新疆南部图兰扇头蜱及卵携带R.raoultii的分子检测

【目的】世界上蜱类3科18属899种,中国有2科10属117种,新疆至少有2科10属45种,占全国蜱种类的1/3之多,分布也极其广泛。蜱直接危害和传播多种病原,且一些病原可经卵垂直传播,给畜牧业造成巨大经济损失,还严重威胁公共卫生安全。图兰扇头蜱是新疆南部荒漠及半荒漠地区常见种和优势种。确定新疆南部图兰扇头蜱及其卵是否携带立克次体,对该蜱及其传播立克次体病的防控意义重大。【方法】对新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室在新疆南部阿拉尔市某羊场收集的饱血雌性扇头蜱,置于一定湿度和一定温度的环境中产卵,随机取5个独立的卵样品及其对应的5只雌蜱为研究对象。通过对雌蜱及其卵分别处理后提取基因组DNA,进行PCR扩增蜱12S r RNA基因和立克次体16S r RNA基因,并对扩增产物测序,利用BLAST在线平台和多个分子生物学软件进行序列分析。【结果】5只雌蜱12S r RNA基因PCR扩增全部阳性,测序获得的4段蜱12S r RNA基因序列完全一致;Blast分析与Gen Bank数据库中图兰扇头蜱12S r RNA基因序列相似性高达99%以上,且高相似性前五基因序列均为图兰扇头蜱,其中包括来自新疆绵羊的图兰扇头蜱;本研究蜱12S r RNA基因序列提交Gen Bank数据库获得登录号为MG744514,与来自于Gen Bank数据库图兰扇头蜱、血红扇头蜱、微小牛蜱、边缘革蜱、草原革蜱、长角血蜱、小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、残缘璃眼蜱、全沟硬蜱及外围群尘螨的22个12S r RNA基因序列的进化树显示,研究所获得的蜱12S r RNA基因序列与图兰扇头蜱进化关系最近,聚在同一个小分支;确定了该扇头蜱为图兰扇头蜱。5只产卵后的雌蜱和相应蜱所产的全部卵立克次体16S r RNA基因PCR扩增,有1只蜱和其产的卵样品阳性,蜱携带率为20%;雌蜱及其卵立克次体16S r RNA基因测序结果完全一致;Blast分析与Gen Bank数据库中Rickettsia raoultii 16S r RNA基因序列相似性高达99%以上,且高相似性前五基因序列为4个Rickettsia raoultii和1个Rickettsia sp.,其中包括来自新疆2011年的亚洲璃眼蜱和草原革蜱的立克次体;立克次体16S r RNA基因序列提交Gen Bank数据库获得登录号为MG744513,与来自于Gen Bank数据库的37个24种立克次体16S r RNA基因序列的进化树显示,研究获得的立克次体16S r RNA基因序列与Rickettsia raoultii进化关系最近,聚在同一个小分支,与其他15种立克次体同属于斑点热群立克次体;确定了本研究图兰扇头蜱及其卵均携带斑点热群立克次体R.raoultii。【结论】首次发现图兰扇头蜱及其卵携带R.raoultii。

新疆地区Rickettsiaraoultii分子流行病学研究

Rickettsia（R．）raoultii是一种新发现的斑点热群立克次体（spottedfevergroupRickettsiae），为胞内革兰阴性菌，主要通过蜱叮咬传播。其分布广泛，目前已从13个国家和地区的革蜱（D．silvarum）等10种蜱中检出。近期研究表明，R．raoultii是蜱致淋巴结病（tick．

河北省野鼠立克次体感染调查

目的调查河北省南部和东北部野鼠立克次体感染情况以及感染株的遗传进化特征。方法采用粘鼠板和鼠笼在河北南部邯郸市及北部承德市进行捕鼠,提取鼠脾脏DNA,采用半巢氏PCR扩增立克次体的16S rRNA、ompA、gltA基因,对扩增阳性产物进行测序,并对获得序列进行同源性比较和系统发生树分析。结果在邯郸市和承德市共捕获鼠100只,在这些鼠脾脏样本中有6份(6%)被PCR扩增阳性,其中邯郸市2份、承德市4份。PCR阳性产物测序后同源性分析,发现本研究中扩得的6株立克次体的3个目的基因序列均与劳氏立克次体相应基因序列的同源性最高,16S rRNA与gltA的同源性大于99.9%,ompA大于98.8%。基因序列系统发生树分析结果显示河北野鼠携带的立克次体菌株与我国其它地区检出的劳氏立克次体菌株有密切的亲源关系。结论河北省南部和东北部野鼠均存在劳氏立克次体的感染,野鼠生存地区可能为立克次体感染的自然疫源地,应加强当地人群立克次体感染的防控。

新发蜱传病原体--劳氏立克次体的研究现状

劳氏立克次体是一种新发现的蜱传病原体,属于立克次体属斑点热群中的一员,其主要引起人的蜱传淋巴结炎等疾病。劳氏立克次体目前主要发现存在欧洲和亚洲。蜱是劳氏立克次体传播媒介,革蜱的携带率最高,平均携带率高达47.74%。劳氏立克次体已在我国吉林、黑龙江、西藏、新疆、甘肃等地的蜱中检出。本文从劳氏立克次体的地理分布、传播媒介、医学重要性及分子生物学等方面研究现状做一综述。

黑龙江口岸斑点热群立克次体调查研究

为了解黑龙江口岸地区斑点热群立克次体在人群、鼠类、蜱类中的分布特征，针对黑龙江省9个中俄边境口岸，采集出入境人群的血液样本215份、鼠类样本204份、蜱类样本188份，利用半巢式PCR方法对所有样本进行斑点热群立克次体特异性片段扩增，通过基因测序对斑点热群立克次体分型。结果在哈尔滨机场及嘉荫两个口岸的大仓鼠及小家鼠中检测到2例劳氏立克次体Rickettsia raoultii，为首次在黑龙江口岸鼠样本中检测出劳氏立克次体；在188份蜱样本中，检出斑点热群立克次体阳性样本101例，感染率达53．7％，其中劳氏立克次体89例，新塔拉塞维奇立克次体Candidatus Rickettsia tarasevichiae11例，黑龙江立克次体Rickettsia heilottgjiaagii1例，同样首次在黑龙江口岸全沟硬蜱中检测到新塔拉塞维奇立克次体。黑龙江中俄边境口岸开展SFGR的长期监测具有非常重要的公共卫生学意义。

内蒙古部分地区草原革蜱携带斑点热群立克次体DNA检测及其基因型分布

目的:调查内蒙古部分地区草原革蜱携带斑点热群立克次体(SFGR)的情况,分析该地区蜱携带SFGR的种类并进行同源性分析。方法:于2019年4月中旬在内蒙古自治区的鄂尔多斯市鄂托克前旗成川镇、呼和浩特市四子王旗牧场和赤峰市阿鲁科尔沁旗天山镇巴彦温都苏木地区,通过普查的方法从708只绵羊中采集了264只草原革蜱,进行单蜱DNA的提取,采用PCR法扩增立克次体16sRNA进行初筛,从每个地区阳性样本中随机选取10个,共30个阳性样本进一步扩增其gltA和ompA基因,并对阳性样品进行序列测定和聚类分析。结果:在264只蜱虫中,共检出SFGR阳性蜱218只,阳性率为82.57%。成功测序14个SFGR ompA阳性样本,7个SFGR gltA阳性样本,序列分析发现gltA基因和ompA基因的相似度分别为100.00%及99.86%。系统发育分析,所检出的序列与劳氏立克次体在一个分支上,gltA基因序列与乌拉尔立克次体、帕克立克次体和西伯利亚立克次体亲缘关系较近;ompA基因序列与马赛立克次体和扇头蜱立克次体的亲缘关系接近;两者均与蒙纳克立克次体亲缘关系较远。结论:内蒙古自治区西部、中部和东部3个地区的草原革蜱携带SFGR的基因型均是劳氏立克次体。

内蒙古自治区森林革蜱感染立克次体、无形体及埃立克体的研究

目的了解我国内蒙古自治区(内蒙古)森林革蜱感染立克次体、无形体及埃立克体等病原体情况,并研究其遗传多样性。方法在内蒙古乌兰察布市四子王旗、呼和浩特市土默特左旗家畜体表采集寄生蜱成蜱76只,经形态学和分子生物学鉴定后,用针对16S rRNA基因和柠檬酸合成酶基因(gltA)保守区域的引物同时检测立克次体,用针对16S rRNA基因的属特异性引物检测埃立克体、无形体。对检出的阳性样本,使用巢式PCR扩增获得gltA和热休克蛋白基因(groEL)。用PhyML 3.0软件进行最大似然法进化树构建。结果采获蜱经鉴定均为森林革蜱。从上述采集蜱中检出立克次体阳性8份,其中四子王旗6份(6/35,17.14%),土默特左旗2份(2/41,4.88%),测序结果显示均为劳氏立克次体。对3个基因序列的进化分析,上述菌株分成2个不同的分支,当地流行的劳氏立克次体有一定遗传多样性。未检出埃立克体和无形体。结论内蒙古的革蜱中存在劳氏立克次体的流行,且存在一定遗传多样性。劳氏立克次体为人类病原体,在内蒙古局部地区较高的阳性率提示可能存在感染人的风险。

黑龙江萝北口岸蜱传立克次体分子流行特征研究

目的了解我国和俄罗斯边境媒介蜱携带立克次体携带情况及其分子流行特征。方法2019年在黑龙江省萝北口岸地区采集蜱,经形态学鉴定后提取DNA,用PCR方法检测立克次属核酸片段,对阳性样本进行测序,利用Mega6.06、Lasergene软件进行序列分析,构建系统进化树。结果共采集蜱63只,其中61只为森林革蜱,2只为全沟硬蜱。1只森林革蜱检测到立克次体核酸,检出率为1.59%。经基因序列同源性分析,为斑疹伤寒群立克次体—劳氏立克次体,显示与黑龙江株(MG906669)同源性最高。结论萝北口岸地区存在立克次体传播风险。

2019—2020年内蒙古部分地区蜱携带斑点热群立克次体的调查

目的了解内蒙古中东部地区蜱感染斑点热群立克次体情况。方法2019—2020年5-6月,在内蒙古额尔古纳市、满洲里市、阿尔山市、锡林浩特市、阿日哈沙特口岸和额布都格口岸,采用人工布旗法采集蜱,用PCR的方法扩增斑点热群立克次体omp A基因,对阳性样本进行序列测定并构建系统进化树。结果共采集到379只蜱,其中草原革蜱146只(38.5%)、森林革蜱200只(52.8%)、全沟硬蜱33只(8.7%),斑点热群立克次体阳性率为63.9%,共检测到拉欧蒂立克次体(Rickettsia raoultii)、新塔拉塞维奇立克次体(Rickettsia(Candidatus)tarasevichiae)、西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)3种立克次体。基于omp A基因片段的进化分析显示,3种立克次体分别与俄罗斯发现的拉欧蒂立克次体Tomsk株(MK304548)、我国黑龙江发现的新塔拉塞维奇立克次体哈尔滨株Bayan-68(MN450411)、前苏联发现的西伯利亚立克次体(U4807.1)关系密切,同源性99.8%~100.0%。结论森林革蜱和草原革蜱是内蒙古中东部地区的优势蜱种,草原革蜱斑点热群立克次体的感染率高于其他蜱种,应当引起重视。