木霉菌对山豆根根腐病菌的拮抗作用

目的：研究木霉菌对山豆根根腐病菌茄腐镰孢S9（Fusarium solani）的拮抗作用,探讨生物防治菌在防治中药材土传病害上的应用前景。方法：采用生长速度法、对峙培养法研究哈茨木霉H2（Trichoderma harsianum）、绿色木霉M6（Trichoderma viride）和康宁木霉K1（Trichoderma koningii）对山豆根根腐病菌S9的拮抗作用,并讨论了其作用机理。结果：发现H2、M6竞争优势显著,生长速度分别是S9的1.43~2.72倍和1.43~1.95倍;K1的空间竞争优势较弱,生长速度不如S9。3种木霉菌对S9均有不同程度的拮抗作用,其中,M6和H2对S9的拮抗作用较强,即使在提前3 d接入病原菌的情况下,M6和H2对S9的抑制率仍能分别达100%和82.35%,拮抗系数均达Ⅰ级;K1对S9的抑制率为46.36%,拮抗系数为Ⅳ级。在显微镜下观察到木霉菌通过缠绕、寄生等方式使S9发生菌丝断裂、缢缩、消解等现象。结论：哈茨木霉和绿色木霉作为生防菌在防治中药材土传病害上具有深入开发的前景。

广豆根根腐病病原鉴定

目的:鉴定引起广豆根根腐病的病原菌,为广豆根根腐病病害的防治提供理论依据。方法:通过组织分离法分离得到病原菌,对其形态特征的观察及该菌rDNA-ITS序列的测定,并与Gen Bank中的序列进行比对。结果:该菌在PDA培养基上菌落圆形,气生菌丝薄绒状,白色,浅灰色,间有土黄色分生孢子座,基物表层肉色。小型分生孢子数量多,卵形、肾形,8～16μm×2.5～4μm;大型分子孢子马特型,多数3～5个隔膜。该菌rDNA-ITS序列长度为553 bp,它与Fusarium solani(登录号为:AB518683.1、AB470903.1、AB369488.1、AJ608989.1、GQ365154.1、EF152426.1)和Fusarium oxysporum(登录号为:GQ922558.1、GQ922559.1、DQ452447.1)的序列同源性均达99%。结论:结合以上两种鉴定方法,得出引起广豆根根腐病的病原菌为半知菌类镰孢霉属真菌茄腐镰孢菌Fusarium solani。

贵州山豆根根腐病病原菌鉴定

【目的】明确贵州山豆根根腐病的病原菌种类,为山豆根根腐病的防治及抗病育种提供理论基础。【方法】采用保湿培养法和组织分离法对感染根腐病的山豆根植株组织进行病原菌分离和纯化,根据柯赫氏法则对代表性菌株进行致病力测定;结合形态学和分子生物学方法对病原菌进行鉴定。【结果】从收集的病株组织样本中共分离获得200株真菌菌株,选取在PDA培养基上菌落形态差异明显的67株菌株进行ITS测序并在NCBI数据库进行BLASTn比对分析,结果显示,67株菌株中包含尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)35株、茄腐镰刀菌(F.solani)7株、粉红粘帚霉(Clonostachys rosea)23株和帚状弯孢聚壳(Eutypella scoparia)2株。致病性测定结果表明,尖孢镰刀菌代表性菌株和茄腐镰刀菌代表性菌株均可侵染山豆根引起典型的根腐病症状,且茄腐镰刀菌致病性明显强于尖孢镰刀菌。结合形态学特征和分子生物学鉴定结果,确认分离得到的病原菌分别为尖孢镰刀菌和茄腐镰刀菌。【结论】贵州山豆根根腐病主要由尖孢镰刀菌和茄腐镰刀菌复合侵染引起。

山豆根及其混伪品的DNA分子标记鉴定方法

目的:开发一种能够准确鉴别山豆根药材的DNA分子标记方法,以保障山豆根临床用药的安全性和有效性。方法:在核糖体内转录间隔区挖掘山豆根及其混伪品的DNA多态性序列,分别设计山豆根及其混伪品的物种特异性引物,建立可用于区分山豆根及其5种混伪品的多重PCR体系。结果:该多重PCR体系不仅可以在一次反应中准确地实现山豆根及其5种混伪品的分子区别和鉴定,而且还可以检测山豆根中1%的掺伪品,DNA检测限低至0.1 ng。结论:与传统的性状鉴别、显微鉴别及理化鉴别方法相比,该研究所建立的山豆根DNA分子标记鉴定方法稳定性好、准确度高、特异性强,可以有效地解决市场上山豆根药材的植物来源复杂、混伪品难以鉴别的问题。