甘蓝型油菜与蔊菜的原生质体融合与植株再生

以甘蓝型油菜下胚轴和蔊菜叶片为外植体提取原生质体,采用PEG-高pH、高Ca2+附加DMSO的原生质体融合方法,用液体浅层静置培养融合体,获得了10株融合杂种,观察了杂种形态学和细胞学。结果表明:1%纤维素酶+0.2%离析酶+3mmol/L MES酶解14h可获得较高产率的油菜原生质体,0.25%纤维素酶+0.5%离析酶+5mmol/L MES酶解12h可获得较高产率的菜原生质体;30%PEG+0.3mol/L葡萄糖+50mmol/LCaCl2·2H2O+15%DMSO的融合条件下,获得了10.4%的融合率;实验所获的原生质体融合材料可作为新种质。

蔊菜幼苗抗菌核病及抗旱和耐湿特性的鉴定

以3个甘蓝型油菜(Brassica napus L.)品种‘中油821’(‘Zhongyou No.821’)、‘中双9号’(‘ZhongshuangNo.9’)及‘中油杂2号’(‘Zhongyouza No.2’)为对照,采用离体叶片菌丝块接种法、人工模拟干旱和湿害胁迫处理法对蔊菜〔Rorippa indica(L.)Hiern〕的抗菌核病〔Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary〕、抗旱和耐湿特性进行了鉴定。结果表明:菌核病菌接种后,蔊菜幼苗叶片的病斑直径为1.75 cm,极显著小于3个甘蓝型油菜品种的病斑直径(3.25～3.60 cm)。经干旱胁迫后,3个油菜品种的幼苗严重萎蔫,茎粗、根长以及地上部分、根和全株的鲜质量和干质量均极显著低于对照;蔊菜幼苗轻度萎蔫,仅茎粗和根鲜质量分别极显著和显著低于对照,其他生长指标与对照差异不显著;蔊菜幼苗各生长指标的伤害指数均显著或极显著低于3个油菜品种。经湿害胁迫后,蔊菜和3个油菜品种幼苗的总叶片数和绿叶数较对照明显减少、黄叶数增加,但蔊菜幼苗的黄叶数显著少于3个油菜品种;3个油菜品种幼苗的茎粗、根长以及地上部分、根和全株的鲜质量和干质量总体上显著或极显著低于对照,而蔊菜幼苗仅茎粗、根长和根干质量显著低于对照,其他生长指标与对照差异不显著;蔊菜幼苗的茎粗,根长,地上部分、根和全株的鲜质量以及根和全株的干质量的伤害指数均显著或极显著低于3个油菜品种。研究结果显示:蔊菜对菌核病的抗性及抗旱和耐湿性均强于供试的3个甘蓝型油菜品种,是十字花科(Brassiaceae)中对菌核病抗性强、抗旱耐湿的优质基因源。

蔊菜病毒诱导基因沉默体系构建

构建蔊菜的病毒诱导基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系,旨在建立蔊菜的快速基因功能验证的方法。通过RT-PCR扩增出棉花、大豆、拟南芥的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(Cloroplasto alterados,CLA)基因片段,并将其分别构建到烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的VIGS载体,通过农杆菌GV3101侵染蔊菜并观察蔊菜的表型变化。结果显示,3种不同的CLA基因所侵染的蔊菜均出现不同程度的白化现象,半定量RT-PCR检测显示CLA的mRNA被显著降解,表明成功构建了蔊菜的VIGS体系。

塘葛菜的显微鉴定

目的对塘葛菜进行显微鉴别研究。方法采用石蜡切片法对塘葛菜根、茎、叶进行切片,使用显微技术观察组织构造及显微特征。结果根横切面射线和形成层明显;茎横切面有14~16个维管束间断排列成环,外侧具中柱鞘纤维束;叶脉横切面主脉维管束外韧型,上表皮下方具1列色素细胞,栅栏组织与海绵组织分化不明显;全草粉末中可见花粉粒、花冠表皮、花萼表皮、腺毛、种皮、非腺毛、导管、纤维和淀粉粒。结论该鉴定方法可靠,可作为塘葛菜的鉴定依据。