Direct Adventitious Bud Induction and Plant Regeneration of Rosa hybrida Samantha

Effect of explant, site of leaflet, induction period in the dark and combinations of plant growth regulators on direct adventitious bud induction and plant regeneration of Rosa hybrida Samantha was investigated. The results showed that after an induction period of 8 d on MS medium with 1.5 mg L-1 TDZ and 0.05 mg L-1 NAA in the dark and a subculture on MS medium with 0.5 mg L-1 BA and 0.01 mg L-1 NAA under light, the best plant regeneration was obtained and the regeneration frequencies of leaflets and petioles were 51.8 and 10% respectively. There was no significant difference in regeneration ability between leaflets at different sites of the compound leaves, longer time of induction in the dark or high concentration of auxin would cause callus formation, which was disadvantageous for shoot regeneration, and the regeneration frequency was significantly reduced. This regeneration system could be applied for genetic transformation of this cultivar in the future.

水杨酸对月季切花的保鲜效果和生理作用

探讨了水杨酸对月季切花的保鲜效果。结果表明 ,水杨酸能降低花瓣丙二醛含量 ;减少游离脯氨酸的积累 ,缓解切花在瓶插期间的水分胁迫 ,延缓衰老。水杨酸对花枝切口的细菌抑制作用不明显。水杨酸与杀菌剂 8-羟基喹啉柠檬酸和蔗糖复配的保鲜剂 ,杀菌效果好 ,能明显延缓衰老 ,延长切花寿命。

两个切花月季品种花朵开放和衰老对乙烯的反应及其与内肽酶的关联

以切花月季(Rosa hybrida)品种 Samantha 和 Kardinal 为试材,探讨了乙烯和乙烯作用抑制剂 1-MCP处理对不同品种花朵开放和衰老以及内肽酶活性和种类的影响。结果显示,两供试品种都对外源乙烯敏感,但花朵在乙烯处理后形态上呈现不同的变化趋势。Samantha 表现为乙烯处理显著促进花朵开放和衰老进程,导致花瓣脱落;而 Kardinal 则明显抑制花朵开放进程,出现僵花,直接衰老萎蔫。两品种在乙烯引起花瓣总可溶性蛋白含量下降和内肽酶活性的升高方面,以及 1-MCP 处理获得与乙烯处理相反的效果等方面呈现相同的变化趋势,但是Kardinal 的变化远比 Samantha 剧烈。同时,乙烯处理引起花瓣丝氨酸蛋白酶所占比例的增加方面依然是 Kardinal比 Samantha 显著。上述结果表明,本试验供试的两个切花月季品种开花和衰老对外源乙烯反应的不同可能与相应花瓣中内肽酶的变化程度有关。

切花月季Samantha失水胁迫耐性与其超氧化物歧化酶之间的关联

以探讨月季切花失水胁迫耐性与其超氧化物歧化酶(SOD)之间的关联为目的,选用耐失水胁迫品种Samantha,用DDTC(SOD专一性抑制剂)进行12h预处理,之后在20℃、RH35%～40%、80μEm-2·s-1光照(12h/d)条件下进行12～48h的失水胁迫处理,然后进行瓶插观察。结果表明,20mmol·L-1DDTC预处理在显著抑制花瓣SOD活性的同时,明显减弱切花失水胁迫耐性,表现在切花弯颈率明显提高,复水率和水势值明显降低,瓶插寿命显著缩短。在花朵自然开放初期,花瓣MnSOD、FeSOD和Cu/ZnSOD这3种类型都存在。其中,MnSOD有1种,FeSOD有3种,Cu/ZnSOD有2种;迁移率大小依次为Cu/ZnSOD>FeSOD>MnSOD;谱带强弱依次为FeSOD>Cu/ZnSOD>MnSOD。经失水胁迫处理花瓣中诱导产生了3条新的FeSOD(FeSOD4、FeSOD5和FeSOD6)条带,与此同时MnSOD条带消失。DDTC预处理抑制了任何与上述失水胁迫诱导有关的新的条带产生。由此推测,切花月季Samantha失水胁迫耐性与其SOD活性相关,与FeSOD4～6的诱导产生相关联。

一氧化氮对切花月季瓶插过程中乙烯合成代谢的影响

为了分析外源NO处理对切花月季瓶插过程中乙烯生物合成代谢的影响。以月季切花为试材,用NO供体硝普钠(SNP)和NO清除剂PTIO(2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide)瓶插处理切花月季,研究外源NO供体SNP对月季切花的保鲜作用。结果表明,0.1 mmol/L SNP释放的NO可降低月季切花的萎蔫率,延长瓶插寿命,增加花枝鲜重,抑制花瓣中花色素苷含量和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的升高,抑制月季呼吸速率和乙烯释放量并延缓二者跃变高峰的出现,抑制脂氧合酶(LOX)、ACC合成酶(ACS)、ACC氧化酶(ACO)活性的上升及ACC含量累积,用PTIO处理则获得了理想的反证结果。以上结果表明,NO对切花月季衰老的调节与月季花瓣中乙烯生物合成相关。

一氧化氮对瓶插月季呼吸作用及相关酶活性的影响

以硝普钠(SNP)为一氧化氮供体,研究了NO及其清除剂PTIO(2-phenyl-4,4,5,5-tetra-methylimidazoline-1-oxyl-3-oxide)处理对切花月季瓶插过程中生理变化及呼吸作用相关酶活性变化的影响。结果表明:0.1mmol.L-1SNP释放的NO可以降低月季切花的萎蔫率,延长瓶插寿命,增加花枝鲜样质量,抑制COX(细胞色素氧化酶)、AO(抗坏血酸氧化酶)、PPO(多酚氧化酶)活性,抑制月季呼吸强度和乙烯释放,延缓二者跃变高峰的出现,延缓MDA含量和膜相对透性的升高,PTIO的处理提高了上述SNP处理下COX、AO、PPO的活性,提高了呼吸速率,促进MDA含量和膜相对透性的上升,但抑制了乙烯的释放,初步说明NO可能参与衰老过程中呼吸作用的末端氧化酶的活性调节。

微型月季组培快繁关键技术研究

以微型月季带腋芽的幼嫩茎段为试材,对微型月季组培快繁中外植体消毒、愈伤组织诱导、丛芽增殖培养以及植株生根等关键技术进行研究。结果表明,用75%酒精消毒2 min后,再用HgCl_2消毒10~15 min时,外植体存活率最高;培养基MS+2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的愈伤组织诱导率可达95%;愈伤组织增殖最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L NAA;丛芽分化增殖最适培养基为MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L KT+0.2 mg/L NAA;生根最适培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA。

月季MYB基因cDNA全长克隆和表达分析

【目的】克隆月季花色代谢相关新基因的全长cDNA序列,并分析其表达功能。【方法】根据月季花色突变体SSH文库分析得到的差异表达EST序列设计引物,采用RACE技术进行全长cDNA克隆。【结果】克隆到1 125 bp的cDNA全长,GenBank登录号为Eu082130。这一cDNA序列编码1个包含294个氨基酸的前体蛋白,它与小金海棠MxMYB1和大豆的GmMYB176蛋白的保守区同源性分别为70%和58%,都是只有1个MYB结构;而与具有两个MYB结构域的棉花GhMYB26、拟蓝芥AtMYB305和金鱼草AmMYB340同源性很低。该蛋白的分子量为32.33 kD,等电点为9.65,分子式为C1387H2201N435O440S10。半定量PCR分析证实了该RhMYB1基因与CHS基因在红花突变体中比在黄花亲本中表达量高。【结论】推测该基因是一个转录因子,参与调控花青苷的合成。

月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的克隆及表达分析

【目的】克隆月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的全长cDNA序列,分析其序列及表达特征,并对该基因编码的蛋白进行原核表达分析,为深入探讨丁香酚合成酶的生化特性奠定基础。【方法】根据已发表的其它植物EGS基因序列的保守结构域设计简并引物,结合RACE技术,获得RhEGS1的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析;利用半定量RT-PCR对不同组织及不同花发育时期RhEGS1进行表达分析。采用Gateway克隆技术,构建原核表达载体,并进行原核蛋白表达。【结果】月季RhEGS1的cDNA全长为1 207 bp,包含一个927 bp的ORF,编码309个氨基酸。同源序列比对发现RhEGS1与仙女扇的CbEGS2有83.87%的同源性,与矮牵牛PhEGS1具有81.55%同源性。表达谱分析表明,RhEGS1主要在雄蕊中表达,且在花盛开期表达最强,而在花蕾期及凋谢期表达较弱。原核表达分析发现,在37℃、0.5 mmol.L-1IPTG诱导4 h后,携带RhEGS1 ORF的原核表达载体在大肠杆菌中生成了大量的分子量约为35 kD的蛋白质,其分子量大小与预测的理论值相一致。【结论】从月季雄蕊中克隆到丁香酚合成酶基因RhEGS1,具有EGS基因的结构特征和完整的编码框,且在盛开期雄蕊中表达量最高。

杂交茶香月季演化与遗传背景分析

通过文献收集、整理,融合最新研究成果,以时间为轴,大量分析包括图象资料在内的中外文献材料,明确了杂交茶香月季演化历程,解析其遗传背景,为杂交茶香月季育种提供参考。绘制了更为详细的杂交茶香月季历史演化图,通过对比发现切花月季最主要花型"中高型或高芯型"品种特性可能源自于中国古老月季资源月月粉,总结出杂交茶香月季的遗传背景。杂交茶香月季遗传背景较为复杂,主要来源于中国的Rosa chinensis(月月红、月月粉)、R.ordorata(淡黄香水月季、彩晕香水月季)、巨花蔷薇(R.gigantea)以及欧洲的法国蔷薇、大马士革蔷薇、麝香革蔷薇、异味蔷薇等9个原种及其变种,甚至包括一些人为的外源基因。

月季萨蔓莎不定芽的直接诱导和植株再生的研究

以月季品种萨蔓莎为试材研究不同外植体、叶片位置、暗培养时间和激素组合对月季不定芽诱导和植株再生的影响。结果表明,月季萨蔓莎在含1.5 mg·L-1TDZ 和0.05 mg·L-1NAA 的MS 培养基上黑暗培养8 d 后转入含0.5 mg·L-1 BA 和0.01 mg·L-1NAA 的MS 培养基光下培养,再生效果最好,小叶外植体和复叶柄的再生率分别为51.8%和10%。小叶的叶位对植株再生无显著影响,暗培养时间过长,外植体易形成愈伤组织而不利于不定芽的分化,植物生长调节剂中生长素浓度升高易导致愈伤组织形成而影响植株再生。本研究所建立的不定芽直接再生系统可用于该品种的转基因遗传改良研究。

3种保鲜剂对月季萨蔓莎的保鲜生理效应

以月季萨蔓莎(Rosehybridacv.Samantha)为材料,用3种保鲜剂,即:蔗糖、8-羟基喹啉、柠檬酸质量分数分别为2.0%、6×10-4、1×10-4的水溶液,Ca(NO3)2、8-羟基喹啉、柠檬酸质量分数分别为0.05%、2×10-4、1×10-4的水溶液及KNO3、8-羟基喹啉、柠檬酸质量分数分别为0.05%、4×10-4、1.2×10-4的水溶液分别对萨蔓莎切花花枝进行保鲜处理,旨在研究不同保鲜剂对月季萨蔓莎的作用效果及生理效应。结果表明:3种保鲜剂均可提高月季切花花枝的含水量,增加花枝鲜重,使体内细胞相对膜透性减小,可溶性蛋白含量增加,丙二醛含量减少,超氧阴离子自由基生成速率变小、含量降低,保护酶活性增强,从而延缓了切花的衰老,延长了月季切花的寿命,提高了切花的观赏品质;其中,以含蔗糖的保鲜效果最好。

三类切花月季品种花器乙烯生成量和ACC含量的时空变化

以切花月季品种‘天使’、‘唐娜小姐’和‘红成功’为试材,测定了花朵开放过程中整朵花以及花瓣、雄蕊、花柱、花托和子房、花萼5部分的乙烯生成量和ACC含量。结果表明,花朵的乙烯生成量变化类型主要取决于花瓣,品种间乙烯变化类型的区别也取决于花瓣。3个品种花朵不同部位乙烯生成量的变化趋势相近,都在花朵开放前期出现明显的峰值。花蕾发育早期,3个品种花瓣ACC含量占整朵花ACC总量的比例远低于乙烯生成量所占比例,而花器其它部位则相反,尤其是雄蕊的ACC含量极高而乙烯生成量却相对很低;在花朵开放后期,3个品种表现不同。推测,在花朵开放进程中花器其它部位可能向花瓣运输ACC,不同乙烯变化类型的品种可能在花器不同部位间ACC的运输分配上存在差异。

表油菜素内酯对月季切花衰老的影响

0.5mg·L^(-1)表油菜素内酯明显缓解水分对月季切花的胁迫,促进切花体内水分平衡的改善和还原糖含量的增加,抑制花瓣溶质外渗,从而延缓切花衰老。

表油菜素内酯对月季切花中几种与膜脂过氧化相关生理指标的影响

2%蔗糖+200mg·L-1硼酸+0.5mg·L-1表油菜素内酯(epiBR)可减缓月季切花体内的超氧物歧化酶(SOD)活性和抗坏血酸含量的下降,削弱丙二醛(MDA)含量和细胞膜相对透性的上升幅度,从而延长切花的瓶插寿命。

月季RhPR10.2基因克隆及生物学功能分析

为解析月季PR-10家族基因RhPR10.2在月季花瓣衰老中的生物学功能,采用Real-Time PCR、RACE PCR、异源过表达、VIGS(病毒诱导的基因沉默)等生物技术方法,分析了月季RhPR10.2基因在月季不同开放阶段花瓣中的表达谱,克隆了RhPR10.2基因全长,构建了pSuper1300-RhPR10.2异源过表达载体以及pTRV2-RhPR10.2VIGS载体.结果表明,RhPR10.2基因的表达受月季花瓣衰老显著诱导,其开放阅读框为483bp,编码160个氨基酸,含有PR-10家族特有的P-loop基序;蛋白分子式为C796H1250N204O239S2,分子量为17 566.02,等电点(pI)为6.07;RhPR10.2蛋白与葡萄VvPR10.1亲缘关系最近;与拟南芥野生型植株(WT)相比,异源过表达RhR10.2基因的拟南芥T2代纯合子植株表现出显著延迟叶片衰老的表型,伴随着更高的叶绿素含量以及更低的离子渗透率;此外,与TRV2对照相比,沉默RhPR10.2基因的月季花瓣表现出加速衰老的表型,伴随着更高的离子渗透率以及衰老marker基因RhSAG12的表达.

3种保鲜剂对延缓月季切花衰老的生理作用

3种保鲜剂 (蔗糖、8-羟基喹啉、柠檬酸质量分数分别为 2 .0 %、6× 10 -4 、10 -4 的水溶液 ,Ca(NO3) 2 、8-羟基喹啉、柠檬酸质量分数分别为 0 .0 5 %、2× 10 -4、10 -4的水溶液及 KNO3、8-羟基喹啉、柠檬酸质量分数分别为 0 .0 5 %、4× 10 -4、1.2× 10 -4的水溶液 )均可延长月季“萨蔓莎”切花的寿命 ,其中含蔗糖的保鲜剂作用最显著 ,并可提高花瓣的含水量 ,降低可溶性蛋白质的降解速率 。

现代月季‘大游行’扦插繁殖对比试验

为了获得现代月季Rosa hybrida适宜的扦插繁殖方法,以’大游行’R.hybrida’Parade’为试验材料,分别以不同激素种类(NAA,IBA)、激素浓度(0 mg·L^-1,100 mg·L^-1,300 mg·L^-1)、扦插时间为试验因素对其进行水插和基质扦插繁殖对比试验。结果表明:春季扦插适宜用水插繁殖,在水插前将插穗基部在100 mg·L^-1IBA+300mg·L^-1 NAA的溶液中浸泡2 h,20 d后其生根率可达98.5%,平均根数15.8条,平均根长1.9 cm,根系指数29.6;秋季适宜用扦插基质,插前用100 mg·L^-1IBA+100 mg·L^-1 NAA的溶液中浸泡2 h,45 d后其生根率可达85.0%,平均根数15.7条,平均根长3.9 cm,根系发育指数52.0。两种扦插方法的生根状态有明显区别,基质扦插的插穗基部先长愈伤组织,再萌出不定根,而水插插穗多为节上生根,愈伤组织较少或没有,因此,在处理插穗时,可从节处切断插穗,使营养集中流向节部,可获得更好的生根效果。

低温和6-BA对月季切花的保鲜效果研究

以月季为试材,采用低温(5℃、24 h)+1%蔗糖、低温+1%蔗糖+6-BA10 mg/L、常温黑暗(26℃、24 h)+1%蔗糖+6-BA10 mg/L、常温黑暗+1%蔗糖等4种保鲜处理,探讨了低温和6-BA对月季切花保鲜效果的影响。结果表明:将月季切花用5℃低温预处理24 h后瓶插于1%蔗糖溶液中,能增加切花的瓶插寿命,延长弯颈时间,对增大花径、维持切花鲜重、提高吸水量/蒸腾量比值均具有较好的效果;而在保鲜液中加入植物生长调节剂6-BA,对于延长月季切花瓶插寿命和降低花瓣细胞膜透性均具有一定的效果,但整体保鲜效果不理想。

热带滨海地区切花月季引种与筛选试验研究(英文)

[目的]本研究旨在优选出综合性状优良,适宜在三亚等琼南(包括低海拔)热带地区商业化推广的切花月季品种。[方法]本研究通过在三亚的月季资源圃中设计引种试验和生产试验,观察各品种农艺和经济性状,记录相关参数。[结果]通过观察,从资源圃中挑选出18个品种进行引种筛选试验,并从中选择8个品种进行生产试验。金奖章、芬得拉、萨曼莎、坦尼克的适应性最佳;黑魔术、卡罗拉、金奖章等切花质量可达一级;影星、金奖章和黑魔术产量超过100万枝/hm2;除了金奖章外,其余的7个品种切花插瓶期超过10天;我的选择、卡罗拉和豆蔻年华等抗病虫性较好;卡罗拉、梅朗口红、芬达拉、坦尼克、萨曼莎、金奖章、豆蔻年华、彩云、朝云和红双喜等10个品种较为抗黑斑病;戴安娜、黑魔术、影星和埃里克红等品种的抗黑斑病的能力最差。[结论]切花月季品种能在海南热带滨海地区正常生长发育,三亚等琼南地区是切花月季生产适宜地区;重点防治蓟马和黑斑病。其中梅朗口红、卡罗拉、黑魔术、金奖章、芬得拉、萨曼莎、坦尼克和影星等8个品种综合表现最佳,可大面积推广种植。