有关物质实现良好分离,核糖霉素质量浓度在2~200μg·mL^(-1)范围内,其峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9983),检测限(LOD)为0.8μg·mL^(-1),定量限(LOQ)为2μg·mL^(-1),重复性和精密度试验RSD均<2.0%。HPLC-CAD法测定硫酸核糖霉素及有关物质含量为0.81%~1.02%、74.64%~75.22%。结论:相比于2020年版《中华人民共和国药典》硫酸核糖霉素的检测方法,该方法专属性强,灵敏度和稳定性好,为硫酸核糖霉素质量控制提供了可靠的分析手段。

高效液相色谱-脉冲安培检测法测定硫酸核糖霉素含量及有关物质

目的建立高效液相色谱-脉冲安培检测法(HPLC-PAD)测定硫酸核糖霉素的含量和有关物质。方法采用Thermo Acclaim^(TM)AmG C_(18)(4. 6 mm×150 mm,3μm)色谱柱,以0. 2%(V/V)五氟丙酸溶液[含0. 15%(V/V)三氟乙酸,用50%(m/m)氢氧化钠溶液调节pH值至1. 5]-乙腈(99∶1)为流动相,脉冲安培检测器,四电位检测波形,检测器温度35℃,进样体积为25μL。结果所建方法使核糖霉素及其有关物质良好分离,核糖霉素的检出限为0. 15μg·m L^(-1)(3. 75 ng),定量限为0. 375μg·m L^(-1)(9. 38 ng),在0. 15～40μg·m L^(-1)内,核糖霉素的浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0. 999 3),含量测定重复性RSD(n=6)为0. 33%,总杂质测定重复性RSD(n=6)为1. 10%。结论该方法专属性强,灵敏度高,稳定好,检验成本较现行Ch. P 2015方法显著降低,有望实现方法替代。

国产注射用硫酸核糖霉素质量评价

目的:采用法定检验与探索性研究相结合的方法对国产注射用核糖霉素质量现状及存在问题进行评价。方法:采用现行标准对抽验样品进行法定检验;建立并完善用于探索性研究的多个方法:(1)建立ELSD、CAD和PAD法测定有关物质及含量;采用在线膜抑制脱盐技术辅助LC-Orbitrap HRMS研究本品杂质谱;采用豚鼠模型和斑马鱼胚胎模型,以及纸片扩散和常量肉汤稀释法分别测定主药和相关物质的毒性以及体外抗菌活性;(2)制备精制品,采用质量平衡法测得其纯度,管碟法测得其效价,建立量效转换桥接关系;(3)建立HPLC-ELSD法及HPIC-CD法测定硫酸核糖霉素中硫酸盐含量;(4)综合应用多种现代分析技术优化干燥失重(或水分)测定条件;等等。结果:法定检验显示,本次抽验样品所有批次均符合标准规定;新建立的3种有关物质和含量测定方法,在灵敏度、专属性、重复性及检验经济学等方面均优于法定方法;杂质谱研究结果显示,注射用硫酸核糖霉素有个10潜在杂质,结合毒理实验与抗菌活性显示,有必要在标准中对新霉胺单独控制;测定得到量效转换系数为991 u·mg^-1,验证结果显示,该系数可实现量效方法转移的要求;HPLC-ELSD法测定硫酸盐结果被HPIC-CD法验证,酸碱度与硫酸盐含量呈负相关,分子式中硫酸个数为约为1.5;干燥失重研究显示,60℃减压干燥6 h较科学。结论:目前国产注射用硫酸核糖霉素制剂工艺较为稳定,总体质量较好;现行注射用硫酸核糖霉素质量标准存在缺陷,有待完善。