NVP-AAM077和Ro25-6981对全脑缺血小鼠海马神经元损伤及BDNF表达的影响

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)亚基NR2A和NR2B特异性拮抗剂对脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元损伤的不同影响及其可能机制。方法制作三动脉阻断(3-VO)小鼠全脑缺血模型,小鼠随机分为假手术组、脑缺血/再灌注(I/R)对照组、NVP-AAM077(NVP)干预组和Ro25-6981(Ro)干预组;应用Fluoro-JadeB(F-JB)和Nissl染色检测海马神经元变性死亡和存活情况,Western blot对脑源性神经生长因子(BDNF)蛋白表达水平进行定量分析。结果①小鼠全脑缺血12min/再灌注3d后,海马CA1区出现选择性迟发性神经元死亡,NVP干预组增加了缺血所致的海马神经元死亡(P<0.05),而Ro干预组CA1区神经元存活数量明显多于缺血/再灌注组(P<0.01);②NVP干预能明显下调缺血/再灌注所致的海马组织BDNF蛋白表达升高(P<0.01),而Ro干预能明显上调BDNF蛋白的表达(P<0.05)。结论 NMDA受体亚基NR2A和NR2B在小鼠脑缺血/再灌注损伤中具有不同的作用,其机制可能与调节BDNF表达改变有关。

Ro25-6981对缺血再灌注大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响

目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2B特异性拮抗剂Ro25-6981对缺血再灌注大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响及可能的机制。方法:线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞2 h再灌注模型,随机分成假手术组、缺血再灌注对照组和Ro25-6981干预组。免疫组织化学显色观察脑室下区巢蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数,行免疫印迹对缺血侧脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平进行定量分析。结果:缺血再灌注后脑室下区巢蛋白和PCNA阳性细胞较假手术组增加,而Ro25-6981干预组巢蛋白和PCNA阳性细胞较缺血再灌注对照组减少。缺血再灌注损伤促进了缺血侧脑组织BDNF蛋白的表达,Ro25-6981干预下调了缺血侧脑组织BDNF蛋白的表达。结论:NMDA受体亚单位NR2B能促进脑室下区神经干细胞的增殖,可能与调节BDNF表达有关。

鞘内注射Ro25-6981对大鼠慢性吗啡耐受的抑制作用研究

目的研究鞘内注射Ro25-6981对大鼠吗啡耐受的抑制作用及其可能机理。方法 SD大鼠40只,随机分成四组,每组10只。空白对照组(C1组):蛛网膜下腔注射0.9%生理盐水25μl;溶剂组(C2组):蛛网膜下腔注射5%二甲基亚矾(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)溶剂25μl;鞘内注射组Ⅰ(R1组):蛛网膜下腔注射Ro25-6981注射液25μl(50μg);鞘内注射组Ⅱ(R2组):蛛网膜下腔注射Ro25-6981注射液25μl(100μg)。四组大鼠完成鞘内注射后,参照文献[3]方法分别建立慢性吗啡耐受模型。注射后第1天、第3天、第5天和第7天采用热水甩尾法(hot-water tail-flick)测定甩尾潜伏期(Tail Flick Latency,TFL)的变化来评价吗啡的镇痛效果,同时采用斜板实验方法进行运动功能检测。结果同C1组比较:R1组第3天和第5天MPE%差异有统计学意义(p<0.05),R2组各时间点MPE%的差异有统计学差异(p<0.05),C1和C2组差异无统计学意义。与第1天比较:R1组第5天和第7天MPE%逐渐降低(p<0.05),第3天变化不明显;R2组第7天MPE%明显降低(p<0.05),第3天和第5天变化不明显(p>0.05)。不同时间点各组大鼠斜板角度的变化差异无统计学意义(p>0.05)。结论 Ro25-6981鞘内注射能够在一定程度上抑制大鼠慢性吗啡耐受的形成且不影响运动功能,表明NR2B在吗啡耐受形成中起了关键的作用。

Ro25-6981对脑缺血再灌注模型大鼠海马齿状回颗粒下层nestin和BrdU表达的影响

目的:研究Ro25-6981对成年大鼠短暂性脑缺血再灌注海马齿状回颗粒下层(subgranular zone,SGZ)神经干细胞增殖的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠在进行侧脑室置管7 d后,随机分为正常组、假手术组和脑缺血再灌注组,每组又分别再分为Ro25-6981组和生理盐水组。缺血再灌注组大鼠采用四动脉阻断前脑缺血再灌注模型,即缺血15 min再灌注1、3、7、14、21、28 d和35 d,缺血前15 min经侧脑室套管注射Ro25-6981或生理盐水。各组大鼠均采用免疫组织化学显示SGZ区Brd U、nestin阳性细胞的表达情况,采用免疫荧光双重标记法检测再灌7 d时SGZ区Brd U/nestin双标阳性细胞数量的改变。结果:脑缺血再灌注生理盐水组SGZ区nestin阳性细胞表达再灌1 d时开始增多,7 d时达到峰值,14 d时急剧下降,至35 d时降至正常水平;缺血前给予Ro25-6981,各时间点的nestin阳性细胞表达均有所下降,其中在3、7 d和14 d时减少明显,差异有统计学意义(P<0.05)。脑缺血再灌注生理盐水组SGZ区Brd U阳性细胞再灌1 d开始增殖,7 d达到峰值,35 d降至正常水平;缺血前给予Ro25-6981,各时间点的Brd U阳性细胞表达均有所下降,其中在3、7、14 d和21 d时减少明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与脑缺血再灌注生理盐水组相比,Ro25-6981可以降低脑缺血再灌7 d海马SGZ区的Brd U/nestin双标阳性细胞密度,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ro25-6981可以抑制前脑缺血再灌注后海马SGZ区神经干细胞的增殖,提示NR2B参与并促进了前脑缺血再灌注引起的神经干细胞的增殖。

侧脑室注射NR2B拮抗剂Ro25-6981对大鼠脑局灶性缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨侧脑室注射N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NR2B)拮抗剂Ro25-6981对大鼠脑局灶性缺血-再灌注(I-R)损伤的影响。方法60只雄性SD大鼠随机均分为四组:假手术组(S组),I-R组,I-R+Ro25-6981组(I-R+Ro组)和I-R+生理盐水组(I-R+NS组)。S组大鼠线栓置入颈内动脉的深度为10mm;I-R组大鼠采用线栓法阻闭大脑中动脉,2h后拔出线栓到颈外动脉给予再灌注;I-R+Ro组和I-R+NS组于缺血后2h脑室内分别注射Ro25-6981 0.1mol/L和生理盐水各5μl。于再灌注24h后行神经功能缺损评分;麻醉大鼠取脑组织,切片后用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色,Image Pro Plus 6.0图像处理软件计算大鼠脑梗死容积。结果与S组相比,I-R组大鼠神经功能缺陷评分增加,脑梗死容积增大(P<0.05或P<0.01);与I-R组相比,I-R+Ro组大鼠神经功能缺损评分降低,脑梗死容积减小(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠缺血2h后脑室内注射NR2B拮抗剂Ro25-6981可以降低神经功能缺损评分、缩小脑梗死容积,对大鼠局灶性脑I-R损伤有一定保护作用。

Ro25-6981对脑缺血-再灌注后神经发生的影响

目的探讨NR2B特异性拮抗剂Ro25-6981对大鼠脑缺血-再灌注(I-R)后海马齿状回颗粒下层(SGZ)神经发生的作用。方法 64只SD大鼠随机均分为对照组(A组)、假手术组(B组)、脑I-R组(C组)和Ro25-6981 0.6、1.2、2.4、4.8和9.6μg/kg组(分别为D1、D2、D3、D4和D5组)。术后7d取脑,各组大鼠处死前2h侧脑室注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),免疫组织化学染色观察SGZ中BrdU阳性细胞变化。结果与A、B组相比,C组SGZ的BrdU阳性细胞数明显增加(P<0.01);而D1、D2、D3、D4和D5组BrdU阳性细胞数均较C组减少(P<0.05或P<0.01)。结论Ro25-6981能抑制大鼠脑I-R后海马齿状回SGZ神经发生。

N-甲基-D-天冬氨酸受体及其亚型受体拮抗剂对抑郁大鼠的影响

目的离子型受体类药物能快速有效缓解抑郁症状,但其作用机制尚不明确。文中探讨N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体及其亚型受体拮抗剂对强迫游泳大鼠不动时间及海马脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophic factor,BDNF)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠40只,采用随机数字表法,分为4组,每组10只。药物干预前1 d大鼠强迫游泳15 min,药物干预当天,分别腹腔注射1 ml容积等渗盐水(S组)、NVP-AAM077(NR2A受体拮抗剂)5mg/kg(NVP组)、氯胺酮(NMDA受体拮抗剂)10 mg/kg(Ket组)、Ro25-6981(NR2B受体拮抗剂)10 mg/kg(Ro组)。30 min后,记录强迫游泳大鼠不动时间,取大鼠海马组织检测BDNF。结果与S组相比,NVP组大鼠强迫游泳不动时间及海马BDNF的表达均无显著变化,而Ket组及Ro组大鼠强迫游泳时间均显著减少且海马BDNF的表达均显著增加(P<0.05)。结论氯胺酮及Ro25-6981均具有抗抑郁作用,其作用机制可能与海马BDNF的上调有关。

脊髓后角胶质细胞活化在大鼠骨癌痛发生中的作用

目的:观察N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚型(NR2B)选择性拮抗剂Ro25-6981对胫骨癌痛大鼠脊髓后角星型胶质细胞的影响,探讨骨癌痛的发生机制。方法:采用Walker256乳腺癌细胞建立雌性SD大鼠胫骨癌痛模型。将大鼠随机分为3组(每组8只):假手术组(Sham组)、模型组(M组)和Ro25-6981组(R组)。假手术组只行鞘内置管,模型组鞘内注射(IT)生理盐水20μl,Ro25_6981组于建立大鼠骨癌痛模型前30 min及术后第7天IT Ro25-6981 20μl(0.5 mg/ml)。Sham组于假手术后3 d及R组和M组均于术后14 d分别取8只大鼠,测定机械痛阈阈值后断头处死,取患侧L4-6脊髓背角组织,采用免疫组化方法观察GFAP、OX-42及NR2B的表达变化判断Ro25-6981对脊髓背角星形胶质细胞及小胶质细胞活化的影响。结果:各组术前基础机械痛阈比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Sham组比较,M组术后14 d时机械痛阈降低(P<0.01),Ro25-6981组术后14 d时机械痛阈降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,Ro25-6981组术后14 d时机械痛阈升高(P<0.05)。与Sham组相比,Ro25-6981组和M组术后14 d时脊髓背角GFAP、OX-42和NR2B蛋白表达均升高(P<0.05);与M组比较,R组术后14 d时脊髓背角GFAP、OX-42和NR2B蛋白表达降低(P<0.05)。结论:鞘内注射Ro25-6981可抑制脊髓背角星形胶质细胞和/或小胶质细胞激活,有效地预防大鼠胫骨癌痛的发生及发展。

NR2B受体拮抗剂抑制成年大鼠齿状回新生神经元诱导的长时程增强

背景：新生神经元可诱导产生长时程增强，NMDA受体亚基NR2B的激活在成熟神经元诱导的长时程增强中有重要作用，但其对由新生神经元诱导的长时程增强的影响尚未见报道。目的：观察NR2B受体拮抗剂R025-6981在大鼠齿状回新生神经元诱导的长时程增强中的作用。设计、时间及地点：脑片电生理实验，于2007—02／06在山西医科大学神经生物实验室完成。材料：3月龄雄性Wistar大鼠26只，由山西医科大学实验动物中心提供。方法：大鼠麻醉后断头取脑，分离海马，制备400μmol／L脑片。采用细胞外微电极记录技术，于海马齿状回分子层内侧1，3处采用双极钨电极进行低频刺激，获得稳定的刺激曲线后，在高频强直刺激下诱导长时程增强。长时程增强的诱导程序为每串刺激频率100Hz，持续500ms，间隔20s，共4串刺激，记录到兴奋性突触后电位〉1mV以上的脑片用于下述两项实验。①NR2B拮抗剂Ro25—6981阻断人工脑脊液诱导的长时程增强：脑片分为2组，人工脑脊液组持续通以含有95％O2和5％CO2的人工脑脊液，人工脑脊液＋Ro25．6981组在强直刺激前应用3μmol／LNR2B拮抗剂Ro25-6981作用10min，后续步骤同上组。②NR2B拮抗剂Ro25—6981抑制荷包牡丹碱诱导的长时程增强：脑片分为2组，荷包牡丹碱组在强直刺激前给予10μmol／L荷包牡丹碱灌流10min，荷包牡丹碱＋Ro25—6981组在强直刺激前同时给予3μmol／L Ro25．6981和10μmol／L荷包牡丹碱灌流10min。主要观察指标：长时程增强记录结果。结果：①强直刺激后50-60min，人工脑脊液组长时程增强（107．85±1．34）％，人工脑脊液＋Ro25-6981组长时程增强（100．75±2．75）％，两组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。②强直刺激后50-60min，荷包牡丹碱组长时程增强（164．67±2．40）％，荷包牡丹碱＋Ro25-6981组长时程增强（147．56±6．63）％，两组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：在大鼠海马齿状回区域，NR2B受体拮抗剂Ro25-6981阻断了人工脑脊液诱导的长时程增强，并部分抑制了荷包牡丹碱诱导的长时程增强，提示NR2B受体拮抗剂可以抑制新生神经元诱导的长时程增强。

骨癌痛诱发大鼠焦虑样行为和前扣带回脑区NR2B的上调表达

目的研究骨癌痛（bone cancer pain,BCP）对大鼠情绪的影响和前扣带回皮质（anterior cingulate cortex,ACC）处N-甲基-D-天门冬氨酸（N-Methyl-D-Aspartate,NMDA）受体NR2B亚基表达量的关系。方法选择健康3月龄雄性Wistar大鼠150只,体重200~250g,随机分为假手术组（S组）、BCP模型组（BCP组）和模型腹腔注射NR2B拮抗剂RO25-6981组（RO组）,每组50只。BCP模型采用右侧胫骨注射Walker 256乳腺癌细胞的方法制备,S组注射等量d-hanks液。RO组于造模后经腹腔注射RO25-6981（5mg·kg-1·d-1）,S组和BCP组注射等量生理盐水。三组大鼠分别于造模前1d和造模后3、7、10和14d测右侧后足底机械缩足阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。每次痛阈检测后,通过高架十字迷宫观测BCP对大鼠情绪的影响,计算开放臂进入次数（OE）百分比、开放臂停留时间（OT）百分比,造模后第14天待高架十字迷宫实验完成后,取大鼠ACC组织采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测NR2B的mRNA和蛋白表达水平。结果 S组和RO组各指标差异均无统计学意义。术后7、10、14dBCP组MWT明显低于、TWL明显短于术前1d及S组和RO组（P〈0.05）;BCP组OE和OT明显低于术前1d及S组和RO组（P〈0.05）,ACC脑区NR2BmRNA相对吸光度、NR2B蛋白表达、NR2B荧光密度明显高于S组和RO组（P〈0.05）。结论BCP可致大鼠痛厌恶焦虑样行为,其机制可能与ACC脑区的NR2B表达上调有关。