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GS介导RNase P对人巨细胞病毒ul54基因mRNA的切割作用 被引量:1
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作者 李弘剑 黎景光 +5 位作者 苏运贞 陈浩军 李月琴 叶飞舟 张欣 周天鸿 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期275-281,共7页
引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1G... 引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1GS核酶。通过对ul54基因D片段转录产物体外切割实验和将T7-M1GS构建在含有U6启动子的逆转录病毒载体,与构建在真核载体pEGFP-N1的ul54基因D片段共转染人宫颈癌细胞系HeLa的体内切割实验,证实该核酶具备对ul54基因D片段mRNA的特异切割能力,为利用核酶治疗HCMV感染提供实验基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒HCMV μ/54基因 rnase p 引导序列(GSs) 荧光定量pCR
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RNase P对人巨细胞病毒mRNA的体外靶定切割研究 被引量:2
2
作者 何华坤 李月琴 +3 位作者 王波 张文军 苏运贞 周天鸿 《中国优生与遗传杂志》 2004年第2期8-10,共3页
目的 探讨核酶P对HCMVUL97mRNA的体外切割能力。方法 以人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)磷酸转移酶mRNA序列为靶设计externalguidesequences(EGS) ,共价结合到大肠杆菌来源M 1RNA中 ,构建成M 1GS-T5核酶。对其进行UL97基... 目的 探讨核酶P对HCMVUL97mRNA的体外切割能力。方法 以人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)磷酸转移酶mRNA序列为靶设计externalguidesequences(EGS) ,共价结合到大肠杆菌来源M 1RNA中 ,构建成M 1GS-T5核酶。对其进行UL97基因亚克隆片段转录产物的体外切割实验。结果 该核酶在一定离子浓度下具对UL 97mRNA片段产生特异切割能力。结论 新构建得到的核酶MIGS -T5具特异性切割活性 ,可发展为一种抗病毒试剂。 展开更多
关键词 核酶p 引导序列 人巨细胞病毒 磷酸转移酶
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RNase P核酶对人巨细胞病毒UL54基因mRNA体外切割作用
3
作者 周乐平 李弘剑 +4 位作者 陈浩军 李月琴 何华坤 王波 周天鸿 《中国病毒学》 CAS CSCD 2004年第2期110-113,共4页
外部引导序列(EGSs)是mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。我们设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus) UL54基因mRNA序列互补的EGSs,将其与大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA构建成M1GS核酶。通过对UL54基因亚克隆... 外部引导序列(EGSs)是mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。我们设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus) UL54基因mRNA序列互补的EGSs,将其与大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA构建成M1GS核酶。通过对UL54基因亚克隆片转录产物体外切割研究,证实该核酶具备对UL54 mRNA片段的特异切割能力,可以发展成为一种抗病毒试剂。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒HCMV UL54基因 MRNA rnasep 外部引导序列
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引导RNase P对HCMV UL54 mRNA片段体外切割的EGS构建
4
作者 吕静竹 李月琴 周天鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期4-6,共3页
HCMV是一种广泛存在的疱疹病毒,在免疫抑制和免疫功能低下人群中,HCMV感染可引起严重疾病。RNase P是细胞内催化tRNA5′末端成熟的酶,当EGSs与靶mRNA互补结合并形成类似tNRA的复合物时,大肠杆菌RNase P催化亚基M1 RNA可具备对靶mRNA特... HCMV是一种广泛存在的疱疹病毒,在免疫抑制和免疫功能低下人群中,HCMV感染可引起严重疾病。RNase P是细胞内催化tRNA5′末端成熟的酶,当EGSs与靶mRNA互补结合并形成类似tNRA的复合物时,大肠杆菌RNase P催化亚基M1 RNA可具备对靶mRNA特异的催化切割活性。为研究抗病毒制剂,针对HCMV DNA多聚酶UL54 mRNA设计并构建特异性的EGS-C6,通过对UL54基因亚克隆片段转录产物体外切割研究,证实该EGS具备引导M1 RNA对UL54 mRNA特异切割的能力,可发展成一种新型抗病毒制剂。 展开更多
关键词 rnase p 外部引导序列 人巨细胞病毒 UL54基因
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RNase P体外靶定切割人巨细胞病毒UL54 mRNA片段研究
5
作者 吕静竹 李月琴 周天鸿 《蚌埠医学院学报》 CAS 2010年第6期552-554,共3页
目的:观察大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外水平上对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)DNA聚合酶UL54 mRNA的切割效果,探讨核酶作为新型抗病毒制剂的应用前景。方法:针对HCMVUL54 mRNA设计特异性的外部引导序列(externa... 目的:观察大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外水平上对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)DNA聚合酶UL54 mRNA的切割效果,探讨核酶作为新型抗病毒制剂的应用前景。方法:针对HCMVUL54 mRNA设计特异性的外部引导序列(external guide sequences,EGSs)EGS-T6,观察其引导M1 RNA特异的细胞外切割活性。结果:在EGS-T6引导下,大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外可特异地对靶mRNA进行有效切割。结论:EGS-T6具备引导M1 RNA对UL54 mRNA特异切割的能力,可发展成一种新型抗病毒制剂。 展开更多
关键词 rnase p 外部引导序列 人巨细胞病毒 UL54 MRNA
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RNase P:Beyond Precursor tRNA Processing
6
作者 Peipei Wang Juntao Lin +1 位作者 Xiangyang Zheng Xingzhi Xu 《Genomics, Proteomics & Bioinformatics》 SCIE CAS CSCD 2024年第1期19-28,共10页
Ribonuclease P(RNase P)was first described in the 1970’s as an endoribonuclease acting in the maturation of precursor transfer RNAs(tRNAs).More recent studies,however,have uncovered non-canonical roles for RNase P an... Ribonuclease P(RNase P)was first described in the 1970’s as an endoribonuclease acting in the maturation of precursor transfer RNAs(tRNAs).More recent studies,however,have uncovered non-canonical roles for RNase P and its components.Here,we review the recent progress of its involvement in chromatin assembly,DNA damage response,and maintenance of genome stability with implications in tumorigenesis.The possibility of RNase P as a therapeutic target in cancer is also discussed. 展开更多
关键词 rnase p Chromatin assembly DNA damage response Genome stability TUMORIGENESIS
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五重荧光定量RT-PCR法检测甲型流感病毒 被引量:9
7
作者 戴玉柱 崔大伟 +7 位作者 杨先知 谢国良 成军 孙长贵 王国政 金美彤 李静云 陈瑜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第9期641-644,共4页
目的建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A(Flu A)及血凝素H3、H5、H7基因亚型的方法。方法以人细胞核糖核酸酶P(RNase P)基因为内参照,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针。构建质粒标准品用于分析该方法的灵... 目的建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A(Flu A)及血凝素H3、H5、H7基因亚型的方法。方法以人细胞核糖核酸酶P(RNase P)基因为内参照,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针。构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,利用不同来源的呼吸道病毒样本进行特异性分析。结果该法检测Flu A、H3、H5、H7以及RNase P质粒标准品的灵敏度均达102copies/m L,特异性达100%,各对引物和探针仅检测出相应的病毒,未有交叉反应,变异系数(CV)≤1.99%。结论建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度、特异性高,重复性好,可用于检测出多种甲型流感亚型,对甲型流感病毒不同亚型早期诊断具有一定的价值。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 H3 H5 H7 RNA酶p 多重荧光定量RT-pCR
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四重荧光定量RT-PCR检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒 被引量:6
8
作者 王国政 崔大伟 +8 位作者 谢国良 成军 孙长贵 李静云 金美彤 沈雄文 杨先知 楼剑洲 陈瑜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期801-805,共5页
目的建立检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法。方法以人细胞RNA酶P(RNase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针。通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该... 目的建立检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法。方法以人细胞RNA酶P(RNase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针。通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,并对1 896例临床标本进行回顾性检测。结果该方法检测甲型流感病毒(Flu A)、H7、N9与RNase P灵敏度均达102copies/m L,特异性达100%,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应,检测变异系数(CV)均低于1.55%。用该法检测1 896例临床标本,结果 Flu A 235例,H7N9 127例,与其他试剂报告结果完全一致。结论建立的四重荧光定量RT-PCR法可快速检测H7N9病毒,灵敏度与特异性好,可用于H7N9病毒感染患者的早期诊断。 展开更多
关键词 甲型禽流感 H7N9 检测 RNA酶p 四重荧光定量pCR
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抗caspase-3核酶M1 RNA的体外制备与活性鉴定
9
作者 肖娟 邹萍 +3 位作者 陆华中 刘芳 范华骅 高峰 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期390-392,共3页
目的 针对凋亡关键蛋白酶caspase 3设计核酶M1RNA GS ,对其体外制备及切割活性进行探讨。 方法 以RNaseP催化亚基M1RNA为模板 ,PCR合成并克隆特异性针对人caspase 3的一组核酶 pM 1 GS 716 ,pM1 GS 337和 pM1 GS 2 35 ,3 2 P标记转录... 目的 针对凋亡关键蛋白酶caspase 3设计核酶M1RNA GS ,对其体外制备及切割活性进行探讨。 方法 以RNaseP催化亚基M1RNA为模板 ,PCR合成并克隆特异性针对人caspase 3的一组核酶 pM 1 GS 716 ,pM1 GS 337和 pM1 GS 2 35 ,3 2 P标记转录。应用RT PCR方法从人外周血单个核细胞扩增底物caspase 3mRNA目的片段 ,体外转录物作为靶RNA ,核酶与靶RNA按 1∶1比例进行体外切割实验。结果 pM1 GS 716和 pM 1 GS 337在 37℃均有切割活性 ,pM 1 GS 716的切割效率为 93% ,pM1 GS 337为 4 2 % ,而 pM1 GS 2 35几无切割效应。 结论 体外制备的pM 1 GS 716具有良好的特异催化切割活性 ,有望通过切割caspase 3而抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 rnase p核酶类 CASpASE-3 细胞凋亡 体外切割活性
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抗Caspase-3核酶M1RNA的制备与体内外活性鉴定
10
作者 肖娟 邹萍 +4 位作者 范华骅 高峰 郑滨 高砾 陆华中 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期653-657,共5页
为评价抗caspase 3核酶在阻抑细胞凋亡发生中的潜在价值 ,以RNaseP催化亚基M1RNA为模板 ,设计合成 3个特异性针对人caspase 3的核酶pM1 GS716、pM1 GS337和pM1 GS2 35 ,并对它们的体内外切割活性进行探讨 .3 2 P标记的caspase 3基因片... 为评价抗caspase 3核酶在阻抑细胞凋亡发生中的潜在价值 ,以RNaseP催化亚基M1RNA为模板 ,设计合成 3个特异性针对人caspase 3的核酶pM1 GS716、pM1 GS337和pM1 GS2 35 ,并对它们的体内外切割活性进行探讨 .3 2 P标记的caspase 3基因片段体外转录物作为靶RNA ,体外切割实验表明 ,pM1 GS716和pM1 GS337均有切割活性 ,其中pM1 GS716的切割效率可达到 93% .3个核酶转染HeLa细胞 ,评价其在体内的切割活性 .在TNF α作用下 ,转染pM1 GS716的HeLa细胞内caspase 3mRNA下降了 75 % ,蛋白含量下降了 6 9% ,caspase 3蛋白酶活性下降了 5 2 % .Hoechst 332 5 8染色表明 ,细胞凋亡率较对照明显下降 (分别为 2 1 6± 0 7%和 4 9 4± 0 2 % ,P <0 0 1) .提示体外制备的pM1 GS716具有良好的特异催化切割活性 ,有望通过切割caspase 3而抑制细胞凋亡 . 展开更多
关键词 核酶 制备 活性鉴定 细胞凋亡
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抗CⅡTA核糖核酸酶P抑制Daudi细胞表面MHC-Ⅱ类抗原的表达
11
作者 何飞 吴书林 +1 位作者 孙明 郭荣 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期405-409,共5页
探讨抗MHC-Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA)的核糖核酸酶P对Daudi细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达的抑制作用.M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位.以pTK117质粒为模板,PCR扩增带有抗CⅡTA第452及629位点的引导序列的M1-RNA(M1-452-GS及M1-629-GS)... 探讨抗MHC-Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA)的核糖核酸酶P对Daudi细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达的抑制作用.M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位.以pTK117质粒为模板,PCR扩增带有抗CⅡTA第452及629位点的引导序列的M1-RNA(M1-452-GS及M1-629-GS),再分别插入pUC19载体(pUC19-M1-452-GS和pUC19-M1-629-GS).从Raji细胞中克隆CⅡTA基因DNA片段(114~800)后插入pGEM-7zf(+)质粒.将重组M1-RNA与靶基因的mRNA进行细胞外共孵育,显示仅pUC19-M1-629-GS可特异性地切割靶基因mRNA.再将M1-629-GS克隆入psNAV载体(pA629)并稳定转染Daudi细胞株,RT-PCR检测其CⅡTA的mRNA水平,流式细胞术检测其HLA-DR、DP、DQ抗原表达.与对照组比较,M1-629-GS阳性Daudi细胞的CⅡTAmRNA含量减少90.19%(P<0·05),其HLA-DR、DP、DQ抗原表达分别降低91.97%、90.19%、92.36%(P<0·05).研究表明,抗CⅡTA的核糖核酸酶P可通过抑制CⅡTA的转录而降低Daudi细胞表面的MHC-Ⅱ类分子的表达. 展开更多
关键词 MHC-Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA) 核糖核酸酶p(M1-RNA) 移植免疫
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抗CⅡTA的核糖核酸酶P对Jurkat细胞MHCⅡ类分子表达的抑制作用
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作者 何飞 吴书林 +1 位作者 孙明 郭荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期607-611,共5页
本研究旨在探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第3408位点的M1-RNA(M1-3408-GS)及其相应的CⅡTA靶基因片段(3176-3560),分别插入pUC1... 本研究旨在探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第3408位点的M1-RNA(M1-3408-GS)及其相应的CⅡTA靶基因片段(3176-3560),分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-3408-GS亚克隆入psNAV载体并稳定转染Jurkat细胞株,采用流式细胞术检测该细胞表面经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测其CⅡTA的mRNA水平。结果表明:在重组人干扰素(IFN)-γ诱导下,M1-3408-GS阳性Jurkat细胞株与对照组比较,其表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ抗原诱导型表达分别降低了83.17%、94.12%及84.31%;同时CⅡTA的mRNA含量明显降低(P<0.05,t=4.89)。结论:抗CⅡTA的M1-RNA(M1-3408-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。 展开更多
关键词 MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA) 核糖核酸酶p(M1-RNA) 移植免疫
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多重荧光定量RT-PCR检测高致病性H5N6禽流感病毒 被引量:4
13
作者 马光华 崔大伟 +5 位作者 谢国良 杨先知 高敏 车飞虎 孙海燕 陈瑜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第2期81-84,共4页
目的建立一种快速检测流感病毒A型(FluA)及高致病性禽流感(HPAI)H5N6病毒感染的荧光定量RT-PCR法。方法以人细胞核糖核酸酶P(RP)基因作为临床样本的内参基因,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针,建立一种检测FluA及HPAI-H... 目的建立一种快速检测流感病毒A型(FluA)及高致病性禽流感(HPAI)H5N6病毒感染的荧光定量RT-PCR法。方法以人细胞核糖核酸酶P(RP)基因作为临床样本的内参基因,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针,建立一种检测FluA及HPAI-H5N6病毒的一步法多重荧光定量RT-PCR方法,评估其灵敏度、特异性,并与上海之江公司提供的试剂及测序法进行比较。结果建立的多重荧光定量RT-PCR法检测FluA、H5、N6及RP质粒标准品的灵敏度均达102copies/m L。各对引物和相应探针仅检测出相应的病毒,在这些病毒和常见病原分析中未发现存在交叉反应,特异性达100%。用该法检测135例临床标本,结果显示FluA为23例,未发现HPAI-H5N6病毒的感染者;与上海之江公司提供的试剂的检测结果及基因测序结果一致。结论建立的一步法多重荧光定量RT-PCR法可用于FluA及HPAI-H5N6病毒感染患者的早期诊断。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 高致病性禽流感H5N6病毒 人细胞核糖核酸酶p基因 多重荧光定量RT-pCR
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原核生物pre-tRNA 5'末端剪切酶的结构和功能研究
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作者 邵齐源 李洋洋 +1 位作者 张威振 甘建华 《复旦学报(自然科学版)》 2025年第1期113-120,共8页
5'末端的剪切是pre-tRNA加工和成熟过程中非常重要的一个环节,由RNase P负责催化。不同于常规的RNase P,原核生物中存在一类protein-only RNase P(也称HARP),不需要依赖核酶就能对pre-tRNA的5'末端进行剪切。为了阐明HARP结合... 5'末端的剪切是pre-tRNA加工和成熟过程中非常重要的一个环节,由RNase P负责催化。不同于常规的RNase P,原核生物中存在一类protein-only RNase P(也称HARP),不需要依赖核酶就能对pre-tRNA的5'末端进行剪切。为了阐明HARP结合和剪切pre-tRNA的分子机制,我们表达和纯化了Thermocrinis ruber来源的HARP蛋白(TrHARP)。定点突变、分子筛和体外活性实验证实TrHARP具有pre-tRNA剪切活性,而且该活性受到蛋白聚合状态的影响。此外,我们还筛选获得了TrHARP蛋白质的晶体,采集了衍射数据并建立了初始的结构模型。尽管TrHARP与Aquifex aeolicus来源的HARP Aq_880的折叠方式类似,但TrHARP与Aq_880在结构中的聚合方式和相对方位存在显著的差异。分子筛以及负染电镜实验结果均显示pre-tRNA的引入会导致HARP结构的解聚,这为进一步阐明HARP结合和催化pre-tRNA的5'末端成熟的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 protein-only rnase p pre-tRNA HARp 晶体结构 功能 蛋白表达
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核酶对人巨细胞病毒mRNA片段的体外切割 被引量:7
15
作者 陈浩军 李弘剑 +4 位作者 周天鸿 周乐平 何华坤 魏威 程华胜 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第5期82-85,共4页
引导序列GSs(GuideSequences)是能与mRNA互补 ,引导核酶RNaseP催化核心M1RNA对互补区域特异切割的小片段游离RNA。针对人巨细胞病毒HCMV(humancytomegalovirus)DNA聚合酶mRNA序列设计GS ,共价结合到大肠杆菌来源M1RNA中 ,构建成M1GS T7... 引导序列GSs(GuideSequences)是能与mRNA互补 ,引导核酶RNaseP催化核心M1RNA对互补区域特异切割的小片段游离RNA。针对人巨细胞病毒HCMV(humancytomegalovirus)DNA聚合酶mRNA序列设计GS ,共价结合到大肠杆菌来源M1RNA中 ,构建成M1GS T7核酶。通过对巨细胞病毒DNA聚合酶亚克隆片段转录产物体外切割实验 。 展开更多
关键词 核酶 人巨细胞病毒 mRNA片段 体外切割 DNA聚合酶
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桥序列在构建人工核酶M1GS中的作用 被引量:4
16
作者 郑永霞 李弘剑 +4 位作者 李月琴 陈浩军 唐冬生 张欣 周天鸿 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期151-155,共5页
目的:为检验连接的GS序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法:通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS ,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活... 目的:为检验连接的GS序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法:通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS ,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活性。结果:有桥序列的M1GS具备体外特异切割底物的核酶活性,而无桥序列的M1GS核酶未表现体外切割活性。 展开更多
关键词 核酶 核酶p 人巨细胞病毒 UL54基因
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对HCMVUL54 mRNA片段特异性切割的M1GS构建 被引量:4
17
作者 吕静竹 李弘剑 +4 位作者 陈浩军 李月琴 周天鸿 唐冬生 张欣 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期83-86,共4页
人巨细胞病毒是一种DNA病毒,在人群中一般呈亚临床感染和潜伏感染。为研究病毒基因沉默工具和抗病毒制剂,以人巨细胞病毒UL54基因mRNA序列设计互补的外部引导序列,共价结合到大肠杆菌来源RNaseP催化核心M1RNA上,从而构建成M1GS-T6核酶... 人巨细胞病毒是一种DNA病毒,在人群中一般呈亚临床感染和潜伏感染。为研究病毒基因沉默工具和抗病毒制剂,以人巨细胞病毒UL54基因mRNA序列设计互补的外部引导序列,共价结合到大肠杆菌来源RNaseP催化核心M1RNA上,从而构建成M1GS-T6核酶。通过对DNA聚合酶UL54基因亚克隆片段转录产物体外切割研究,证实该核酶具备对UL54mRNA片段的特异切割能力。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 UL54基因 rnase p 外部引导序列
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Bridge Sequence对M1GS核酶体外切割活性的影响 被引量:5
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作者 张文军 李月琴 +3 位作者 李泓剑 贾雪芳 张欣 周天鸿 《广东药学院学报》 CAS 2006年第5期537-540,552,共5页
目的探讨B ridge Sequence(桥序列)对M1GS核酶体外切割活性的影响,从而为人工M1GS核酶的优化设计提供一定的理论依据。方法以含大肠杆菌核酶P催化单位(M1 RNA)基因的pFL117质粒作为模板,通过巧妙设计不同的下游引物,经PCR扩增、扩增产... 目的探讨B ridge Sequence(桥序列)对M1GS核酶体外切割活性的影响,从而为人工M1GS核酶的优化设计提供一定的理论依据。方法以含大肠杆菌核酶P催化单位(M1 RNA)基因的pFL117质粒作为模板,通过巧妙设计不同的下游引物,经PCR扩增、扩增产物克隆及克隆基因的体外转录,构建一组具有不同桥序列的人工M1GS核酶。进一步将所构建的上述人工M1GS核酶分别与同位素标记的底物RNA片段进行体外切割试验,并通过同位素扫描成像系统对各M1GS核酶的切割产物加以分析。结果成功构建了针对HCMV UL54mRNA T7靶位的、四种不同桥序列长度的M1GS核酶,其桥序列长度分别为0n、t6nt、20nt和88nt,并依次命名为M1GS-T7(0)、M1GS-T7(6)、M1GS-T7(20)和M1GS-T7(88)。经体外切割试验证实,M1GS-T7(88)的靶向切割活性最强,M1GS-T7(20)的切割活性相对较弱,而M1GS-T7(0)及M1GS-T7(6)则无明显的切割活性。结论人工M1GS核酶中桥序列的长度对于其体外切割活性具有重要影响,提示在人工M1GS核酶的优化设计时,桥序列的长度是不可忽视的因素之一。 展开更多
关键词 桥序列 M1GS 体外切割 核酶p
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新的系统发育标记及其应用 被引量:11
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作者 石楠 张利平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期112-115,共4页
系统发育标记是阐明个体间遗传关系的基因片段 ,为了区别遗传关系接近的分类单元 ,有许多新的系统发育标记被应用 ,配合其它分类手段的使用 ,为多相分类的研究注入了新的活力。
关键词 系统发育标记 rnase p RNA基因 GYRB GAp
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一种HCV靶向性M1GS核酶的构建及其体外活性 被引量:3
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作者 张文军 刘碧瑜 +3 位作者 周玉珍 林桂先 张欣 李红枝 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第1期84-88,共5页
目的构建对HCV基因组具有特异切割作用的新型靶向性核酶-M1GS。方法针对HCV基因组的保守区(5′UTR)设计并合成一段引导序列,通过PCR扩增直接将该引导序列连接于大肠杆菌核糖核酸酶P的催化亚基(M1 RNA)的3′末端,从而构建一类靶向性M... 目的构建对HCV基因组具有特异切割作用的新型靶向性核酶-M1GS。方法针对HCV基因组的保守区(5′UTR)设计并合成一段引导序列,通过PCR扩增直接将该引导序列连接于大肠杆菌核糖核酸酶P的催化亚基(M1 RNA)的3′末端,从而构建一类靶向性M1GS核酶。结果体外切割实验表明,所构建的核酶(M1GS-HCV/C67)对HCV5′UTR具有明显的切割作用,切割的位点在靶序列67~68 nt之间,属于特异性切割。结论构建了一种对HCV5′UTR具有靶向切割活性的M1GS核酶,为胞内反义效应及动物模型内抗病毒效应的评价提供了实验材料,为新型抗HCV药物的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 5′非编码区 核糖核酸酶p 靶向切割
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