结核杆菌耐利福定与细菌RNA聚合酶变异关系的研究

选用结核杆菌H37Rv,于体外诱导筛选获得耐利福定（1250μg/ml）菌株,检测了利福定抗结核杆菌活性及其与6种常用抗结核药物的交叉耐药性;以3H-尿苷进行掺入实验,发现利福定明显抑制3H-尿苷掺入敏感菌,而对掺入耐药菌则无抑制;提取及分析结核杆菌RNA聚合酶,发现敏感菌酶活性受利福定明显抑制,耐药菌酶活性则未见抑制。结果提示:结核杆菌耐利福定与耐药菌RNA聚合酶改变有关。

黄连素联合利福定灌肠治疗小儿细菌性痢疾的疗效观察

目的观察黄连素联合利福定保留灌肠治疗小儿细菌性痢疾的疗效。方法将98例患儿分为观察组49例和对照组49例,观察组用黄连素、利福定保留灌肠。对照组用呋喃唑酮、庆大霉素保留灌肠.结果观察组显效36例,有效11例,无效2例,有效率为95.9%.对照组显效20例,有效19例,无效10例,有效率为79.6%。结论黄连素联合利福定保留灌肠能缩短病程,疗效佳,且未发现不良反应。

利福定敏感与耐药结核杆菌等细菌的扫描电镜和透射电镜观察

选用结核杆菌、金色葡萄球菌、变形杆菌与大肠杆菌及其相应的体外诱导耐利福定菌株进行扫描电镜与透射电镜观察。结果提示细菌耐利福定后在形态及结构方面发生了改变,但因细菌的种类而异。

利福定晶型转化研究

根据不同温度、湿度及水-乙醇气氛中晶体转化试验,并结合晶体中乙醇含量的测定结果,认为利福定Ⅰ型晶与Ⅳ型晶在一定条件下可相互转化,其转化的物质基础是水与乙醇的相互交换。另外,两晶型在较高温度下,可产生另一较稳定的非溶剂化晶型,定为Ⅴ型晶。利福定Ⅱ、Ⅲ型晶在实验研究中未见到任何转晶现象。

高效液相色谱法测定利福定尿药浓度及生物利用度

本文用反相高效液相色谱法测定了利福定在人体尿液中的浓度。色谱条件为:Shimpack CLC-TMS 5μm柱(150×4.6mm);0.01M磷酸二氢钾缓冲液—乙腈(50:50)为流动相;检测波长316nm.尿中利福定在0.2～20μg/ml的范围内呈线性关系。有机溶媒提取率为93%.用本法测定了利福定固体分散物相对于原药的生物利用度为147.7%.

耐利福定大肠杆菌K—12包膜组分的生化分析

通过提取大肠杆菌K-12敏感株及其耐利福定株的包膜,并对其组分作了初步的生化分析。结果表明:十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳发现耐药株包膜蛋白质中一条分子量为52KD的蛋白带较相应敏感株包膜蛋白有明显减少;超薄膜层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳分析提示敏感株与耐药株包膜蛋白的等电点无明显区别,均为4.5～6.7;氨基酸组成分析提示敏感株与耐药株包膜的各种氨基酸及其含量无明显区别;薄层色谱分析提示耐药菌膜脂较敏感菌膜脂多分离出1种组分,前者7种组分,后者仅6种组分;敏感株与耐药株包膜总含量分别为每毫克干重包膜含糖186.7±15.3和150.0±17.0微克。提示大肠杆菌K-12耐利福定后包膜屏障通透性的改变可能系蛋白质和脂类改变的结果。进一步的研究工作仍在继续之中。

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌对利福定耐药与包膜屏障改变的关系

选用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及变形杆菌敏感株,经药物梯度平皿筛选得到耐药性突变株,测定细菌生长浊度变化。以利福定(RFD)或EDTA分别作用时,耐药菌的生长曲线不受影响,RFD和EDTA合用,则耐药菌的生长曲线受到明显抑制。以~3H-RFD分别掺入敏感菌及耐药菌,前者的药物掺入量明显高于后者。电镜观察见耐药菌菌体变得粗短,表面粗糙,外膜增厚,膜皱折增多。以上结果提示,细菌包膜屏障在耐药性产生中具有重要作用。

细菌耐利福定与RNA多聚酶的关系

以药物梯度平皿筛选得到金黄色葡萄球菌NCTC6571、大肠杆菌NCTC10418及普通变形杆菌1065的耐利福定菌株。利福定能明显抑制~3H-尿苷掺入敏感菌株,而对耐药菌株的RNA合成无明显影响;利福定与利福平对标准RNA多聚酶活性的抑制随着药物剂量的增加而加强;提取及纯化RNA多聚酶,利福定能明显抑制敏感菌的酶活性,而对金黄色葡萄球菌NCTC6571与大肠杆菌NCTC10418耐药菌株的酶活性无明显影响。

利福定的剂型研究

本文试制了利福定的一种新剂型。动物和人体内实验结果表明:利福定与半合成脂肪性基质制成复合制剂,降低了其对狗肝脏的毒性,增加在家兔体内的生物利用度,而不影响其化学稳定性。说明此复合制剂为临床上治疗结核病较理想的制剂。

利福定在家犬体内的药物动力学

本文用反相高效液相色谱方法测定体液中利福定的含量。比较了健康家犬与胆瘘术后家犬的药物动力学参数的差异。家犬口服150mg利福定,胆汁平均排泄量为11.8mg。实验表明肠肝循环对药物动力学参数有很大影响。

利福定血浆蛋白结合率的测定

采用平衡透析法测得3H—利福定在各浓度(1.0～25μg/ml)时的血浆蛋白结合率在74.55±4.05～82.45±2.81之间。5.0～25.0μg/ml浓度范围内其血浆蛋白结合率无显著差异(P>0.05)。说明在一定浓度范围内利福定血浆蛋白结合率无浓度依赖性。用5.0μg/ml浓度分别和不同浓度异烟肼、乙胺丁醇合用;或用不同透析液、不同透析条件,观察到异烟肼在1.50μg/ml时明显降低利福定血浆蛋白结合率。低温使利福定血浆蛋白结合率到达平衡的时间显著延长。

利福定和利福平对小鼠肝微粒体酶的影响比较

利福定和利福平具有相似的化学结构,为了比较二者对肝微粒体酶的影响,我们考察了它们对小鼠体内安替比林血浆水平、戊巴比妥钠睡眠时间和肝脏重量的影响,测定了肝微粒体蛋白和细胞色素P-450含量及两种酶活性的改变,用凝胶电泳法比较了微粒体多肽组份相对含量的变化。结果表明,利福平在这些方面均表现出显著的肝微粒体酶诱导作用,而利福定则否。这提示利福定可能在临床很少导致严重的药物相互作用发生。

大肠杆菌耐利福定突变基因的克隆及限制性酶切谱分析

采用利福定（ｒｉｆａｎｄｉｎｅ，ＲＦＤ）浓度梯度平皿筛选得４株耐ＲＦＤ大肠杆菌（ＲＦＤ的ＭＩＣ为５００μｇ／ｍｌ），连续传两代其耐药性保持稳定；对４株耐ＲＦＤ大肠杆菌，采用酚—氯仿法，酚—透析法和蛋白酶Ｋ— 玻棒缠绕法提取其总ＤＮＡ和采用煮沸法、 碱法提取质粒，经琼脂糖凝胶电泳分析，结果均未见质粒ＤＮＡ带。 提示所试菌株的耐药系突变耐药，由染色体介导。对耐ＲＦＤ 大肠杆菌２２８０，用蛋白酶Ｋ—玻棒缠绕法提取其染色体ＤＮＡ，并选Ｂｇ１Ⅱ完全酶切，获许多大小不等的ＤＮＡ片段，然后与碱法提取的ＢａｍＨＩ 酶切的载体质粒ｐＢＲ３２２（ＡＭｐｒ、ＴＣｒ失活，４．ｓｋｂ）用Ｔ４－ＤＮＡ连接酶连接，重组体再向感受态大肠杆菌ＨＢ１０１转化，最后在含ＲＦＤ５０μｇ／ｍｌ，ＡＭＰ６０μｇ／ｍｌ的选择性ＬＢ琼脂平板上筛选获得了携有耐ＲＦＤ突变基因重组＊质粒ｐＢＤ８０２的菌落。检测ＲＦＤ的ＭＩＣ为５１２μｇ／ｍｌ，琼脂糖凝胶电泳显示其耐ＲＦＤＤＮＡ片段的大小约１６ｋｂ。选ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＨｐａⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＳａｌⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｌⅡ、ＰｓｔⅠ８种限制性内切酶对ｐＢＤ８０２进行完全酶切，分析了其限制性酶切电泳图谱特征?

HPLC测定利福定胶囊的含量

目的 建立利福定胶囊的含量测定方法。方法 采用KromasilC18柱 (4 .6mm× 2 0 0mm ,5 μm) ,以甲醇 - 0 0 5mol·L-1乙酸铵溶液为流动相 ,进样 2 0 μl,检测波长 2 5 4nm。 结果 利福定在 0 0 5～ 0 5 4mg·ml-1范围内 ,呈良好的线性关系 (r =0 9999) ,平均回收率为 10 0 6 6 % ,RSD =0 82 %。结论 方法准确可靠 。

利福定不同晶型和制剂的生物利用度

利福定为一多晶型化合物。实验表明由Ⅰ型或Ⅳ型晶型的利福定制成的胶囊剂有较高的生物利用度和疗效。

异丁基哌嗪力复霉素固体分散体及片剂的生物利用度研究

本文对异丁基哌嗪力复霉素固体分散体和片剂的体内外溶出和吸收进行了对比研究,结果表明:以PEG4000-葡萄糖(1:1) 为联合载体与异丁基哌嗪力复霉素(2:1)制成固体分散体,其体外溶出速率好,犬体内血药浓度高;而人体尿药排出量以纯药粉为最高。

利福定标准物质的研制

目的:为满足国内利福定质量控制需要,标定首批利福定标准物质的含量。方法:采用质谱、核磁共振等技术对利福定标准物质的结构进行确证,并首次对该化合物的核磁信号进行了准确归属。采用质量平衡法确定了利福定的含量并进一步利用核磁定量法对上述结果进行佐证。结果:本批利福定标准物质的纯度按利福定(C45H63N)3O12)计为86. 6%。结论:建立了首批利福定标准物质检测方法。

利福定固体分散物的制备及生物利用度测定

用溶媒法制备了利福定固体分散物。经X—射线衍射实验证明,利福定在固体分散物中呈无定形或以分子状态分散于载体中。固体分散物2小时的体外溶出量和人体生物利用度分别较原药提高了88％和21.8％。

利福定与复方磺胺甲噁唑联合应用对老年压疮患者疗效的临床观察

目的探讨利福定联合复方磺胺甲噁唑（百炎净）治疗老年压疮患者的临床疗效。方法将120例老年压疮患者随机分为治疗组60例（80处）和对照组60例（75处），创面给予常规清创处理后，实验组用利福定、百炎净片剂按1：1的比例混合磨成粉剂直接覆盖，对照组直接覆盖百炎净。结果实验组平均愈合时间为（8．72±0．32）d，较对照组愈合时间（12．31±0．54）d明显缩短（P〈0．05），同时实验组换药次数明显减少（P〈0．05）；实验组患者的疼痛程度减轻明显（P〈0．05）。结论利福定联合百炎净治疗压疮能够明显缩短创面愈合时间、减少换药次数，并使疼痛得到有效缓解。

2种剂量利福定在肺结核短程治疗中的疗效比较

晨起空腹顿服利福定，治疗痰结核杆菌阳性患者２１８例。Ａ组１０７例（男性７６例，女性３１例；年龄３０±ｓ１１ａ），用量为４５０ｍｇ／ｄ；Ｂ组１１１例（男性８２例，女性２９例；年龄３２±１０ａ），用量为１５０－２２５ｍｇ／ｄ，并与Ｃ组用利福平的１０９例患者比较。３组疗程均为９ｍｏ。结果：Ａ组疗效明显优于Ｂ组，与Ｃ组相仿。不良反应Ａ组比Ｂ组多见，但与Ｃ组相似。