CCNE1、RIP2基因多态性与膀胱癌发病风险的关系

目的 细胞周期蛋白E1（CCNE1）基因和受体相互作用蛋白2（RIP2）基因区域分别存在多态性位点rs8102137和rs42490,探讨这2种多态性与膀胱癌的发病风险及膀胱癌的病理分级和分期之间的关系。方法 收集膀胱癌患者（膀胱癌组）176例及非肿瘤体检患者（对照组）210例血样本并提取DNA,聚合酶链反应（PCR）测序方法检测CCNE1（rs8102137）和RIP2（rs42490）的多态性。根据术后病理结果确定膀胱癌患者的分级及分期。分析膀胱癌组和对照组中等位基因和基因型的分布差异。对2组间基因型的分布情况进行比较,分析CCNE1（rs8102137）和RIP2（rs42490）各基因型与膀胱癌患者的临床资料间的关系,及与膀胱癌遗传易感性的关系。结果 对照组样本的基因型分布具有良好的群体代表性。CCNE1（rs8102137）突变型（C/T＋C/C）在膀胱癌组中频率（40.91%）高于对照组（30.95%,OR=1.54,95%CI：1.02~2.45,P〈0.05）。RIP2（rs42490）突变型（A/G＋G/G）在膀胱癌组频率（72.73%）高于对照组（62.38%,OR=1.61,95%CI：1.04~2.48,P〈0.05）。不同膀胱癌病理分级、分期患者的CCNE1（rs8102137）和RIP2（rs42490）基因多态性差异无统计学意义。结论 CCNE1（rs8102137）、RIP2（rs42490）基因型与膀胱癌易感性关系密切,携带突变型等位基因的个体患膀胱癌的风险显著高于野生型个体。

人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定

目的:构建人RIP2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:根据特定限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含人RIP2基因启动子不同长度2段序列,构建含人RIP2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt、pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt,用VspⅠ和NheⅠ双酶切鉴定重组质粒,进行DNA序列分析,重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导转染HEK293细胞48 h后观察。结果:酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,重组质粒转染HEK293细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt。结论:成功构建2段不同长度的人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体。

腺病毒介导突变Rip2基因对膀胱上皮细胞清除克雷伯杆菌的影响

目的探讨受体相互作用蛋白2(Rip2)在克雷伯杆菌所致的尿路感染中的作用。方法使用含有突变Rip2基因(mRip2)、绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒(Ad-mRip2-GFP)感染人膀胱上皮癌细胞T24细胞,表达GFP为转染成功标志,观察转染率,同时感染含有GFP基因腺病毒做对照,利用克雷伯杆菌临床分离株Kp5与细胞37℃孵育4、24、48小时,用平板培养菌落计数活菌数。结果刺激后,在感染Ad-mRip2-GFP的T24细胞清除胞内Kp5能力下降,与Ad-GFP组比较P<0.01。结论Rip2可以阻断膀胱上皮细胞的清除克雷伯杆菌作用,提示Rip2在膀胱上皮细胞的天然免疫中可能起重要作用。